- 禽流感血凝素基因的原核表达及其在亚型诊断中的应用
- 禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一种严重危害禽类健康的急性传染病。该病自1878年意大利鸡群首次爆发该病以来,世界各地都相继有各种亚型的禽流感病毒(AIV)引起的AI暴发,其中H9亚型禽流感最早报道于1966年,20...
- 张瑞华金梅林王贵华喻正军赵思婷李红超陈焕春
- 关键词：禽流感病毒血凝素基因原核表达ELISA
- 文献传递
- 大肠杆菌表达的禽流感病毒NS1蛋白ELISA鉴别诊断方法的建立
- 根据禽流感病毒非结构蛋白（NS1）基因的序列,设计了1对针对NS1基因的特异性引物,从本室自己分离的毒株中扩增了H9N2亚型流感病毒的NS1基因。扩增的DNA片断大小约650bp,将其克隆到pMD18-T载体中,用saI...
- 赵思婷金梅林陈焕春王贵华李红超张瑞华唐勇
- 文献传递
- 高致病力禽流感毒株NP基因的克隆及其在E.coli中的表达
- 以禽流感分离株A/chicken/Hubei/326/2002病毒RNA为模板,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增了NP基因的cDNA,全长1580bp,将此扩增产物克隆进pMD18-T载体,进行了重组质粒...
- 王贵华金梅林赵思婷张瑞华陈焕春
- 关键词：NP基因逆转录聚合酶链反应血清学
- 文献传递
- 禽流感血凝素基因的原核表达及其在H9亚型诊断中的应用被引量：14
- 2005年
- 根据H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物 ,从本室分离并保存的H9N2亚型禽流感病毒中扩增了预计约 16 83bp的血凝素基因 ,将此扩增产物克隆进pMD18_T载体 ,限制性酶切及序列测定后 ,进一步将其亚克隆到pGEX_KG中 ,与GST蛋白融合表达。SDS_PAGE和Western印迹表明缺失信号肽后的HA基因在大肠杆菌中获得了表达 ,表达产物具有免疫学活性 ,融合蛋白的分子量约为 90kD ,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理 ,利用复性产物作为抗原包被酶标板建立了检测H9亚型禽流感抗体ELISA方法。结果表明应用HA重组蛋白作为诊断H9亚型禽流感抗原具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点 ,可用于H9亚型禽流感抗体的检测。
- 张瑞华金梅林王贵华喻正军赵思婷李红超谭亚娣陈焕春
- 关键词：禽流感病毒血凝素基因原核表达ELISA
- 猪流感病毒分离鉴定被引量：6
- 2003年
- 用非免疫鸡胚从我国上海、福建、湖北分离到3株猪流感病毒,分别命名为SSH1、SFJ1和SHB1。SIV分离株第5代病毒液对0.7％豚鼠红细胞的血凝活性分别1:2~8、1:2~7和1:2~8,与H_3亚型标准血清血凝抑制价1:2~8、1:2~7和1:2~8,但不能被鸡新城疫阳性血清所抑制。纯化的病毒在电镜下观察,可见到猪流感典型的病毒粒子。病毒液接种于小白鼠,可表现出临床症状,剖杀后可观察到病毒性肺炎。猪体回归试验,可表现出临床症状和病理变化,从肺脏中可分离到病毒并且RT-PCR也可检测到病毒相应的基因片段。从纯化的病毒中提取RNA,进行RT-PCR,可扩增出预期的条带。
- 伍锐金梅林陈焕春王贵华蒋增海
- 关键词：猪流感病毒
- 猪流感的诊断及防制被引量：4
- 2003年
- 猪流感病毒在一年四季可感染不同日龄、性别和不同品种的猪,引起猪流感.猪流感是一种急性、热性、高度接触性的呼吸道传染病.临床上以突发、高热、流泪、鼻液增多、咳嗽、呼吸困难、精神沉郁为特征.
- 伍锐王贵华金梅林吴斌
- 关键词：病原临床症状猪流感防制
- 鸭源H9N2亚型流感病毒NS基因的克隆及表达被引量：15
- 2004年
- 根据GenBank中收录的H9N2亚型流感病毒的NS基因序列设计合成了 1对引物NSU/NSL ,利用RT PCR扩增出了H9N2株NS基因 ;将该基因片段克隆到 pMD 18 T载体上 ,并对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果 ,获得了NS基因片段的阳性重组子 ,扩增的NS基因包含NS1基因完整的阅读框架和部分NS2基因 ,其序列与GenBank中收录的其他分离株NS基因比较 ,同源性达 96 %～ 99%。再将克隆的NS基因插入到原核表达载体 pET 2 8a后 ,转化E .coliBL2 1(DE3)感受态细胞 ,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达 ,所表达蛋白质的分子质量约为 30ku。
- 赵思婷王贵华张瑞华金梅林陈焕春
- 关键词：H9N2亚型流感病毒NS基因克隆质粒
- 禽流感流行毒株疫苗研制及诊断方法的研究
- 王贵华
- 大肠杆菌表达的禽流感病毒NS1蛋白ELISA鉴别诊断方法的建立
- 禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种禽类的感染或／和疾病综合征。在一定的条件下,禽流感病毒能直接感染哺乳动物,甚至人,不仅给畜牧业的发展带来巨大的障碍,甚至给人类的健康构成新的威胁。已有研究表明,非结构蛋白及其抗体...
- 赵思婷金梅林王贵华李红超张瑞华唐勇陈焕春
- 关键词：禽流感病毒NS1基因ELISA
- 文献传递
- 一种禽流感病毒非结构蛋白基因NS1及其制备方法与应用
- 本发明属于动物病毒学技术领域。公开了一种禽流感病毒的非结构蛋白基因NS1的cDNA序列，用该基因构建原核表达载体；将表达载体转化至大肠杆菌中得到重组菌株(Escherichia coli BL21/pET-28a-NS1...
- 金梅林陈焕春赵思婷王贵华张瑞华唐勇李红超刘正飞钱平郭爱珍方六荣曹胜波吴斌
- 文献传递
