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轮状病毒基因重配株LD_9(G_2型)Vero细胞适应株的选育及其生物学特性被引量：3: 2010年; 目的探讨轮状病毒基因重配株LD(9G2型)在Vero细胞上的传代适应性,选育高滴度的适应株。方法将3个轮状病毒基因重配株LD9克隆株(G2型)(LD9-1、LD9-2、LD9-3)在Vero细胞上分别以0.05、0.10、0.15和0.20MOI传代,选育出1株Vero细胞适应株,并确定其最适MOI,然后在Vero细胞上连续传代15代,检测病毒滴度及基因组核酸带型,采用nestRT-PCR法扩增其VP7基因。取第8、10、13代适应株病毒,以0.10MOI接种于Vero细胞,观察病毒的增殖动态。结果选育出的LD9-2株以0.10MOI接种Vero细胞可产生明显的细胞病变(CPE),病毒滴度随传代次数的增加先下降后升高,至4代时最低,9代后稳定于6.75lgCCID50/ml左右;连续传代15次,病毒基因组核酸带型均与原始毒株一致,且均能扩增出502bp的VP7基因。LD9-2株病毒增殖高峰期均出现在第7～8天,病毒滴度为6.00～7.00lgCCID50/ml。结论轮状病毒基因重配株LD9株(G2型)经Vero细胞适应性培养,获得了病毒表达量高且能稳定传代的疫苗候选株。; 寇桂英胡广宏包红王名强陈汉泉汪洲周旭; 关键词：轮状病毒疫苗 VERO细胞生物学特性

流行性感冒灭活疫苗人体免疫效果及评价被引量：3: 2001年; 通过对兰州生物制品研究所试生产的流行性感冒灭活疫苗的人体试验研究。兰州所流感灭活疫苗接种后 ,所有接种对象均未见红肿、硬结等局部反应 ,仅有 1例发生在儿童组的低热全身反应 (体温 37 4℃ ) ,72小时后恢复正常 ,整体副反应发生率 0 2 74% ,肯定了该疫苗的安全性。疫苗接种前后易感人群血清血凝抑制 (HI)抗体阳转率 10 0 %。非易感人群HI抗体几何平均效价 (GMT)增长 19～ 6 0倍 ;抗体 4倍增长率最低为 95 % ,成人组平均值最高 (97 6 7% )。证实该疫苗具有较好的免疫原性。; 赵秦靳毅余黎包红胡广宏安红李益民方捍华李薇; 关键词：流行性感冒灭活疫苗抗体

流行性感冒裂解疫苗的研制被引量：5: 2002年; 作为换代产品 ,流行性感冒裂解疫苗的研制已取得突破性进展。根据WHO有关规程的规定和大量的试验研究结果 ,完整建立了该疫苗的生产工艺和生产质量控制系统 ,完成了“流行性感冒裂解疫苗制造及检定规程”等规定性文件的起草和审核工作 ,以中试规模连续生产了三批疫苗并全部自检合格。通过疫苗稳定性试验、效力试验、异常毒性试验及过敏性试验等观察。; 赵秦余黎周旭靳毅包红胡广宏; 关键词：流行性感冒裂解疫苗

兰州地区宫颈癌组织标本中HPV16感染情况的初步分析被引量：1: 2005年; 人乳头瘤病毒的感染与宫颈癌有密切关系。通过兰州地区宫颈癌患者的HPV感染情况的分析对HPV16与宫颈癌之间的关系进行了研究。采用套式PCR方法,以HPV DNA的早期基因E6,E7和结构基因L1为扩增目的基因,对13份兰州地区宫颈癌组织进行扩增,将扩增阳性片段测序,并与HPV16标准序列进行比较,13份组织中有12份扩增到了HPV的目的基因。证实了HPV与宫颈癌有密切关系。; 余黎周旭胡广宏刘鹏; 关键词：HPV 宫颈癌

复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒被引量：5: 2015年; 目的采用复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒(rotavirus,RV),去除培养液中的残余细胞宿主蛋白和DNA,提高病毒收率。方法将RV LH9毒种接种Vero细胞,制备RV原液,澄清、超滤后,用Capto core 700纯化:样品LH9、LH9+150 mmol/L Na Cl[以缓冲液A(20 mmol/L PB+150 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化分别标记为A、B组合,样品LH9+300 mmol/L Na Cl[以缓冲液B(20mmol/L PB+300 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为C组合,样品LH9+450 mmol/L Na Cl[以缓冲液C(20 mmol/L PB+450 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为D组合,洗脱,收集流穿峰,检测纯化后病毒的滴度和收率、RV RNA、RV抗原性、残余宿主细胞蛋白(HCP)和DNA;并用初步筛选出的纯化组合纯化3批RV超滤浓缩液,检测各项指标,进行进一步验证。结果用20 mmol/L PB+150 mmol/L Na CL缓冲体系和样品中加入150 mmol/L Na Cl的组合纯化RV,病毒收率在80%以上,病毒核酸完整,其抗原性未发生改变,可去除94%以上的HCP,残余DNA符合《中国药典》三部(2010版)标准。结论 Capto core 700纯化RV收率和残余蛋白去除效率均较高,组合B操作相对简便,工艺时间短,病毒收率高,更适于RV的纯化。; 姜英韩平胡广宏王名强包红汪洲周旭; 关键词：CORE 纯化轮状病毒

流行性感冒裂解疫苗临床免疫效果观察被引量：6: 2006年; 兰州生物制品研究所研制的流行性感冒病毒裂解疫苗于2003年9月-12月在广西进行Ⅰ～Ⅲ临床试验，对疫苗的安全性和免疫原性进行考核评价。试验中随机选取852人（6月龄-67岁）接种试验疫苗，227人接种对照疫苗。6—36月龄的婴幼儿接种2针，每次0．25ml，间隔28天；成人接种0．5ml。所有接种对象均未见红肿和硬结等局部反应；发生低热反应（37.1℃-37．5℃）率为3．5％，均于48小时内恢复正常。疫苗接种后易感人群的HI抗体总阳转率为100％，非易感人群的HI抗体几何平均效价增长7．1—16．8倍，抗体4倍增长率为73．1％-91．7％。证实该疫苗具有良好的安全性和免疫原性。; 包红余黎胡广宏安红陈汉泉周旭方捍华刘淑贞李长贵; 关键词：流行性感冒裂解疫苗免疫效果

流行性感冒灭活疫苗的研制被引量：1: 1998年; 将流感病毒接种于鸡胚尿囊腔培养，收集鸡胚尿囊液及羊水，经甲醛灭活后，采用蔗糖速率区带超离心的方法进行提纯经脱糖、紫外照射后，按照《ＷＨＯ生物制品规程》的要求，试制出含有Ａ１型。; 靳毅赵秦余黎李益民史晋芳包红胡广宏白植生; 关键词：流感病毒灭活疫苗提纯

TaqMan实时定量RT-PCR检测轮状病毒G4型: 2010年; 目的应用基于TaqMan探针的实时定量RT-PCR检测轮状病毒(Rotavirus,RV)G4型VP7基因。方法从G1、G2、G3和G4型轮状病毒Vero细胞培养物中提取病毒总RNA,分别进行RT-PCR和实时定量RT-PCR,检测引物及探针的特异性;构建含轮状病毒G4型VP7基因的质粒,制备RNA参考品,绘制实时定量RT-PCR标准曲线;验证实时定量RT-PCR的灵敏度和精密性;对5个轮状病毒G4型培养物及G1、G2和G3型各3个病毒培养物进行检测,分析其实际应用性。结果以轮状病毒G4型VP7基因引物和探针只能从G4型轮状病毒总RNA中扩增出目的基因或检测到荧光信号的扩增,未在G1、G2、G3型轮状病毒总RNA中扩增出目的基因或检测到荧光信号的扩增;在2.34×107～2.34×103拷贝/μl范围内,反应扩增效率大于90%,R2大于0.98;该方法可检出100数量级的RNA样品,且试验内及试验间变异系数分别小于2.5%和4%;用建立的实时定量RT-PCR只检出5个轮状病毒G4型样品,而G1、G2、G3型样品均未检出。结论 TaqMan实时定量RT-PCR是一种灵敏度较高、特异性和精密性良好的定量检测轮状病毒G4型的方法。; 陈继军韩跃武胡广宏白慕群周旭; 关键词：轮状病毒属实时定量RT-PCR TAQMAN探针

轮状病毒基因重配LH9株(G4型)传代稳定性研究被引量：3: 2009年; 对兰州生物制品研究所自行构建的轮状病毒基因重配株G4型LH9株在Vero细胞中传代的稳定性进行研究。将基因重配LH9毒株接种于Vero细胞上从7代传至17代,经电镜检查、病毒滴度测定、病毒基因组RNA电泳图谱分析、基因序列测定分析、轮状病毒型别鉴定及其它相关检定,结果均符合药典要求。证实该毒株为A群G4P〔12〕型轮状病毒,在Vero细胞传代中具有良好的稳定性,为疫苗研制提供安全有效的依据。; 包红胡广宏陈汉泉寇桂英周旭; 关键词：稳定性 VERO细胞

轮状病毒原液不同澄清、超滤方式效果的比较: 2014年; 目的比较轮状病毒(rotavirus,RV)原液不同澄清、超滤方式的效果。方法 RV原液经0.65μm中空纤维微滤或圆片膜澄清后,分别采用750、300、100、300+100 KD中空纤维及100、300 KD膜包进行超滤,比较两种澄清方式所得样品的浊度、病毒滴度、收率和操作时间及各种超滤方式所得样品的病毒滴度、收率、病毒RNA稳定性、抗原性、Vero细胞残余蛋白和残余DNA。结果经0.65μm中空纤维和圆片膜澄清后,病毒收获液的浊度、滴度和收率差异均无统计学意义(P均>0.05),圆片膜澄清时间更短;经300 KD中空纤维超滤后,病毒滴度和收率较高,去除Vero细胞残余蛋白的效果明显,操作更简便。结论 0.65μm中空纤维和膜片澄清RV原液的效果无明显差异;300 KD中空纤维超滤RV原液,在病毒收率及去除残余蛋白方面具有明显优势。; 姜英王明强胡广宏安红包红寇桂英周旭; 关键词：轮状病毒中空纤维超滤

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胡广宏

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