李霄 作品数:178 被引量:194 H指数:8 供职机构: 军事医学科学院军事兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 理学 更多>>
利用Cre-loxp系统及EGFP/Brdu双筛选标记构建天坛株痘苗病毒TK基因缺失痘苗病毒载体 研究去除重组痘苗病毒中的筛选基因EGFP,构建一株更加便于筛选的痘苗病毒载体。针对痘苗病毒天坛株复制非必需区TK,利用Cre-loxp系统构建了穿梭载体pSK-PTK-EGFP,与TTVV共转(感)染BHK细胞,通过同源... 阚式绂 金宁一 李霄 王宇航 刘立明 王卓越 齐延新 王金辉 刘广臣关键词:基因缺失 病毒载体 联合应用凋亡素基因、新城疫病毒HN基因及IL-18基因对黑色素瘤的抑制效应研究 被引量:10 2004年 以前的研究结果表明,来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的HN基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应,但上述基因抗肿瘤的机制不同,本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因,IRES启动子下游插入IL-18HN嵌合基因,构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pIRVP3IL-18HN。复制C57BL/6小鼠荷黑色素瘤模型,并将质脂体包裹的重组质粒进行瘤内注射,共注射3次,每次100μg质粒,拟观察凋亡素、新城疫病毒HN基因和IL-18基因以核酸疫苗的形式联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。结果显示pVIL-18HN、pVlL-18和pVVP3IL-18均有抑制肿瘤作用,但pIRVP3IL-18HN组抑瘤率高于pVIL-18HN组、pVIL-18VP3组、pVIL-18组和Hanks液对照组。研究结果提示,上述3种基因联合应用具有协同抑瘤效应。 李霄 金宁一 米志强 连海 孙迎春 李杰 管国芳关键词:凋亡素 黑色素瘤 基因 鸡贫血病毒 双特异性抗肿瘤重组腺病毒对前列腺癌细胞的抑制作用 2012年 目的探讨结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒Ad—hTERTp—Ela—Apoptin(Ad—VT)对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用。方法于96孔板内制备前列腺癌PC一3单层细胞(5×10^3个/孔),分别用100个感染复数(multiplicityofinfection,MOI)、10MOI和1MOI的重组腺病毒Ad—VT、Ad—CMV—Apoptin(Ad—VP3)、Ad—hTERTp—E1a—EGFP(Ad.GT)和Ad—CMV.EGFP(Ad—EGFP)进行感染,以未感染孔为对照,每个剂量设3个复孔。采用96h噻唑盐(MTT)法,检测重组腺病毒埘PC-3细胞的抑制作用。于6孔板制备PC-3单层细胞(1×10^6个/孔),分别用100MOI的Ad—VT、Ad—VP3、Ad-GT和Ad—EGFP感染PC-3细胞,培养48h后,分别应用AO/EB染色法、DAPI染色法、AnnexinV检测法对PC-3细胞进行染色,在显微镜下观察细胞形态,分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式;应用Caspase榆测法对PC-3细胞提取总蛋白,检测Caspase酶活性,分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式。结果MTT法结果显示除Ad.EGFP外,Ad—VT、Ad—VP3和Ad—GT均不同程度地表现出对PC-3细胞的抑制作用,其中Ad—VT、Ad—GT的抑制作用强于Ad—VP3,差异有统计学意义(P〈0.05);培养48、72、96h,随着MOI的增高,Ad—VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定剂量效应关系趋势,感染剂量为100MOI时,Ad.VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定时间效应关系趋势。通过AO/EB、DAPI、AnnexinV检测法和Caspase酶活性检测结果显示,Ad—VT可通过诱导PC-3细胞的捌亡抑制PC-3细胞的增殖。其中AO/EB染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞呈现橘红色;DAPI染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞细胞核呈现亮蓝色,且存在核内物质碎裂;AnnexinV检测法可观测到经Ad—VT感染的PC.3细胞出现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加等凋亡特征;Caspase检测结果显示Ad—VT可明显上调Caspase2、3、6、8� 王金辉 张慕淳 李霄 齐延新 刘广臣 孙丹丹 金宁一关键词:前列腺癌 凋亡素 重组腺病毒 凋亡 一种鸡痘病毒载体穿梭质粒及其应用 本发明提供了一种鸡痘病毒载体穿梭质粒pTGP3,其包括:重组臂TKL和TKR、双向启动子PE/L、荧光蛋白表达盒、抗性标记基因和复制起点ori,在所述双向启动子PE/L上下游分别具有多克隆位点MCSL和MCSR、在所述荧... 金宁一 李霄 李昌 鲁会军 田明尧 金扩世 陈漉 刘妍 高鹏 杨恩成一种HIV复合多表位DNA疫苗及其应用 本发明公开了一种HIV复合多表位DNA疫苗,其是以HIV-1衣壳蛋白p24为载体骨架分子,以ER信号肽作为引导序列,包含有HIV基因组中26个高度保守的免疫优势表位,其中包括3个中和抗体表位和23个CTL表位;1个HIV... 金宁一 李昌 李霄 鲁会军 田明尧 金扩世 申镇维 金洪涛 李臻 付延军文献传递 抗肿瘤重组活载体疫苗 一种抗肿瘤重组活载体疫苗,属于生物技术领域,特别是涉及一种鸡痘病毒活载体疫苗的重组。本发明提供三株分别表达鸡贫血病毒(CAV)凋亡素基因(VP3),鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶基因(HN)和人白细胞介素18基... 金宁一 李霄 米志强 金扩世 孙迎春 李昌 夏志平 金洪涛 管国芳 李杰文献传递 成纤维细胞生长因子21介导TLR/MyD88通路减缓布鲁菌诱导巨噬细胞分泌细胞因子 2017年 为探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)对布鲁菌感染的抗炎作用,本试验检测患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量;体外试验使用FGF21与布鲁菌共培养后检测细菌存活率;分析FGF21对Raw264.7细胞毒性,并以FGF21预处理Raw264.7细胞后,使用布鲁菌侵染细胞,观察细胞因子的释放以及TLR/MyD88信号通路的变化。结果显示,患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量显著升高,FGF21并不影响布鲁菌的存活率且对Raw264.7细胞没有毒性;FGF21预处理后可以抑制布鲁菌侵染诱导的IL-6、TNF-α、MCP1和LDH的释放,并且FGF21可提高IL-10的含量;同时FGF21可降低布鲁菌侵染引起的TLR/MyD88表达的升高。结果表明,患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量显著升高,FGF21通过TLR/MyD88通路缓解布鲁菌侵染诱导的炎性细胞因子的释放。 刘立明 庄昕雨 赵海洋 李霄 赵翠青 金宁一关键词:布鲁菌 成纤维细胞生长因子21 RAW264.7细胞 细胞因子 多联重组痘苗病毒的构建及鉴定 2016年 构建含有埃博拉出血热病毒(Ebola hemorrhagic fever virus,EHFV)小片段分泌蛋白S基因、马尔堡出血热病毒(Marburg hemorrhagic fever virus,MHFV)GP基因、辛诺柏病毒(Sin Nombre virus,SNV)G2糖蛋白基因及非洲欧尼恩病毒(Africa O’nyong nyong virus,O’NNV)E2蛋白基因的重组痘苗病毒。设计含EGFP筛选标记和4种外源基因的穿梭质粒,并利用同源重组技术、荧光筛选技术和Cre/LoxP敲除系统,最终获得四联重组痘苗病毒。使用PCR方法鉴定重组痘苗病毒及其遗传稳定性;用透射电镜观察病毒形态。结果显示:所构建的多联重组痘苗病毒rVTT-J^-4^+具有良好的遗传稳定性,并且具备痘苗病毒的完整形态。结果表明:成功构建了含有4种外源基因的重组痘苗病毒rVTT-J^-4^+,为后续多联疫苗的研究奠定了基础。 李一权 兰添 胡宁宁 姜爽 李敏 曹亮 曹佳媛 范园园 李霄 金宁一关键词:痘苗病毒 同源重组 EGFP 新城疫病毒HN基因对子宫颈癌细胞内线粒体功能的影响 2008年 宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,目前的发病机制尚不完全清楚。现有的研究表明,宫颈癌的发生、发展是由多基因参与的多步骤的复杂过程。新城疫病毒(NDV)HN基因的长度为1734 bp,编码577个氨基酸,蛋白相对分子质量为63000。20世纪60年代,Cassel和Garrett发现,NDV的爆发流行使晚期胃癌患者的转移受到抑制,NDV的抗肿瘤作用因此受到人们的重视并已进入临床研究阶段。 朱继红 岳瑛 金宁一 李霄 孙丽丽 张珏 陈漉 刘立明 张振民关键词:新城疫病毒HN基因 子宫颈癌 线粒体功能 细胞内 妇科恶性肿瘤 相对分子质量 缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选 被引量:4 2011年 通过在E3L同源重组臂中插入含有增强型痘苗病毒早晚期启动子(pE/L)、增强型绿色荧光蛋白基因和同向Loxp(Locus of X-over P1)序列的表达盒构建穿梭质粒pTE-EGFP。利用pTE-EGFP和野生型天坛株痘苗病毒共转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过对绿色荧光蚀斑的10次筛选,构建缺失E3L基因并含有EGFP基因的重组痘苗病毒rTTVV-TE--EGFP+。利用rTTVV-TE--EGFP+和含有Cre(Cyclization recombination)重组酶基因的重组质粒pVAX1-Cre共转染BHK-21细胞,通过对无荧光蚀斑的10次筛选,构建无筛选标记的天坛株痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--,并利用聚合酶链式反应(PCR)对其进行鉴定。鉴定结果显示,rTTVV-TE--中无E3L基因转录和EGFP基因表达。以上结果说明,所构建的痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--完全缺失了E3L基因和外源筛选标记EGFP基因,且具有良好的遗传稳定性。 王宇航 李霄 王浩然 阚式绂 王卓越 齐延新 吴娜 杜寿文 金宁一关键词:病毒载体