殷向斌 作品数:6 被引量:35 H指数:3 供职机构: 天津科技大学生物工程学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 化学工程 轻工技术与工程 生物学 理学 更多>>
枯草芽孢杆菌ZC-7中性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究 被引量:18 2007年 枯草芽孢杆菌ZC-7的发酵液,经离心分离得到粗酶液,再经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、SephadexG-75柱层析等步骤获得电泳纯的中性蛋白酶。SDS-PAGE测得其分子量大约为42kDa。以酪蛋白为底物时,该酶的Km为5×10-3,Vmax为2.5×104μg/min,酶的最适作用pH为7.0,最适反应温度为55℃,在pH6.5~8.0,40℃以下较稳定,对1mol/Lh2O2具有一定的耐受性。EDTA、异丙醇和乙醇对该酶有抑制作用,Ca2+、Mg2+和Li+离子对其具有保护作用。 赵丛 张敏 王建玲 杜连祥 殷向斌关键词:枯草芽孢杆菌 中性蛋白酶 纯化 高活力中性蛋白酶基因序列的克隆及推理分析 高产突变株ZC-7所产中性蛋白酶与其诱变初始菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398所产中性蛋白酶进行比较,研究结果表明,二者最适反应温度和pH相同,分别为55℃和pH7.5,但比活力前者较后... 杜连祥 赵丛 路福平 张敏 殷向斌关键词:枯草芽孢杆菌 中性蛋白酶 基因序列 文献传递 高活力高碱性蛋白酶发酵和酶制剂开发 路福平 杜连祥 刘敏尧 王海宽 戚薇 王敏 王建玲 王春霞 黎明 孙同毅 王玉 殷向斌 刘晓红 刘靓 陈金发 王艳利 该项目主要通过对高产碱性蛋白酶突变菌株Hap3-26-2进行离子注入诱变,并对其培养基和发酵条件进行了优化。同时还对所产碱性蛋白酶进行了纯化和性质研究。最后对酶的放大实验和酶制剂制作进行了探索。通过对发酵液采用絮凝、硅藻...关键词:关键词:碱性蛋白酶 产中性蛋白酶菌株发酵条件的研究 被引量:9 2007年 对一株产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌的发酵条件进行了优化,确定其最适培养基配方为豆饼粉3%、玉米粉3%、麸皮2.5%、KH2PO40.05%、Na2HPO40.4%,最适摇瓶培养条件为种龄8h、接种量2%、装液量50mL/250mL、摇床转速180r/min、32℃培养33h,中性蛋白酶的摇瓶发酵单位最高可达4830U/mL。 张敏 赵丛 路福平 殷向斌 杜连祥关键词:枯草芽孢杆菌 中性蛋白酶 发酵条件 N^+离子注入技术在中性蛋白酶高产菌株选育中的应用 被引量:3 2008年 为获得中性蛋白酶高产菌株,选用低能(30 keV)N+离子束以不同剂量注入中性蛋白酶产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398,研究其诱变效应,菌株存活率曲线为典型的马鞍型剂量-效应曲线,且在马鞍形区域内具有较高的正突变率。经多次筛选,获得1株稳定高产突变株ZC-12,突变株产中性蛋白酶活力为初始菌株的1.84倍。通过对PCR扩增诱变前后两菌株编码中性蛋白酶基因的DNA序列的测序和比对,在所报道的该酶催化区域内,有3个氨基酸位点发生突变,表明N+离子束注入细胞的辐射诱变方法具有独特的诱变效果,可用于菌种选育。 赵丛 殷向斌 张敏 杜连祥 路福平关键词:枯草芽孢杆菌 中性蛋白酶 离子注入 诱变选育 基因克隆 高活力碱性蛋白酶产生菌的选育与发酵放大 被引量:7 2009年 为了选育高活力碱性蛋白酶产生菌株。采用复合诱变(紫外照射、NTG、离子注入)方法,结合平板初筛与摇瓶复筛。获得一株高产突变株HAPN-169,其酶活力为3.5×10u/mL。高产菌株HAPN-169根据气液接触中体积传氧系数kLa相同的原则发酵放大(7L,30L,200L),其发酵参数为:温度34℃,装液系数0.7,接种量5%,使溶氧维持在20~30%,控制发酵过程pH不低于7.0。在7L发酵罐,发酵时间为54小时,酶活力为3.6×104u/mL;在30L发酵罐,发酵时间为50小时,酶活力为3.86×104u/mL;在200L发酵罐,发酵时间为36小时,酶活力为4.2×104u/mL。发酵液pH在7.5左右时,酶活力在峰值,发酵终点一到,必须马上下罐。该结果对为我国碱性蛋白酶工业发展提供一定的基础。 孙同毅 殷向斌 郝继兴 陈坤 路福平 杜连祥关键词:碱性蛋白酶 离子注入