李兰兰
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 重组产气荚膜梭菌plc毒素基因植物乳酸杆菌的构建
- 2017年
- 依据乳酸菌的肠道益生作用,选择产气荚膜梭菌关键致病因子α毒素/磷脂酶C为抗原,构建产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段重组植物乳杆菌,利用植物乳酸菌穿梭载体pSIP409构建重组质粒pSIP409-plc,经双酶切鉴定和序列测定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行SppIP诱导表达。Western Blot证明重组蛋白表达成功,并且主要以包涵体形式存在,plc重组蛋白相对分子质量分别为40 kDa。重组质粒pSIP409-plc分别电转化植物乳杆菌NC8细胞,PCR和双酶切鉴定正确后进行SppIP诱导表达。Western Blot和间接免疫荧光鉴定表明,构建的重组植物乳酸杆菌具有诱导分泌plc蛋白的能力,可作为黏膜免疫的候选抗原。
- 张艳周庆民冯万宇徐馨黄健王新李兰兰郑晓星宁秀云李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌植物乳酸杆菌
- 鸡氨肽酶N噬菌体高亲和配体筛选及其抑制IBV感染研究
- 研究目的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)为鸡传染性支气管炎(IB)的病原,属冠状病毒科冠状病毒属。氨肽酶N(APN)是细胞表面的一种金属糖蛋白,是大多数I型和II型冠状病毒的细胞受体。在之前的研究中,我们发现IBV可以与天...
- 孙晓琦李兰兰潘龙李伟群陈慧杰黄小丹张瑞莉李广兴
- 关键词：IBV噬菌体亲和配体氨肽酶
- 文献传递
- 鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究
- 2015年
- 试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。
- 李广兴李兰兰潘龙洪琴张恒杨巍黄小丹马德星张瑞莉杨贵君
- 关键词：多克隆抗体间接免疫荧光
- A型产气荚膜梭菌重组α毒素对小鼠的致病性研究被引量：1
- 2015年
- 为了研究A型产气荚膜梭菌α毒素(PLC)的致病性,采用PCR扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,构建重组质粒pGEX-plc,经IPTG诱导表达获得重组蛋白PLC。对纯化鉴定后的PLC蛋白进行细胞毒性试验,结果显示,感染后第4小时Hela细胞开始出现病变,并随时间延长而逐渐严重,说明α毒素对Hela细胞有毒性作用。进一步建立小鼠病理模型,重组PLC蛋白接种组与阳性细菌感染组的病理变化显示,小鼠发病迅速,腹部膨大,肠道臌气明显;组织学观察结果显示,被感染小鼠内脏器官出现不同程度的病理变化,以小肠各段尤为明显,表现为肠黏膜损伤、绒毛脱落等。上述结果为A型产气荚膜梭菌致病机制的研究奠定了基础。
- 乔艺然李兰兰郑晓星王莹莹聂思静任玉东李广兴黄小丹杨贵君
- 关键词：产气荚膜梭菌气性坏疽Α毒素细胞毒性试验
- 产气荚膜梭菌NetB毒素基因重组植物乳酸杆菌疫苗免疫的组织学研究被引量：2
- 2018年
- 为了评估表达产气荚膜梭菌NetB毒素的重组植物乳酸杆菌口服活菌疫苗对鸡的免疫保护效果,分别进行了重组活菌疫苗的免疫和产气荚膜梭菌攻菌试验。设置3组免疫组雏鸡,于7~28日龄分别连续免疫pSIP409空载体植物乳酸杆菌、pSIP409-Net B重组植物乳酸杆菌和灭菌PBS;设置4组攻菌组雏鸡,免疫方法同上,免疫后于43~47日龄连续口服产气荚膜梭菌(设置PBS免疫组不攻菌只口服等量PBS对照)。通过免疫后肠道分离重组菌、病理组织学检查疫苗对雏鸡组织器官有无损害作用及保护作用;攻菌后细菌分离计数、剖检肠道病变评分来评价疫苗的免疫水平。结果显示,免疫后2周仍可在免疫鸡的小肠、盲肠段分离到重组菌;组织学检查发现与对照组相比重组疫苗的免疫没有对雏鸡组织器官产生损害作用;NetB攻菌组的肠道损伤情况较空载体攻菌组和PBS攻菌组轻微;NetB攻菌组的肠道病变评分低于空载体攻菌组和PBS攻菌组。表明所构建的重组口服活菌疫苗安全有效,结果为重组植物乳杆菌表达系统作为口服疫苗应用提供了理论依据。
- 张艳周庆民冯万宇徐馨黄健王靓靓李兰兰王莹莹郑晓星李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌植物乳酸杆菌组织学检查
- 重组产气荚膜梭菌plc基因植物乳酸杆菌的免疫效果评价
- 2018年
- 为了评估表达产气荚膜梭菌α毒素plc基因的重组植物乳酸杆菌口服活菌疫苗的免疫保护效果,分别进行了重组活菌疫苗的免疫和产气荚膜梭菌攻菌试验。免疫组雏鸡分为3组,于7~28 d分别连续免疫p SIP409空载体植物乳酸杆菌、pSIP409-plc重组植物乳酸杆菌和灭菌PBS;攻菌组雏鸡免疫方法同上,于43~47 d连续口服产气荚膜梭菌(设置PBS免疫组不攻菌只口服等量PBS对照)。通过病理组织学检查疫苗对雏鸡组织器官的损害作用; ELISA检测抗体动态变化、攻菌后细菌分离计数、剖检肠道病变评分、雏鸡体重变化和免疫器官发育情况来整体评价疫苗的免疫水平。结果显示,与对照组相比重组疫苗的免疫没有对雏鸡组织器官产生损害作用,plc特异性抗体IgG和s IgA水平检测显示,抗体水平随日龄增长呈现上升趋势,且与未免疫组有显著和极显著差异(P <0.05,P <0. 01);攻菌后免疫组雏鸡各项指标在短暂下降后很快升高,且明显高于未免疫组雏鸡。攻菌组各项试验也证明,我们的重组口服活菌疫苗对产气荚膜梭菌攻击雏鸡起到很好的保护作用。
- 张艳周庆民冯万宇徐馨黄健王新李兰兰王莹莹郑晓星宁秀云李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌植物乳酸杆菌免疫保护
- 产气荚膜梭菌NetB毒素基因重组植物乳酸杆菌的构建
- 2017年
- 选择产气荚膜梭菌坏死性肠炎毒素B(NetB)为抗原,构建产气荚膜梭菌NetB毒素基因重组植物乳酸杆菌,利用植物乳酸杆菌穿梭载体pSIP409构建重组质粒pSIP409-NetB,经双酶切鉴定和序列测定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行SppIP诱导表达。Western blot证明重组蛋白表达成功,并且主要以包涵体形式存在,NetB重组蛋白相对分子质量为36 ku。重组质粒pSIP409-NetB电转化植物乳酸杆菌NC8细胞,PCR和双酶切鉴定正确后进行SppIP诱导表达。Western Blot和间接免疫荧光鉴定表明构建的重组植物乳酸杆菌具有诱导分泌NetB蛋白的能力,可作为黏膜免疫的候选抗原。
- 张艳周庆民冯万宇徐馨黄健王新李兰兰郑晓星李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌植物乳酸杆菌
- 鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验被引量：5
- 2015年
- 对哈尔滨市3个鸡场送检疑似鸡坏死性肠炎病例进行了病理剖检和细菌分离,从菌落、菌体的形态、生化特性、PCR鉴定、病理组织学检查和细菌致病性等方面对病原菌进行了鉴定。结果表明,病原菌为厌氧的革兰阳性短杆菌,在含卵黄的TSC培养基上形成周围带白浊环的黑色圆菌落,能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖和紫牛乳;PCR鉴定及致病性试验表明分离的细菌为产气荚膜梭菌,且有致病性。药敏试验显示,分离菌株对青霉素等5种药物高度敏感;对新霉素等4种药物耐药。
- 张艳李兰兰黄艺华王莹莹解真真张自强郑晓星黄小丹杨贵君张瑞丽刘思国李广兴
- 关键词：鸡坏死性肠炎产气荚膜梭菌药敏试验
- 产气荚膜梭菌EF-Tu基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 通过PCR方法扩增产气荚膜梭菌ATCC13124株EF-Tu基因,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-EF,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli Rosseta,进行IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫大白兔制备多克隆抗体,应用间接ELISA、Western-blot和间接免疫荧光方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导5h后蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为69ku。间接ELISA方法检测的多抗血清效价为1∶262 144。Western-blot结果证实,重组蛋白与产气荚膜梭菌ATCC13124株制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的免疫原性。Western-blot和间接免疫荧光结果表明,多抗血清能分别与pGEX-EF重组蛋白、ATCC13124菌体裂解液、pcDNA3.1-EF-Tu瞬时转染后的BHK-21细胞及ATCC13124感染的小鼠肠组织中菌体发生特异性结合反应。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。
- 解真真郑晓星李广兴张艳李兰兰
- 关键词：产气荚膜梭菌多克隆抗体WESTERN-BLOT
- 产气荚膜梭菌NetB毒素基因重组植物乳酸杆菌疫苗免疫保护性研究被引量：1
- 2017年
- 为了评估表达产气荚膜梭菌NetB毒素的重组植物乳酸杆菌口服活菌疫苗对鸡的免疫保护效果,分别进行了重组活菌疫苗的免疫和产气荚膜梭菌攻菌试验。免疫组雏鸡分为3组,于7~28日龄分别连续免疫p SIP409空载体植物乳酸杆菌、p SIP409-NetB重组植物乳酸杆菌和灭菌PBS;攻菌组雏鸡免疫方法同上,于43~47日龄连续口服产气荚膜梭菌(设置PBS免疫对照组和不攻菌只口服等量PBS对照组)。通过采用ELISA检测抗体动态变化,观察雏鸡体重变化和免疫器官发育情况以评价疫苗的免疫效果。结果显示,NetB组特异性抗体Ig G和s Ig A水平随日龄增长呈现上升趋势,且与未免疫对照组存在显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);NetB攻菌组各项指标在短暂下降后很快升高,且明显高于未免疫对照组雏鸡(P<0.01)。NetB组周增重14日龄后均高于其他组,且35日龄开始与其他组差异极显著(P<0.01);攻菌组体重变化总趋势是NetB攻菌组最高,其次是空载体攻菌组(P<0.05),PBS攻菌组最低(P<0.01)。免疫组在免疫结束时胸腺和脾脏指数呈明显上升趋势,NetB组的这两项指数分别在56日龄和49日龄达到最高,法氏囊指数在28日龄下降,随后稳步上升;虽然攻菌后各免疫器官指数上升趋势变缓,但NetB攻菌组的各项指数在各时间点均与其他组差异极显著(P<0.01)。表明重组口服活菌疫苗对产气荚膜梭菌攻击雏鸡起到很好的保护作用,所构建的重组疫苗安全有效,结果为重组植物乳酸杆菌表达系统应用于口服疫苗提供了理论依据。
- 张艳周庆民冯万宇徐馨黄健王靓靓李兰兰王莹莹郑晓星李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌植物乳酸杆菌免疫保护
