王健
- 作品数：11 被引量：14H指数：3
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人ICOS-Ig融合蛋白的真核表达及其生物学活性被引量：3
- 2009年
- 目的:真核表达人ICOS胞外区与IgGFc融合蛋白,并对其生物学活性进行初步分析。方法:以RT-PCR方法克隆人ICOS胞外区片段和人IgGFc片段,定向插入真核表达载体pSecTag2,构建重组质粒pSecTag2-ICOS-Ig,脂质体转染CHO细胞,可溶性表达并纯化ICOS-Ig融合蛋白。采用SDS-PAGE、蛋白质印迹、ELISA对融合蛋白进行鉴定,配体结合活性实验和混合淋巴细胞增殖反应实验检测融合蛋白的活性。结果:构建的ICOS-Ig融合蛋白表达载体在CHO细胞中表达ICOS-Ig蛋白。纯化获得的ICOS-Ig可以与配体ICOSL特异性结合,并抑制同种T淋巴细胞增殖反应。结论:成功构建了人ICOS胞外区与人IgGFc融合蛋白真核表达系统,获得有生物学活性的ICOS-Ig融合蛋白。
- 张鹏秦琴王振猛王健沈茜
- 关键词：真核表达淋巴细胞增殖
- 共刺激分子的新成员—ICOS的研究近况被引量：2
- 2004年
- 可诱导共刺激分子 (ICOS)是最新发现的共刺激分子家族成员。本文对ICOS的生物学性状、ICOS的功能研究及ICOS在疾病病理机制中的作用等方面的研究近况作一综述。
- 王健沈茜
- 关键词：ICOS共刺激分子免疫
- 一种重组融合蛋白及其制备方法及用途
- 本发明涉及可诱导共刺激分子的重组融合蛋白，是功能分子与可诱导共刺激分子融合形成的重组蛋白。本发明可采用基因工程方法、化学方法等常规方法按融合、表达、纯化等基本步骤，即可制备该重组融合蛋白。本发明能特异性地抑制记忆和活化T...
- 沈茜王健张鹏杨佳荟张军
- 文献传递
- 重组可诱导共刺激分子融合蛋白治疗过敏性支气管哮喘小鼠的实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究可诱导共刺激分子融合蛋白(ICOSIg)对过敏性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠的治疗作用。方法32只健康雌性BALB/c小鼠用分段随机分组法将小鼠随机分成4组。哮喘组(A组)、ICOSIg治疗组(B组)、同型抗体对照组(C组)、生理盐水气雾激发对照组(D组),每组8只,采用重组真核表达技术制备ICOSIg,建立鸡卵白蛋白(OVA)免疫小鼠哮喘模型,给予ICOSIg治疗后观察其气道阻力变化、支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、各炎性细胞百分比及白细胞介素4(IL4)、γ干扰素(IFNγ)和总免疫球蛋白E(IgE)含量的变化;采用流式细胞仪(FACS)检测T辅助细胞(Th)亚群变化;取肺组织行病理组织学分析观察肺内炎症情况。结果(1)制备的ICOSIg可与哮喘小鼠脾脏B细胞上相应配体结合。(2)B组小鼠气道压力变化为[(33±12)%],与A组[(58±10)%]比较差异有统计学意义(P<0.01)。B组BALF中细胞总数为[(5.9±3.1)×107/L],与A组[(22.6±5.3)×107/L]比较差异有统计学意义(P<0.01);B组嗜酸粒细胞数为0.020±0.020,与A组(0.070±0.030)比较差异有统计学意义(P<0.01);B组IL4水平为(77±31)ng/L,与A组[(179±44)ng/L]比较差异有统计学意义(P<0.01);B组外周血中总IgE水平为(175±33)μg/L,与A组[(282±22)μg/L]比较差异有统计学意义(P<0.01);B组Th2细胞比例为(4.5±1.0)%,与A组[(11.1±2.5)%]比较差异有统计学意义(P<0.01)。(3)与A组比较,B组小鼠肺内炎性浸润明显减轻、上皮细胞完整、管腔内少见分泌物。结论ICOSIg可体内阻断可诱导共刺激通路、减少Th2免疫反应偏移并抑制IgE的生成,对过敏性哮喘有治疗作用。
- 王健张军龙宪连蔡刚沈茜
- 关键词：可诱导共刺激分子过敏性支气管哮喘BALB/C小鼠细胞总数T辅助细胞
- 可诱导共刺激分子-Ig融合蛋白的理化性质和体内生物学活性分析
- 2010年
- 目的对自行研制的可诱导共刺激分子-Ig融合蛋白的理化性质和体内生物学活性进行分析鉴定。方法采用HCl水解法、Edman法、胰酶消化MALDI-TOF-MS质谱法分别测定该融合蛋白的氨基酸组成、N末端15个氨基酸序列、肽谱等理化性质,并通过CFSE标记体内检测淋巴细胞增殖反应实验研究其抑制同种淋巴细胞增殖的生物学活性。结果氨基酸组成分析测得样品的氨基酸组成与ICOS-Ig理论值基本一致。蛋白N末端15个氨基酸序列为EINGSANYEM-FIFHN,与ICOS-Ig理论值一致。MALDI-TOF-MS质谱测定共获得6个与理论预测值相符的肽段。ICOS-Ig可以明显抑制同种T细胞的体内增殖反应。结论所研制的可诱导共刺激分子-Ig融合蛋白结构表达正确且具有体内抑制同种淋巴细胞增殖的活性,为该融合蛋白的质量标准研究奠定了基础。
- 张鹏王振猛秦琴王健沈茜
- 关键词：氨基酸组成肽谱淋巴细胞增殖
- 一种重组融合蛋白衍生物及其制备方法及用途
- 本发明涉及可诱导共刺激分子的重组融合蛋白衍生物，是对第120位氨基酸进行氨基酸置换后得到的人可诱导共刺激分子或其部分氨基酸片段与功能分子如Ig融合形成的重组蛋白。本发明可采用基因工程方法、化学方法等常规方法按融合、表达、...
- 沈茜王健张鹏杨佳荟张军
- 文献传递
- 重组可诱导共刺激分子融合蛋白治疗过敏性哮喘病的实验研究
- 目的研究可诱导共刺激分子融合蛋白（简称ICOS-Ig）对过敏性哮喘小鼠的治疗作用.方法32只健康雌性BALB/c小鼠用分段随机分组法将小鼠随机分成4组,哮喘组（mIgG/OVA组）、ICOS-Ig治疗组（ICOS/OVA...
- 王健张军龙宪连蔡刚沈茜
- 关键词：可诱导共刺激分子融合蛋白哮喘T辅助细胞亚群
- 文献传递
- 一种重组融合蛋白及其制备方法及用途
- 本发明涉及可诱导共刺激分子的重组融合蛋白，是功能分子与可诱导共刺激分子融合形成的重组蛋白。本发明可采用基因工程方法、化学方法等常规方法按融合、表达、纯化等基本步骤，即可制备该重组融合蛋白。本发明能特异性地抑制记忆和活化T...
- 沈茜王健张鹏杨佳荟张军
- 文献传递
- 可诱导共刺激分子和小鼠免疫球蛋白融合基因的分泌表达及生物学活性被引量：3
- 2006年
- 目的：为获得重组可诱导共刺激分子胞外段与小鼠免疫球蛋白的融合蛋白（ICOS-Ig）并研究其生物学活性，以探讨它作为免疫拮抗剂阻断ICOS／B7RP-1共刺激通路的作用。方法：克隆编码人可诱导共刺激分子（ICOS）胞外片段，与编码小鼠免疫球蛋白IgG恒定片段（Ig）的基因融合，构建ICOS-Ig融合基因及其分泌型真核表达载体pSecTag2／Hygro A-ICOS-Ig；构建融合蛋白的稳定真核表达细胞株，用Western blot和ELISA法检测其表达、流式细胞仪（FACS）检测其配体结合活性、混合淋巴细胞反应（MLR）及细胞因子检测测定其生物学活性。结果：核苷酸序列测定显示克隆基因的核苷酸与Genebank序列一致：ELISA和Western blot检测表明转染细胞有分泌型重组蛋白的表达，其含量可达5～25μg／ml；该重组蛋白有配体结合活性，可体外抑制淋巴细胞增殖、减少IL-2、IFN-γ的分泌。结论：重组ICOS-Ig融合基因及其真核表达载体的构建完成并获得高效表达，该重组蛋白具有配体结合活性，可在体外通过抑制ICOS／B7RP-1共刺激通路抑制淋巴细胞增殖及细胞因子分泌。
- 王健张军沈茜
- 关键词：可诱导共刺激分子真核表达
- 分泌型ICOS-mIg重组融合蛋白定量检测方法的建立和应用被引量：5
- 2005年
- 目的: 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价.方法: 用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白.以羊抗小鼠IgG 为包被抗体,HRP标记的马抗小鼠IgG为检测抗体,通过配对试验、方阵滴定试验及绘制mIgG浓度与A450值的标准曲线,建立定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白的双抗体夹心ELISA法.结果: 建立了双抗体夹心ELISA法,检测的线性范围为7.8～500 μg/L,标准曲线的回归方程为: y=-0.7864+1.1635 log(x),R2=0.9911,P<0.0001.应用该方法可快速检测哺乳动物细胞表达的重组ICOS-mIg融合蛋白的分泌量.结论:建立了一种可快速定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白分泌表达的双抗体夹心ELISA法.该法灵敏、准确、快速、实用性好,对优化ICOS-mIg融合蛋白表达细胞的筛选和大规模制备具有重要价值.
- 王健沈茜
- 关键词：重组融合蛋白ELISA可诱导共刺激分子
