张文萍
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- bcr-abl反转录病毒介导的慢性粒细胞白血病样小鼠二次移植模型的建立被引量：1
- 2009年
- 目的:构建bcr-abl反转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)样二次移植模型,为深入研究CML的发病和治疗机制奠定可靠的基础。方法:收集已成功建模的由bcr-abl反转录病毒介导的CML样模型小鼠的骨髓细胞或脾细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量γ射线(450 cGy)照射的同种雌性受体鼠,进行造血组织的形态学观察、Y染色体及其特异性性别决定基因Sry的检测以及bcr-abl mRNA和蛋白水平表达的检测,分析鉴定CML样小鼠二次移植模型情况。结果:移植后12 d,肉眼可见明显的脾结节形成,连续切片可见成堆脾集落。移植4~5周后,在雌性受体小鼠骨髓中检出相似Y染色体及Y染色体特异性Sry基因,骨髓和脾脏中检出bcr-abl融合基因。移植10~12周后外周血白细胞水平升高至正常未处理小鼠的4~8倍,粒系细胞水平明显升高至(20~32)×109个/L,外周血涂片幼稚细胞占10%~20%;骨髓涂片结果显示粒系细胞显著增多,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;同时,在肝脏中检测出bcr-abl融合基因,骨髓中检测出bcr-abl融合蛋白的表达。移植18周后,外周血涂片幼稚细胞占30%以上,小鼠发生急性变,最终因肺出血相继死亡。结论:本研究成功建立了bcr-abl反转录病毒介导的小鼠CML样二次移植模型,该模型可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究。
- 张文萍黄世峰袁颖王雅珍温健萍曹唯希黄宗干冯文莉
- 关键词：融合蛋白质类异种移植模型抗肿瘤试验小鼠近交BALB/C
- bcr/abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立
- 慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是一种起源于异常多能造血干细胞的克隆增殖性疾病，bcr/abl融合基因的持续表达在该病的形成过程中起重要作用。目前，国内对CML发病机制和治疗的...
- 张文萍
- 关键词：慢性粒细胞白血病动物模型骨髓细胞
- 文献传递
- bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立被引量：4
- 2008年
- 目的：构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病（CML）样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法：bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampo细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线（900cGy）照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果：小鼠移植8-9 wk后,外周血白细胞达2×10^10-3×10^10/L（为对照鼠的5-8倍）,外周血涂片幼稚细胞达到0.10-0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4-5 wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8-9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3-5 mo后相继死亡.结论：成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究.
- 张文萍冯文莉黄世峰史梦王雅珍曾建明李惠温健萍陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病逆转录病毒载体动物模型
- 稳定表达BCR／ABL的小鼠BaF3-P210细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：12
- 2008年
- 目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P210细胞。用PCR、DNA测序、RT-PCR和Westernblot检测bcr/abl基因在靶细胞中的整合和表达;用台盼蓝细胞计数法、流式细胞仪(FCM)和MTT法研究BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。结果bcr/abl基因整合在BaF3细胞基因组中,BaF3-P210细胞能稳定表达bcr/abl基因及其蛋白。与对照组相比,BaF3-P210细胞增殖速度增快(P<0.05);G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞比例增高(P<0.05);经STI571处理后的细胞增殖抑制率为(54.08±1.90)%(P<0.05),早期凋亡率为(12.35±2.04)%(P<0.05)。结论成功构建的能稳定表达BCR/ABL的小鼠BaF3-P210转化细胞株具有增殖能力增强、细胞周期进程加速和对STI571敏感的恶性表型特征。
- 史梦冯文莉张文萍王小中黄世锋曾建明温健萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因逆转录病毒载体
- 酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响被引量：1
- 2008年
- 目的建立人类慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562细胞在伊马替尼（Imatinib mesylate）处理前、后的DNA损伤模型，探讨伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响。方法用噻唑蓝（MTT）法确定伊马替尼预处理K562细胞的浓度；用免疫印迹法（Western blot）检测伊马替尼处理后K562细胞BCR／ABL的磷酸化状态，以反映BCR-ABL酪氨酸激酶活性受抑制情况；用彗星实验检测不同浓度过氧化氢（H2O2）诱导的K562细胞、伊马替尼预处理K562细胞的DNA损伤模型；用彗星实验对各组细胞在DNA损伤后的修复进行动态观测。结果MTT实验结果显示，伊马替尼预处理K562细胞的最佳终浓度为1μmol／L，作用时间24h；Westernblot实验结果显示，该浓度的伊马替尼可有效抑制BCR／ABL融合蛋白第177位酪氨酸激酶磷酸化，密度比为0．100±0．018，与对照组（0．425±0．039）相比，降低了（77．11±5．59）％，差异有统计学意义（t=4．57，P〈0．05）；彗星实验确定了各组细胞DNA损伤模型的建立条件，采用10μmol／L终浓度的H2O2对K562细胞和伊马替尼预处理后K562细胞进行染毒，H2O2作用温度和时间为4℃、10min。修复结果显示，经伊马替尼预处理的K562细胞修复时间为120min，与未处理组修复时间60min相比，前者DNA损伤修复时间明显延长（F=97．79，P〈0．05）。结论本研究建立了伊马替尼处理前、后的白血病K562细胞的DNA损伤模型，BCR／ABL融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能减弱K562细胞的DNA损伤后修复能力。
- 史梦冯文莉黄世峰曾建明王小中温健萍张文萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗千
- 关键词：K562细胞哌嗪类DNA修复
- bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测.结果:彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50μmol/L终浓度的H2O2对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10min.BaF3-P210细胞与BaF3-MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60min即可达到完全修复,而后者在损伤后120min才能完全修复(P<0.05).结论:建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3-P210细胞的DNA损伤后修复能力.
- 史梦冯文莉黄世峰曾建明王小中温健萍张文萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：DNA损伤DNA修复
- bcr-abl对白血病K562细胞DNA损伤修复的影响
- 目的：从 DNA 损伤修复的角度探讨 bcr-abl 融合蛋白在慢性粒细胞白血病发病和耐药中的作用。方法：(1)建立 K562细胞的实验性 DNA 损伤模型：K562细胞分别用1、10、100、 1000μmol/L 终...
- 史梦冯文莉曾建明王小中张文萍黄世峰罗红伟朱喜丹
- 文献传递
