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王峻梅: 作品数：25 被引量：110H指数：7; 供职机构：暨南大学更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金广东省教育厅科研项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生理学生物学环境科学与工程更多>>

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绿色木霉BGL Ⅰ基因在酿酒酵母中的克隆表达及其纤维素乙醇发酵被引量：7: 2009年; 采用反转录PCR方法从绿色木霉AS3.3711的总mRNA中获得了编码β-葡萄糖苷酶Ⅰ(BGLⅠ)的基因bgl1。序列测定表明该基因片段长2 235 bp,编码744个氨基酸残基,与里氏木霉的bgl1序列完全相同。将其插入高拷贝数整合型表达载体PScIKP,构建了重组质粒PScIKP-bgl1。线性化后转化工业酿酒酵母AS2.489菌株,利用高浓度G418筛选高抗转化子,经SDS-PAGE蛋白电泳证明获得了能高效稳定分泌表达重组BGLⅠ的转化子。重组BGLⅠ酶能直接水解培养液中的纤维二糖,在84 h测得酶活最大值为0.978 u/mL。重组BGLⅠ酶最佳反应温度为60℃,最适反应pH为4.0～5.0,并且能以纤维二糖为惟一碳源发酵乙醇,发酵90 h能够用重铬酸钾氧化比色法检测到乙醇的体积分数为0.51%。结果表明:成功克隆并在酿酒酵母中表达了一种高活性的β-葡萄糖苷酶,对于工业上直接利用纤维素为惟一碳源发酵生产乙醇的研究有重要意义。; 刘泽寰唐根云全艳彩龚映雪肖文娟王峻梅; 关键词：绿色木霉酿酒酵母乙醇

毛细管电泳在临床分析中的应用: 2003年; 总结了毛细管电泳在临床分析中应用的一些进展,重点介绍国内外近年来应用毛细管电泳对血液、尿液和脑脊液等成分分析的现状.; 王峻梅陈缵光; 关键词：毛细管电泳 CE 尿液脑脊液高效毛细管电泳 HPCE

毛细管电泳高频电导法测定尿中MDMA及其代谢物被引量：4: 2005年; 建立了尿样中MDMA及其代谢物MDA的毛细管电泳高频电导法检测分析方法。对电泳分离缓冲介质的种类、浓度、pH值以及分离操作电压和进样时间等实验条件进行了优化。缓冲液为2.5mmol LNH4Ac+0.5mmol LHAc+2mmol LSDS+10mmol LβCD,分离电压为15kV时,可实现较好的分离与检测。该法在2 5～80μg mL范围内,MDMA和MDA线性相关系数r分别为0 998和0 999,检出限均为1 0μg mL(S N=3)。不同添加浓度水平尿样,日间和日内RSD均小于5%,回收率均在90%以上,适于法医毒物分析和临床药物监测的需要。; 潘爱华伍新尧李全文王峻梅陈缵光; 关键词：毛细管电泳高频电导检测非接触式电导检测 3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺

绿色木霉EGⅢ基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达被引量：2: 2009年; 通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%。将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2.489,通过SDS-PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析。结果表明:转化子有明显的重组EG Ⅲ表达带,能够产生CMC水解圈,说明eg3基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG Ⅲ的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG Ⅲ的最适温度为60℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉eg3基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达。; 刘泽寰台艳唐根云全艳彩王峻梅肖文娟龚映雪; 关键词：酿酒酵母绿色木霉

酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用被引量：6: 2010年; 构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2,克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec.该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.; 龚映雪台艳肖文娟王峻梅唐根云全艳彩刘泽寰; 关键词：纤维素生物转化绿色木霉内切葡聚糖酶纤维二糖水解酶

毛细管电泳高频电导法测定粉防己药材中的生物碱被引量：15: 2004年; 建立了千金藤属植物粉防己中生物碱测定的毛细管电泳高频电导法,以融硅毛细管(150μm×60cm)为分离柱,1mmol LHAc+2mmol LNH4Ac+10mmol Lβ CD+2mmol LSDS缓冲液为电泳介质,分离电压14.0kV,用高频电导法检测,粉防己药材中粉防己碱和去甲粉防己碱可实现定量分离和检测。探讨了缓冲液的种类、浓度、添加剂、分离电压和进样量对分离和检测的影响;在优化条件下的线性范围分别为:粉防己碱12 5～900μg mL,去甲粉防己碱25 0～900μg mL;检出限分别为:粉防己碱6 25μg mL,去甲粉防己碱12.5μg mL;样品加标回收率分别为92.7%～98.9%和95.9%～101%。; 王峻梅翟海云陈缵光莫金垣; 关键词：毛细管电泳高频电导检测非接触式电导检测粉防己碱粉防己

益母草药材中水苏碱成分的高频电导毛细管电泳法分析被引量：12: 2005年; 建立了益母草药材中水苏碱含量测定的高效毛细管电泳高频电导法,以融硅毛细管(150μm×60cm)为分离柱,H3PO4-NaH2PO4缓冲液为电泳介质(2 0mmol/LNaH2PO4,H3PO4调pH5 0),在12 0kV,柱端高频电导检测了益母草药材中水苏碱的含量,重点探讨了缓冲液的种类、浓度、pH值、分离电压、进样时间、进样高度及毛细管有效长度对检测的影响;该法的线性范围为20 0～1300μg/mL,检出限为2 50μg/mL;结果表明该法快速,简便,结果准确,适用于益母草药材中有效成分的含量测定。; 王峻梅翟海云陈缵光; 关键词：高效毛细管电泳高频电导检测非接触式电导检测水苏碱益母草

毛细管电泳高频电导法测定粉防己药材中生物碱的含量: 建立了千金藤属植物粉防己中生物碱含量测定的毛细管电泳高频电导法。以融硅毛细管(150μm×60cm)为分离柱,1 mmol·L-1HAc+2mmol·L-1NH4Ac+10 mmol·L-1 βCD+2mmol·L-1S...; 王峻梅翟海云陈缵光莫金垣; 关键词：毛细管电泳高频电导检测粉防己碱粉防己; 文献传递

毛细管电泳法测定半枝莲药材及灯盏花素片中野黄芩苷被引量：9: 2008年; 目的建立半枝莲药材及其制剂灯盏花素片中黄酮类化合物野黄芩苷测定的毛细管电泳高频电导法。方法探讨了缓冲液的种类、浓度、添加剂、分离电压和进样量对分离和检测的影响,以石英毛细管为分离柱,1.0mmol/LHAc-15.0mmol/L三乙醇胺(pH8.6)缓冲液为电泳介质,分离电压20.0kV,用非接触式高频电导法检测。结果野黄芩苷的峰形良好,出峰较快,线性范围为0.001～10.0μg/mL,检出限为0.5μg/mL,回收率达99.4%以上。结论为药材及制剂中野黄芩苷的测定提供了一种快速和简便的新方法。; 王峻梅王建伟李全文陈缵光蔡沛祥莫金垣; 关键词：半枝莲灯盏花素片野黄芩苷

毛细管电泳高频电导法测定青风藤药材及制剂中青藤碱的含量被引量：21: 2004年; A method based on capillary electrophoresis with a high frequency conductivity detection was developed for the determination of Sinomenine. The key factors for separation and determination were studied and the best analysis conditions were obtained. In the buffer of 2.0 mmol/L HAc-3.0 mmol/L NaAc-10.0% CH 3OH at a separation voltage of 22 kV, Sinomenine in the sample could be separated and detected within 4 min. The linear mass concentration of Sinomenine is in the range of 1.0—36.0 μg/mL, the limit of detection reached 0.20 μg/mL. The method was used for the analysis of Sinomenine in Sinomenium acutum and tablets satisfactorily with a recovery of 96%—102%.; 翟海云王峻梅陈缵光徐健君蔡沛祥莫金垣; 关键词：毛细管电泳高频电导检测非接触式电导检测青藤碱青风藤

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