崔京霞 作品数:18 被引量:101 H指数:4 供职机构: 河北医科大学药学院 更多>> 发文基金: 河北省自然科学基金 河北省应用基础研究计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
从噬菌体展示十二肽库中筛选钠泵α_1亚基M1-M2膜外区特异性结合肽 2010年 目的获得人钠泵α1亚基M1-M2膜外区的特异性结合肽,以阻断或拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用,为高血压的治疗提供理论和实验依据。方法以人工合成的钠泵α1亚基M1-M2膜外区多肽(ATEEEPQNDN-LGGGS)为靶分子,从噬菌体随机12肽库淘选能与之特异性结合的多肽,通过双夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和浓度依赖性实验鉴定噬菌体阳性克隆,提取DNA测序,推导其氨基酸序列,并检测其对哇巴因的竞争性拮抗作用。结果从噬菌体12肽库中筛选出4个阳性噬菌体克隆,测序后其氨基酸序列完全一致,均为:WHWRNPDF-WYLK。哇巴因竞争性抑制试验显示,获得的噬菌体展示肽可以与哇巴因竞争钠泵α1亚基M1-M2膜外区结合表位,阻止哇巴因与钠泵结合。结论获得了人钠泵α1亚基M1-M2膜外区的特异性结合肽,它能竞争性抑制哇巴因与钠泵的结合,为进一步探讨钠泵的作用机制及高血压的治疗奠定了基础。 刘志文 连易水 李蝉 张玥 王永利 王伟 赵兴茹 崔京霞关键词:钠泵 噬菌体随机肽库 结合肽 Structure identification for compound I separated and purified from taxoids-produced endophytic fungi (Alternaria. alternata var. taxi 1011) 2003年 Endophytic fungi are widely found in almost all kinds of plants. Many endophytic fungi can produce some physio-logical active compounds, which are same to or analog to those isolated from their hosts. Producing physiological active com-pounds through microbial fermentation can give a new way to resolve resource limitation and to find out alternative source. Through the methods of organic solvent extraction, thin layer chromatography (TLC) and column chromatography, compound I was isolated, purified from the liquid fermentation metabolites of the taxoids-produced endophytic fungi (Alternaria. alternata var. taxi 1011 Y. Xiang et LU An-guo) that was screened from the bark of Taxus. cuspidata Sieb.et Zucc.. Compound I was identified as one kind of taxoids type III, based on the analyzing results by using the methods of ultraviolet spectroscopy (UV), infrared spectroscopy (IR), mass spectrometry (MS) and nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR). This study provides a com-pleted method for separation and purification of the endophytic fungi as well as structure identification of its fermentation me-tabolite 项勇 刘君 呂安国 崔京霞关键词:TAXOIDS 靶向肿瘤多药耐药基因MDR1 siRNA的设计与筛选 被引量:1 2016年 本研究主要考察siRNA对于逆转P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药的作用。以MDR1基因为靶标,在线设计MDR1基因的siRNA序列并利用生物学软件进行优化,经化学合成后转染入体外培养的乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR中,经实时定量荧光PCR和Western blot定量分析MDR1基因的表达,以MTT法检测转染细胞对多柔比星的敏感性。最终设计并合成了8条MDR1基因siRNA序列,其中4条能有效抑制MDR1基因mRNA的表达。siRNA1沉默效率最高,可特异性地沉默MDR1基因,有效逆转乳腺癌细胞的多药耐药性。 问天娇 刘东璐 田勤 崔京霞关键词:小干扰RNA P-糖蛋白 多药耐药 基因沉默 定点突变提高IL-4免疫毒素对淋巴瘤的选择性和杀伤活性 2005年 采用软件分析选择与IL-4分子结合与活性相关的重要位点13T,121R,通过定点突变得到IL-4突变基因cpIL4(13D121E),将其与绿脓杆菌外毒素突变基因PE38KDEL融合,成功地构建了编码免疫毒素cpIL4(13D121E)-PE38KDEL的融合基因.该基因在原核表达系统中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的30%以上.表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,进行细胞毒性实验,证明其对表达型IL-4受体的淋巴瘤细胞Daudi具有良好的细胞毒作用,活性是同类型IL-4免疫毒素的2倍,而对表达型IL-4受体的内皮细胞活性较低. 崔京霞 纪剑飞 吕安国 吴文芳关键词:免疫毒素 绿脓杆菌外毒素 卡铂长循环脂质体的制备及其在大鼠体内的药动学 2022年 该研究采用被动载药的方式制备了分别含卡铂20和10 mg/ml的卡铂长循环脂质体A、B,对其理化性质进行了分析,并应用原子吸收光谱法测定血浆中的药物浓度以评价其在SD大鼠体内的药动学行为。研究结果表明,制得的卡铂脂质体分散性、流动性、重现性良好,粒径约为100 nm。卡铂长循环脂质体A、B的AUC分别为(1667.87±642.98)和(1359.43±583.61)h·mg·L^(-1),c_(max)分别为(96.72±27.21)和(63.04±22.15)mg/L,t_(1/2)分别为(15.02±5.72)和(22.90±5.64)h,在同等给药剂量下与游离药物组相比,均显著提高。卡铂长循环脂质体可延长药物在血液中的循环时间,有利于提高药物在肿瘤组织中的浓度,进而增强疗效,有望为卡铂新剂型的研究提供思路和参考。 问天娇 李思颖 李蝉 张欣娜 崔京霞关键词:卡铂 长循环脂质体 原子吸收光谱法 药动学 装载siRNA的纳米阳离子脂质体在小鼠体内的药代动力学研究 被引量:1 2022年 目的:探讨siRNA药物的体内药代动力学评价方法,并分析脂质体作为药物载体的优势。方法:采用前期已构建的siRNA表达质粒及装载了该质粒的纳米隐形阳离子脂质体,将实验分为裸siRNA质粒组和siRNA质粒脂质体组,分别进行DNaseⅠ酶切和血清中稳定性的检测。再将20μg siRNA裸质粒及siRNA质粒脂质体通过尾静脉注射进入小鼠体内,分别在注射后0 min、5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、12 h、24 h取血,采用实时荧光定量PCR方法(qPCR)对小鼠体内裸质粒及质粒脂质体进行定量检测,计算各时间点siRNA质粒的浓度。结果:裸质粒在DNaseⅠ中仅20 min就全部降解,质粒脂质体降解较缓慢,到24 h仍有(20.16±2.47)%的DNA残留;裸质粒在80%血清中20 min时仅残留(11.03±0.92)%,在1 h时基本全部降解,质粒脂质体在80%血清中24 h时仍残留(10.26±1.04)%,与裸质粒组相比,脂质体作为载体使siRNA表达质粒在DNaseⅠ及血清中的稳定性显著提高(P<0.05)。在小鼠体内脂质体包裹的质粒半衰期约为2 h,而裸质粒仅为6 min,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:利用qPCR方法可以完成siRNA脂质体的体内检测。阳离子脂质体能够保护核酸类药物进入体内,是一种高效的递送载体,同时脂质体能够提高药物的体内稳定性,延长药物的作用时间。 问天娇 陈欣然 白靖 郑颖 王雅鹃 于佩佩 崔京霞关键词:小干扰RNA 阳离子脂质体 核酸定量检测 药代动力学 一种白介素-4突变基因IL-4-13及其制备和应用 本发明涉及基因重组技术,具体地说是一种白介素-4(IL-4)突变基因IL-4(13D)及其制备和应用,突变基因IL-4(13D)具有序列表SEQ ID NO:1中碱基序列;是以天然的人IL-4基因为基础,利用重叠PCR,... 吴文芳 崔京霞 吕安国 倪剑锋文献传递 定点突变提高IL-4免疫毒素对淋巴瘤的选择性和杀伤活性 IL-4受体在神经胶质瘤、淋巴瘤等许多肿瘤细胞表面表达量很高,构建导向IL-4受体的免疫毒素,是肿瘤治疗的一个热点方向。通过软件分析,选择与IL-4分子的结合与活性相关的重要位点13T,121R,通过定点突变得到IL-4... 崔京霞 纪剑飞 吕安国 吴文芳关键词:免疫毒素 白细胞介素-4 绿脓杆菌外毒素 文献传递 人钠泵α2亚基M4~M5区片段的克隆、原核表达与纯化 2010年 目的构建钠泵α2亚基第4跨膜区与第5跨膜区之间的蛋白结构域M4~M5的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法通过PCR反应和酶切技术,构建表达载体pET28b(+)-M4-5,并于大肠杆菌E.coliRosetta2进行表达,用6mol/L盐酸胍对表达形成的不溶包涵体进行变性,梯度稀释复性后,用Ni-NTA亲和柱进行纯化,得到目的蛋白,用Westernblot分析表达产物,并采用无机磷法测定其ATP酶活性。结果重组表达载体pET28b(+)-M4-5经酶切与测序鉴定证实构建成功;导入大肠杆菌Rosetta2进行表达,表达产物相对分子质量为52×103左右,与预期值相符,表达量占细胞全蛋白的30%左右;SDS-PAGE分析表明,表达产物主要以包涵体形式存在,亲和柱纯化后,目的蛋白的纯度在95%以上;Westernblot分析表明表达产物与抗His抗体特异性结合;重组蛋白的ATP酶活性为(15.3±1.8)mmol·(g·h)-1。结论构建了原核表达载体pET28b(+)-M4-5,并在大肠杆菌Rosetta2中成功表达,亲和纯化获得较高纯度的M4~M5融合蛋白。 刘志文 连易水 张玥 王永利 王伟 赵兴茹 崔京霞关键词:表达纯化 包涵体 复性 模拟缺血对豚鼠心室肌细胞Na^+/K^+泵电流的影响 2009年 目的观察模拟缺血对心室肌细胞Na+/K+泵电流的影响。方法采用胶原酶酶解法分离豚鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳方法记录心室肌细胞的Na+/K+泵电流(Ip)。采用代谢抑制剂2-脱氧葡萄糖和碳酸氰-4-三氟甲氧基苯腙模拟缺血灌流,造成细胞的模拟缺血,观察模拟缺血对心室肌细胞Ip的影响,并探讨模拟缺血对双氢哇巴因(DHO)高亲和力Ip和DHO低亲和力Ip的影响。结果模拟缺血2.5min时Ip抑制率为(30.15±0.05)%,与4.0min时的(49.33±0.02)%比较差异有统计学意义(P<0.05);6.0min时Ip抑制率为(62.27±0.04)%,与4.0min时的比较差异有统计学意义(P<0.05);Ip抑制程度随缺血时间延长而增加(r=0.82,P<0.05)。模拟缺血特异性抑制DHO低亲和力Ip,而不影响DHO高亲和力Ip。结论模拟缺血对DHO低亲和力Ip的特异性抑制作用,可能是缺血所致心室肌细胞内Na+浓度升高的主要因素之一。 张哲 崔京霞 王永利关键词:NA(+)K(+)交换ATP酶 心肌缺血