孟庆文
- 作品数：163 被引量：338H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响的初步分析
- 目的 通过对TLR3 基因敲除小鼠免疫相关指标分析,研究TLR3 基因敲除对小鼠免疫功能影响,为应用敲除小鼠模型研究TLR3 在病毒感染引发的天然免疫反应中的作用及病毒致病的分子机制奠定基础。方法 PCR、测序分析敲除小...
- 姜雪婷王伟李永青庞中兵孙海阳陈洪岩孟庆文
- 关键词：免疫功能
- 鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因vp1的原核表达及其抗原性分析被引量：4
- 2008年
- 通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明在大肠杆菌中表达了1个相对分子量约为47ku的融合蛋白(Trx-His-VP1),将此融合蛋白用His-Ni+亲和层析法进行纯化。Western blot分析表明,Trx-His-VP1能与DHV-1阳性血清发生特异性反应,说明表达的结构蛋白VP1具有良好的抗原性。
- 甘一迪刘家森姜骞孟庆文韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：VP1基因原核表达
- RIG-I遗传修饰鸡模型的抗病毒天然免疫机制研究
- 研究背景：RIG-I是识别病毒双链RNA的一种模式受体,在启动天然免疫反应中发挥重要作用。鸡缺失RIG-I,家禽转基因技术远远落后与哺乳动物,限制了家禽抗病毒天然免疫机制研究手段。本研究构建了RIG-I遗传修饰鸡模型,在...
- 孟庆文周长良王伟张雅春陈洪岩
- 关键词：RIG-I天然免疫蛋白质组转录组
- 猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究被引量：1
- 2023年
- 为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。
- 史鑫琪季朝阳陈晓彤张子博张鑫郭慧娟田璐王洪峰陈洪岩王靖飞冯力夏长友孟庆文
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒ST细胞
- 敲除RIG-I基因的PK-15细胞系的建立及RIG-I对猪圆环病毒2型感染的作用被引量：4
- 2019年
- 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除RIG-I基因的PK-15细胞,初步探究视黄酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene-I,RIG-I)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染的作用。本研究根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计了针对猪RIG-I基因的2条sgRNA,构建重组载体pUC19-RIG-I-sgRNA1和pUC19-RIG-I-sgRNA2,转染PK-15细胞,通过流式细胞仪分选单细胞、测序、Western blot检测RIG-I敲除情况。PCV2感染细胞后,通过荧光定量PCR分析RIG-I及其下游分子mRNA水平,IPMA方法及TaqMan定量PCR检测病毒增殖水平。结果显示,筛选出的1株RIG-I基因缺失37 bp的PK-15细胞,Western blot检测RIG-I蛋白不表达。PCV2感染正常PK-15细胞48 h和72 h后,RIG-I mRNA水平上调,表明PCV2可激活RIG-I。敲除RIG-I基因,可下调MAVS、STING、IRF3、IFN-β的mRNA水平,抑制PCV2在PK-15细胞中复制,初步表明RIG-I信号通路促进PCV2在PK-15细胞中复制。本研究为PCV2感染的天然免疫机制研究提供了良好的细胞模型。
- 许曼黄立平邵玉乐夏德利曾为俊王辉鲁国涛刘长明陈洪岩王金泉孟庆文
- 关键词：PK-15猪圆环病毒2型
- 禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定被引量：2
- 2000年
- 根据反义ＲＮＡ作用原理，以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５ ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因，反向插入反转录病毒载体 ｐＬＸＳＮ中，命名为 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ，用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ＰＡ３１７，Ｇ４１８筛选抗性克性，扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ），以巢式ＰＣＲ方法检测，以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３，表明已筛选出产毒的的克隆细胞质，得到重组逆转录病毒，为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。
- 孟庆文邓国华曹素芳乔传玲于康震田国斌唐秀英
- 关键词：反义RNA禽流感病毒逆转录病毒载体巢式PCR
- 临床健康牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究被引量：2
- 2001年
- 以流式细胞术研究了临床健康牛外周血中CD3、CD4、CD8和γδT淋巴细胞的分布情况。结果表明 ,牛外周血淋巴细胞中各T淋巴细胞亚类分布差异较大。其中CD3平均值为 5 3.88± 8.71% ,CD4为 17.13± 3.2 2 % ,CD8为 15 .10± 5 .81% ,γδT为 18.77± 8.0 7%。同时检测了广泛存在于各种淋巴细胞表面的白细胞介素_2α受体 (IL_2Rα) ,发现IL_2Rα百分率与γδT细胞百分率具有正相关关系 ,即γδT细胞百分率高时 ,IL_2Rα也高 ,反之亦然。跟踪 3头牛外周血各淋巴细胞亚类分布百分率的实验结果 ,证明牛外周血中各淋巴细胞亚类分布的差异 ,与牛的生物节律有着密切关系。
- 金红宋晓华李媛孟庆文吴东来王幼明崔尚金马文军于康震刘宝全井田幸助
- 关键词：健康牛外周血
- 新疆美利奴羊对绵羊慢病毒自然感染的品种敏感性研究被引量：2
- 2003年
- 用绵羊进行性肺炎病毒(OPPV)实验感染新疆美利奴羊的研究业已证实,新疆美利奴羊对OvLV美国株(OPPV)的敏感性很低,且呈现亚临床性感染[1,2].本项目通过对自然感染绵羊慢病毒新疆株的新疆美利奴羊的长期研究,试图进一步证实新疆美利奴羊是对OvLV的低敏感性品种.
- 邓普辉简子健阿合买提孟庆文张福萍白慧敏邱家祥
- 关键词：新疆美利奴羊绵羊慢病毒自然感染血清学
- H1N1流感病毒单链抗体基因的克隆及抗病毒活性研究
- 单链抗体(single-chain antibody variable fragment,ScFv)是抗原与抗体结合的最小单位,由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段5-25个氨基酸的连接肽连接而成的单克隆抗体的可变区片段...
- 李越王伟赵颖慧孟庆文
- 关键词：流感病毒单链抗体基因克隆抗病毒活性
- 文献传递
- 鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2014年
- 本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。
- 周长良张雅春王伟李越赵颖慧臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩
- 关键词：单克隆抗体原核表达
