员月明
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法:通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23。将该载体导入Am-phoPackTM-293细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系。采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位。结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白。共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23定位于细胞质,处于细胞核周边。结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系。该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程。
- 杨丹丽肖小平宫君原员月明李月琴张欣邹弈周天鸿李弘剑
- 关键词：巨细胞病毒逆转录病毒
- 人β-酪蛋白GAS基序荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定
- 2011年
- 构建人β-酪蛋白GAS基序荧光素酶报告基因表达载体。合成3个连续重复的人β-酪蛋白启动子中干扰素γ活化序列(gamma-activated sequence,GAS)并将其克隆至pGL3-Promoter荧光素酶报告基因载体。测序鉴定构建的载体,然后将其转染入人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HELF)中检测荧光素酶的表达活性。测序结果表明,3×GAS序列正确;双报告基因系统检测荧光素酶活性表明,构建的报告基因具有启动子活性。成功构建的人β-酪蛋白GAS基序荧光素酶报告基因表达载体,为进一步研究干扰素γ诱导的JAK-STAT信号通路提供了必要的试验材料。
- 员月明李弘剑
- 关键词：Β-酪蛋白荧光素酶报告基因
- 病毒蛋白编码pUL23蛋白能够抵抗γ干扰素的抗病毒作用及机制的研究
- 人巨细胞病毒HCMV在人群中感染非常普遍,对健康人一般不致病,但对免疫低下人群如儿童、器官移植、艾滋病患者等会致病,甚至导致死亡。pUL23是HCMV UL23基因编码的蛋白,实验室前期研究发现pUL23能够与干扰素诱导...
- 肖小平李弘剑员月明李月琴周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒干扰素NMI组蛋白去乙酰化酶
- 文献传递
- 稳定表达人巨细胞病毒pUL49蛋白人胚肺成纤维细胞系的建立
- 2010年
- 目的用逆转录病毒载体介导的基因转移方法,建立稳定表达人巨细胞病毒(HCMV)UL49基因的HELF细胞系。方法首先应用RT-PCR从感染HCMV的HELF细胞RNA中扩增UL49基因,克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1上,以此构建重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-FLAG-UL49,并转染AmphoPack-TM-293细胞,收集逆转录病毒,感染HELF细胞,经G418抗性筛选出阳性细胞。结果经IFA、RT-PCR及Western blot检测到UL49基因在稳定细胞系中表达。结论 HELF-PLEGFP-N1-FLAG-UL49稳定细胞系构建成功。此细胞系为进一步研究HCMV pUL49蛋白的功能提供了一个有力工具。
- 宫君原肖小平员月明李月琴张欣邹弈李弘剑周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒逆转录病毒稳定细胞系
- 利用酵母双杂交系统筛选与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的病毒编码蛋白被引量：3
- 2011年
- 人巨细胞病毒(HCMV)UL23基因编码病毒皮层蛋白,该基因缺失时,病毒在人包皮成纤维细胞(HFF)中的繁殖速度加快.为进一步阐述HCMV UL23基因编码产物pUL23的功能及调控机制,采用鸟枪法构建了融合于GAL4活性区域的HCMV Towne株基因组随机表达文库.利用酵母双杂交技术,以pGBKT7-UL23为诱饵质粒,从构建的HCMV基因组表达文库中筛选到与pUL23相互作用的病毒编码蛋白pUL24.GST-pull down实验和免疫共沉淀实验进一步确认两种病毒蛋白之间的相互作用.结果表明,构建的HCMV基因组表达文库能够用于GAL4酵母双杂交系统筛选与诱饵蛋白相互作用的病毒自身编码蛋白.病毒蛋白pUL23和pUL24之间具有相互作用,这为进一步阐述pUL23在HCMV感染过程中的功能提供依据.该研究为揭示HCMV病毒感染机制奠定了基础.
- 肖静胡嘉淼肖小平员月明刘明亮曾宝娟李婧惠周天鸿冉艳红李弘剑
- 关键词：人巨细胞病毒BAC基因组文库蛋白质相互作用
- 病毒蛋白编码pUL23蛋白能够抵抗γ干扰素的抗病毒作用及机制的研究
- 人巨细胞病毒HCMV在人群中感染非常普遍，对健康人一般不致病，但对免疫低下人群如儿童、器官移植、艾滋病患者等会致病，甚至导致死亡。pUL23是HCMV UL23基因编码的蛋白，实验室前期研究发现pUL23能够与干扰素诱导...
- 肖小平李弘剑员月明李月琴周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒Γ干扰素抗病毒作用磷酸化
- 人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23与宿主蛋白IGFBP4相互作用的鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:利用蛋白质相互作用的技术筛选与pUL23相互作用宿主蛋白,为研究pUL23蛋白对人巨细胞病毒繁殖的影响提供线索。方法:通过酵母双杂交系统从人胚肾cDNA文库筛选与pUL23相互作用的宿主蛋白;通过GST-pu ll-down技术研究二者体外物理性相互作用;免疫共沉淀技术进一步研究二者在胞内相互作用。结果:Pu ll-down技术、免疫共沉淀技术确定了宿主蛋白IGFBP4与pUL23具有相互作用。结论:上述结果为研究pUL23蛋白调节病毒自身繁殖功能提供重要依据。
- 肖小平周天鸿宫君原杨丹丽员月明李月琴邹奕张欣李弘剑
- 关键词：人巨细胞病毒
