杨键
- 作品数：33 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国科学院南海海洋研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划海洋公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生化学工程更多>>
- 深海放线菌生淀粉酶基因的克隆表达及酶学特性研究被引量：2
- 2015年
- 从深海放线菌Streptomyces sp.SCSIO03032基因组中扩增到1条含淀粉结合域的水解糖苷13家族基因amy032,该基因编码氨基酸与已知蛋白一致性最高为67%。将amy032插入表达载体pET32a启动子下游,构建重组载体pET-amy。重组质粒导入大肠杆菌Rosseta(DE3)菌株中,SDS-PAGE分析结果显示目的基因成功实现异源表达。Ni-NTA对重组酶进行纯化,并对其酶学性质进行表征。结果表明:重组淀粉酶AMY032的最适作用温度为50℃,最适pH为8.0,以可溶性淀粉为底物时的比酶活为(276±57)U/mg,Km为0.02g/L,Vmax为70mg/(L·min)。Ca2+能提高该酶的催化活性,Ni2+、Cu2+、Zn2+和Mn2+对该酶有抑制作用。AMY032对生玉米淀粉和生大米淀粉具有水解活性,其比酶活分别为(49±12)U/mg和(39±11)U/mg;扫描电镜结果显示AMY032使生玉米淀粉的表面产生明显凹陷。
- 李丽珍杨键田新朋麦志茂苏宏飞龙丽娟张偲
- 关键词：有机物降解克隆表达
- 一种二肽酶突变体及其编码基因和应用
- 本发明公开了一种二肽酶突变体及其编码基因和应用。本发明以一种具有水解有机磷化合物混杂活性的海洋细菌二肽酶OPAA4301（其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示）为蛋白质工程改造起点，运用定点饱和突变和组合突变技术改造...
- 龙丽娟杨键肖运柱田新朋李洁张偲
- 一株芳香烃降解菌及其应用
- 本发明公开了一株芳香烃降解菌及其应用。该降解菌为红球菌(Rhodococcus sp.)SCSIO 21391，该菌株已于2020年7月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61076。该菌株...
- 龙丽娟杨键李茹刘玉
- 文献传递
- 一种微生物包埋微球连续制备装置及方法
- 本发明公开了一种微生物包埋微球连续制备装置及方法。它包括点胶机、步进电机、针筒、漏斗、瓶子、离心管和旋转台，瓶子置于旋转台上，离心管置于瓶中，离心管上部具有胶塞，漏斗的插管穿过胶塞伸入离心管中，漏斗的锥形部分卡于瓶口，在...
- 龙丽娟李洁吴家法杨键张偲
- 文献传递
- 一种角质酶突变体及其对PET高效降解的应用
- 本发明公开了一种角质酶突变体及其对PET高效降解的应用。所述角质酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，是将SEQ ID NO.1所示的野生型角质酶的氨基酸序列第239位的苯丙氨酸替换为丙氨酸。本发明构建的角质...
- 田新朋石松标李青连杨键刘玉曾琦殷建平龙丽娟
- 一种高效降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的新型阿魏酸酯酶及其应用
- 本发明公开了一种高效降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的新型阿魏酸酯酶及其应用。所述阿魏酸酯酶WaFae的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建的阿魏酸酯酶WaFae表征结果显示，该酶最佳酶活温度为70℃，最佳酶活pH...
- 田新朋石松标杨键曾琦李青连龙丽娟
- 大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及其在蛋白酶基因表达中的应用被引量：7
- 2013年
- 利用基因重组技术,以枯草杆菌表达载体pWB980为骨架,插入大肠杆菌的克隆载体pUC18中的抗性基因和复制子,构建穿梭质粒pY980coli。将海洋细菌蛋白酶基因hspa插入pY980coli载体P43启动子下游,导入枯草杆菌WB600中,可实现活性表达。
- 杨键游志庆麦志茂李洁田新朋张偲
- 关键词：穿梭载体蛋白酶分泌表达
- 荧光标记珊瑚组织来源细菌及其与虫黄藻相互作用的显微观察被引量：2
- 2021年
- 【背景】研究珊瑚-细菌、虫黄藻-细菌的相互作用是解析珊瑚健康机理的关键。对珊瑚共附生细菌进行稳定荧光标记有助于原位观察细菌与虫黄藻或珊瑚的相互作用。当前,对于野生型珊瑚共附生细菌遗传操作体系的研究有限,限制了对细菌与珊瑚、虫黄藻原位互作模式的揭示。【目的】建立一种适合专性海洋细菌的遗传操作体系,利用其对珊瑚组织来源细菌进行绿色荧光蛋白标记,用于研究标记菌株与虫黄藻的相互作用。【方法】通过电穿孔的方式将构建好的广宿主重组质粒转入供体菌(Escherichia coli WM3064),然后将供体菌与添加海水才可以生长的受体菌SCSIO 12696(港口球菌科,Porticoccaceae;分离自鹿角杯形珊瑚组织)按供、受体菌细胞数比分别为4:1、2:1、1:1比例混合,在25℃和30℃下于改良LB培养基上接合转移。显微观察标记细菌与虫黄藻相互作用。【结果】改良的LB培养基适用于需海水才可生长的专性海洋细菌的接合转移实验。接合转移的效率与供、受体菌的比例及温度有关。确定优化的接合转移条件为:供、受体菌的比例为1:1,温度为30℃。利用建立的接合转移体系,构建了增强型绿色荧光蛋白标记菌株SCSIO 12696。在激光扫描共聚焦显微镜下能清晰观察到标记菌株SCSIO 12696和虫黄藻在共培养时的相互作用。【结论】建立了适合专性海洋细菌的遗传操作体系,利用其构建荧光蛋白标记菌株可用于虫黄藻-细菌、珊瑚-细菌相互作用的研究,有助于揭示珊瑚共附生细菌的生态作用机制。
- 琚慧敏杨键张偲李洁
- 关键词：荧光标记虫黄藻
- 一种牡蛎来源的新型功能肽及其用途
- 本发明公开了一种牡蛎来源的新型功能肽及其用途。所述的功能肽的氨基酸序列为半胱氨酸‑亮氨酸‑半胱氨酸‑缬氨酸‑亮氨酸‑天冬酰胺‑谷氨酰胺‑谷氨酰胺‑赖氨酸‑缬氨酸‑甘氨酸‑色氨酸‑丙氨酸‑精氨酸。本发明的功能肽具有良好的清...
- 尹浩李茹龙丽娟杨键尹团齐振雄张偲
- 文献传递
- 一种二肽酶突变体及其编码基因和应用
- 本发明公开了一种二肽酶突变体及其编码基因和应用。本发明以一种具有水解有机磷化合物混杂活性的海洋细菌二肽酶OPAA4301(其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示)为蛋白质工程改造起点，运用定点饱和突变和组合突变技术改造...
- 龙丽娟杨键肖运柱田新朋李洁张偲
