寿成超
- 作品数：12 被引量：57H指数：6
- 供职机构：北京医科大学临床肿瘤学院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源噬菌体抗体库中血管内皮细胞生长因子抗体的筛选及活性鉴定被引量：1
- 2000年
- 目的 从人噬菌体Fab抗体库中筛选抗人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)抗体克隆 ,并对其特异性及活性进行分析 ,为后续工作奠定基础。方法 从不同人群外周血淋巴细胞提取总RNA ,经逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)分别扩增轻、重链抗体Fab段 ,用噬菌体表面呈递技术构建抗体库 ,经过 4轮固相筛选及单克隆差异筛选 ,获得能结合VEGF的抗体克隆。在此基础上通过ELISA、Westernblot和3 H TdR参入分别对所获抗体克隆的特异性及中和活性进行分析 ,并对阳性克隆DNA进行测序分析。结果 构建了 1.5× 10 8人组合噬菌体抗体库 ,并筛选获得了结合VEGF的人噬菌体抗体Fab段。Westernblot表明所获抗体能较好结合VEGF ,3 H TdR参入实验显示其中一株抗体可中和VEGF引起的内皮细胞增殖作用。DNA序列分析表明所获抗体片段为人源VH6亚群抗体重链基因和VJC重排后的VL4亚群抗体轻链基因。结论 利用噬菌体抗体库技术可直接获得特异人源VEGF抗体 ,为进一步通过基因工程改造 ,获得有临床应用价值的VEGF抗体提供了新的可能性。
- 田学军寿成超董志伟
- 关键词：内皮生长因子VEGF抗体
- p53单抗M126在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义被引量：2
- 1999年
- 目的探讨Ｍ１２６与膀胱移行细胞癌的组织学分级和病理分期之间的关系。方法用ＰＣＲ扩增编码ｐ５３Ｎ端１８０个氨基酸的ＤＮＡ片断并将其克隆在谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）的表达质粒ＰＧＥＸ２Ｔ中。用重组质粒转化大肠杆菌，诱导产生ｐ５３ＧＳＴ融合蛋白，免疫小鼠，制备Ｍ１２６单抗。用Ｍ１２６对６０例膀胱移行细胞癌石蜡切片进行免疫组化染色，结果４６例（７７％）表达融合蛋白，平均阳性细胞指数为（３４５±２９．０）％，并与肿瘤的组织学分级和病理分期相关（Ｐ＜０００１，Ｐ＜００５）。与进口单抗ＰＡｂ１８０１相比较，Ｍ１２６识别不同的抗原表位，染色强度和阳性细胞指数均明显增高，而且对不经微波修复的抗原也有很好的反应性。结论作为第一株国产抗ｐ５３单抗。
- 曾荔孔祥田夏同礼刘彩云寿成超赫炎宓培郭应禄
- 关键词：膀胱肿瘤移行细胞癌P53组织学
- P^(53)融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：3
- 1999年
- 目的为研制出能特异与Ｐ５３结合的单克隆抗体，使对Ｐ５３的检测得到更为广泛的应用。方法用ＰＣＲ技术扩增编码人Ｐ５３Ｎ－端１８０个氨基酸的ＤＮＡ片段并将其克隆在谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）表达质粒ＰＧＥＸ－２Ｔ中。用该重组质粒转化大肠杆菌ＪＭ１０９，并经异丙基β－Ｄ硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导产生Ｐ５３－ＧＳＴ融合蛋白。用Ｐ５３－ＧＳＴ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。常规细胞融合，间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双筛和免疫组织化学（ＩＨＣ）筛选。结果获得一株能稳定分泌抗Ｐ５３单抗的杂交瘤细胞株，其分泌的单抗（命名为Ｍ１２６），亚类为ＩｇＧ２ｂ。用单抗Ｍ１２６与常用Ｐ５３进口单抗ＰＡＢ１８０１（ＺＹＭＥＤ公司）同时对５２例乳腺癌的石蜡切片标本进行ＩＨＣ分析，阳性检测率分别为４８．１％（２５／５２）和４２．３（２２／５２），与ＰＡＢ１８０１相比Ｍ１２６表现出更强的反应特异性，在一定程度上优于ＰＡＢ１８０１。结论Ｍ１２６可替代进口单抗ＰＡＢ１８０１用于Ｐ５３免疫组织化学研究。
- 刘彩云寿成超孙素莲孙素莲孙素莲
- 关键词：融合蛋白单克隆抗体P53基因原核表达
- 血管内皮生长因子抗体对肿瘤转移的抑制作用被引量：10
- 1997年
- 目的探讨阻断血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）是否可以抑制肿瘤的转移。方法应用ＩＶＴＡ２ＭＡ－８９１津白Ⅱ小鼠自发乳腺癌模型进行抗肿瘤转移的研究，此模型伴有高自发肺转移。结果Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及免疫组化证实，该乳腺癌原发灶及肺转移灶均可表达ＶＥＧＦ，且以后者为高。接种肿瘤后第９天，以ＶＥＧＦ抗体处理荷瘤小鼠，可明显抑制原发肿瘤的生长（４４．０％，Ｐ＜０．０５），而对肺转移灶数目及转移灶大小的抑制率分别达７３．０％和８３．７％。结论ＶＥＧＦ抗体对肿瘤转移的抑制有潜在的应用价值。
- 王贵齐杨治华寿成超徐光炜董志伟
- 关键词：血管内皮抗体肿瘤转移VEGF
- 抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定被引量：6
- 1998年
- 目的：制备血管内皮细胞生长因子受体（ｋｉｎａｓｅｉｎｓｅｒｔｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＫＤＲ）的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法：在大肠杆菌中表达重组ＫＤＲ融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ＥＬＩＳＡ双筛和ＳＰ免疫组化筛选并鉴定其亚类。结果：经ＥＬＩＳＡ双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人ＫＤＲ单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为ＳＳＷ２），其分泌抗体亚类为ＩｇＧ１，产生的腹水效价可达１×１０－６。结论：ＳＳＷ２同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应。
- 宋述梅吴健寿成超
- 关键词：KDR单克隆抗体
- 人源噬菌体抗体库的构建及抗VEGF抗体的初步筛选分析被引量：4
- 2000年
- 应用噬菌体表面呈递技术构建人抗体组合文库 .筛选获得了结合血管内皮细胞生长因子( VEGF)的人噬菌体 Fab抗体 ,并对所获抗体的多样性进行了进一步分析 .从不同人群外周血淋巴细胞提取总 RNA,经反转录后采用家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物与免疫球蛋白信肽序列引物 ,通过改变 PCR条件或半套式扩增分别获得全部亚型的轻、重链抗体 Fab段 ,并重组到噬粒载体 p Comb3H中 ,经电转化大肠杆菌 XL- 1 Blue,构建了 1 .5× 1 0 8完整组合抗体库 .利用 VEGF12 1对该库经过 4轮固相筛选后 ,获得 1 2个可与 VEGF特异结合的阳性克隆 .酶谱分析表明了所获抗体克隆的多样性 .为通过基因工程改造 ,进一步获得可用于临床的人源 VEGF抗体奠定了基础 .
- 田学军寿成超董志伟
- 关键词：多样性抗VEGF抗体肿瘤治疗
- VEGF的单抗制备及胃癌细胞MGC803表达VEGF的鉴定被引量：10
- 1999年
- 目的从胃癌细胞ＭＧＣ８０３克隆并在体外表达血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ），利用ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体对其产物进行鉴定，为进一步明确肿瘤组织中ＶＥＧＦ来源，并以ＶＥＧＦ为靶点治疗肿瘤奠定基础。方法用杂交瘤技术制备ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体（ＭｃＡｂ），通过ＥＬＩＳＡ、３ＨＴｄＲ掺入检测其活性；用ＲＴＰＣＲ从ＭＧＣ８０３细胞克隆ＶＥＧＦ基因，与原核表达载体ＰＧＥＸ２Ｔ重组，在大肠杆菌中进行表达，以Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对表达产物进行鉴定。结果所制备的ＶＥＧＦＭｃＡｂ能特异性地同ＶＥＧＦ结合，并能中和ＶＥＧＦ对内皮细胞的促增殖作用；利用ＲＴＰＣＲ扩增出特异的ＶＥＧＦ基因片段，重组到ＰＧＥＸ２Ｔ表达载体中，在大肠杆菌ＸＬ１ｂｌｕｅ中得到了稳定高效表达的蛋白产物，并能特异性地被ＶＥＧＦ抗体所识别。结论在ＭＧＣ８０３细胞中存在ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达，提示肿瘤细胞是肿瘤组织中ＶＥＧＦ的重要来源。ＶＥＧＦＭｃＡｂ不仅可对其存在进行检测，而且可有效抑制ＶＥＧＦ对内皮细胞的促增殖作用。
- 田学军吴健孟麟寿成超董志伟
- 关键词：胃肿瘤VEGF单克隆抗体
- 抗胃癌单链抗体的构建、表达及活性测定被引量：7
- 1997年
- 对能与肿瘤细胞特异结合，并已成功用于临床肿瘤显像的单克隆抗体３Ｈ１１（ＭｃＡｂ３Ｈ１１）构建为小分子的单链抗体（Ｓ３Ｈ１１），并证明其生物学活性，为扩大ＭｃＡｂ３Ｈ１１在临床的应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链式反应，扩增并克隆３Ｈ１１的可变区基因（ＶＨ，ＶＬ）片段，经测序后通过（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３的接头将两者连接，并与谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）基因重组，在大肠杆菌表达ＧＳＴ与３Ｈ１１单链抗体的融合蛋白（ＧＳ３Ｈ１１）。ＧＳ３Ｈ１１经变性及复性处理后用竞争抑制实验检测其抗体活性。结果ＧＳ３Ｈ１１能特异抑制ＭｃＡｂ３Ｈ１１同胃癌细胞ＭＧＣ８０３的结合，当ＧＳ３Ｈ１１与ＭｃＡｂ３Ｈ１１的结合价位比为１５：１时，ＭｃＡｂ３Ｈ１１的活性受到完全抑制；ＧＳ３Ｈ１１对亦能同ＭＧＣ８０３特异结合的不同单抗３Ｇ９及ＰＤ４无任何抑制作用。结论ＧＳ３Ｈ１１具有特异结合抗原的活性，具有潜在的应用前景，同时亦为构建免疫毒素分子奠定了基础。
- 寿成超李彩凤孟麟董志伟
- 关键词：胃肿瘤单链抗体抗体免疫活性
- 抗p53融合蛋白单克隆抗体的性质鉴定
- 2000年
- 目的 :研制出能特异与p5 3结合的单克隆抗体 ,使对 p5 3的检测得到更为广泛的应用。 方法 :以原核表达的 p5 3-GST融合蛋白为免疫原 ,常规方法作细胞融合 ,间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)双筛和免疫组织化学(IHC)筛选 ,将能稳定分泌抗人p5 3单抗的杂交瘤细胞株的细胞上清 (命名为M12 6 )与常用p5 3进口单抗PAB180 1(ZYMED公司 )作对比实验。结果 :此单抗适用于ELISA、IHC、免疫印迹及免疫沉淀等方面的研究 ,并且在一定程度上优于PAB180 1。结论 :新制备的单抗M12 6可考虑取代进口单抗PAB180 1而用于p5 3的表达及突变研究。
- 刘彩云张蕾张蕾寿成超
- 关键词：免疫印迹免疫沉淀
- PCR条件及程序改变对抗体库多样性的影响被引量：3
- 1999年
- 用家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物两两组合分别对轻、重链进行ＲＴＰＣＲ扩增．在不同退火温度下得到了全部轻链及大部分重链（１３／１６）可变区基因．当先用免疫球蛋白信号肽序列５′端引物与未扩出基因３′端引物组合进行一次ＰＣＲ，再以该产物为模板进行二次ＰＣＲ，则获得了未扩出三条重链的ＰＣＲ产物．这表明通过ＰＣＲ反应条件的改变及程序调整，可增加所获得可变区基因的种类及数量。
- 田学军寿成超寿成超孟麟
- 关键词：退火温度抗体库多样性
