刘旭平
- 作品数：39 被引量：93H指数：6
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 温度对CHO细胞表达抗体唾液酸含量和生物学活性的影响
- 在CHO细胞培养过程中,适当降低培养温度能够显著提高抗体的比生产速率,有利于抗体的累积,但温度对抗体质量(包括唾液酸含量和生物学活性)的影响却知之甚少.本文采用反应器批培养方式,详细研究了温度对CHO 细胞表达抗体的唾液...
- 寇天赐赵亮范里刘旭平周燕谭文松
- 关键词：唾液酸生物学活性细胞培养细胞活性
- HEK293细胞在腺病毒感染前后的代谢变化研究
- 基因治疗是通过各种途径将外源基因导入机体并有效表达,用以纠正、取代异常基因或杀死异常细胞,达到防治疾病的目的。病毒正被发展用于治疗遗传性和获得性疾病的基因转移载体, 在病毒载体中腺病毒载体已在临床上广泛应用,具有广阔的前...
- 刘旭平徐佳璟朱明龙张旭谭文松
- 关键词：HEK293代谢变化病毒感染
- 适于大规模生产流感疫苗的无血清培养基
- 本发明涉及生物技术之培养基研发技术领域，是一种适于大规模生产流感疫苗的无血清培养基，它包含23种基础代谢营养物、2种核酸类化合物、6种维生素、9种无机盐类化合物、1种剪切力保护剂、2种酸碱度缓冲剂、1种酸碱度指示剂、10...
- 谭文松刘旭平赵亮范里黄锭
- 谷氨酰胺和天冬酰胺对CHO细胞生长、代谢及抗体表达的影响被引量：10
- 2014年
- 以离心换液的批培养为例,通过设计谷氨酰胺和天冬酰胺不同的添加方式来考察两者对CHO细胞生长,代谢及产物表达的影响。结果表明:基础培养基中谷氨酰胺和天冬酰胺不能简单地相互替换,缺失谷氨酰胺或天冬酰胺的基础培养基均不能支持dhfr-CHO细胞的正常生长和产物表达,仅谷氨酰胺和天冬酰胺的浓度同时达到4mmol/L,才能满足细胞生长所需。另外,代谢副产物氨的生成仅与谷氨酰胺和天冬酰胺的加和线性相关,与两者添加比例无关。但适当提高天冬酰胺与谷氨酰胺的比例可提高抗体表达水平,同时减少乳酸的生成。因此,为培养基开发与优化过程中谷氨酰胺和天冬酰胺的添加策略提供了依据,为建立高效的流加培养过程奠定了基础。
- 张维燕刘亚亚刘旭平范里谭文松
- 关键词：谷氨酰胺天冬酰胺抗体乳酸
- Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基被引量：4
- 2014年
- 目的采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基。方法在自主研发的含蛋白无血清培养基的基础上,通过Plackett-Burman试验和响应面试验设计考察23组营养物质对MDCK细胞生长的影响,以细胞比生长速率、维持时间及最大活细胞密度作为响应值进行筛选和定量优化。以最优化的因子浓度配制化学成分明确的无血清无蛋白培养基,分别于细胞培养板和搅拌瓶中培养MDCK细胞,考察细胞比生长速率、维持时间和最大活细胞密度3个响应值的大小。结果通过Plackett-Burman试验筛选出4种对MDCK细胞生长具有显著性促进作用的因子:半胱氨酸、苏氨酸、亮氨酸和葡萄糖,苏氨酸和亮氨酸有助于提高细胞比生长速率,半胱氨酸和葡萄糖有利于提高最大活细胞密度;该化学成分明确的无血清无蛋白培养基能很好地支持MDCK细胞悬浮生长,单细胞悬浮培养MDCK细胞时,细胞比生长速率可达0.058/h,最大活细胞密度可达32.65×105个/ml,分别比基础培养基提高了2.15和3.09倍。结论采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化了化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基,为采用MDCK细胞大规模工业化生产流感疫苗奠定了基础。
- 黄锭黎文明赵亮范里叶朝阳刘旭平谭文松罗剑陈则
- 关键词：MDCK细胞
- 基于Box-Behnken实验设计与响应面法优化禽流感疫苗生产工艺?被引量：8
- 2019年
- 为优化基于MDCK细胞无血清悬浮培养生产禽流感病毒的工艺以提高禽流感病毒血凝素(HA)滴度,采用部分析因实验设计考察了病毒生产工艺中接毒时细胞密度、TPCK-胰酶浓度、培养温度、感染复数和病毒收获时间对病毒HA滴度的影响,确定了接毒时细胞密度、TPCK-胰酶浓度、和病毒收获时间作为影响病毒HA滴度的显著因子,并进一步采用3因素3水平的Box-Behnken实验设计和响应面法,对3个显著因子作用条件进行了优化,获得了最优的工艺条件。结果显示:当接毒时细胞密度为7.0×10~6 cells×m L^(-1)、TPCK-胰酶浓度为17 mg×L^(-1)、病毒收获时间为60 h时,病毒HA滴度最高可达10.85 log_2 HAU/25μL。以上研究结果为禽流感疫苗高效大规模工业化生产提供了有力的数据支持。
- 胡可可刘旭平蔡海波谭文松
- 基于产品质量分析的中国仓鼠卵巢细胞流加培养工艺的优化
- 2015年
- 在前期建立的流加培养工艺的基础上,考察培养过程中的pH值对流加培养过程的影响,明确了过程控制参数pH值与产品关键质量属性(critical quality attributes,CQAs)间的联系,建立了产物质量属性和过程操作属性间的关系,并确认pH值为抗体融合蛋白生产工艺中的关键控制参数。结果表明,流加培养过程随着培养pH值的提高,抗体融合蛋白的生物学活性呈一定程度的下降趋势,但唾液酸含量却呈明显的上升趋势;此外,在pH值6.9和pH值7.0的条件下培养过程中的最大细胞密度、活力、蛋白表达量均优于其他条件,确定6.95±0.05为过程的控制pH值。将此培养工艺放到大200 L中试生产规模,结果与2 L反应器的结果基本一致。
- 刘金涛范里邓献存刘旭平谭文松
- 关键词：CHO细胞PH值抗体融合蛋白流加培养产品质量
- 金属离子对CHO细胞抗体表达及抗体电荷分布的影响被引量：7
- 2016年
- 旨在深入认识金属离子在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养生产单克隆抗体过程中所发挥的作用。综合考察了不同铜离子和锌离子浓度下CHO细胞的生长、抗体的表达以及抗体的电荷分布情况。结果显示,一方面,当培养基中铜离子浓度为120 nmol/L、锌离子浓度为50μmol/L时,最有利于CHO细胞的生长和抗体的表达。过高或过低的铜离子和锌离子均对细胞的生长和活性的维持产生了不利影响。另一方面,作为碱性羧肽酶抑制剂和辅因子的铜离子和锌离子对抗体的电荷分布有着重要的影响。当培养基中铜离子浓度为50 nmol/L、锌离子浓度为50μmol/L时,最有利于减少抗体的电荷变体,提高主峰含量。过高或过低的铜离子和锌离子均导致了电荷变体的增加,主峰含量的降低。且两者的浓度和比例影响了抗体C末端赖氨酸的酶切过程,进而影响了碱性变体的含量。此外,对铜、锌离子的操作空间进行了初步的研究。金属离子在CHO细胞培养过程中对细胞的生长、抗体的表达以及抗体的电荷分布等方面都发挥着重要的作用。
- 张鑫涛唐红萍赵亮范里刘旭平缪仕伟谭文松
- 关键词：动物细胞培养电荷分布金属离子
- 适于动物细胞高密度培养和产物表达的营养物添加剂
- 本发明涉及现代生物技术领域，是适于动物细胞高密度培养和产物表达的营养物添加剂，其组分包括葡萄糖和8种氨基酸，在一升无热源超纯水中各成分的含量为：葡萄糖360～600、谷氨酰胺30～90、天冬酰胺2～8、脯氨酸10～20、...
- 谭文松赵亮范里刘旭平周燕孙亚婷
- 微载体浓度与细胞接种密度对MDCK细胞生长的影响被引量：7
- 2014年
- 目的探讨微载体浓度与犬肾脏上皮（Madin-Darby canine kidney,MDCK）细胞接种密度之间的关系,及其对MDCK细胞生长代谢的影响。方法实验设计了4组不同的单个微载体周围的细胞数范围,分别为0-10、10-20、20-60和60-120个,每组范围分别通过控制微载体浓度或细胞接种密度得到2组不同条件的实验组,即12 g/L微载体组和5×104个/ml MDCK细胞组、7 g/L微载体组和1×105个/ml MDCK细胞组、3 g/L微载体组和5×105个/ml MDCK细胞组、1 g/L微载体组和1×106个/ml MDCK细胞组,其中1、3、7、12 g/L微载体组细胞接种密度均为2×105个/ml,5×104、1×105、5×105、1×106个/ml MDCK细胞组微载体浓度均为3 g/L。经转瓶培养,每隔24 h取样,进行细胞计数,并检测细胞代谢。按确定的最佳细胞接种密度和微载体浓度培养MDCK细胞72 h后,接种0.01 MOI的甲型流感病毒株A/PR8/34,检测病毒的HA效价。结果当一个微载体周围的细胞数控制在20-60个之间,微载体浓度为3 g/L,细胞接种密度为5×105个/ml时,活细胞密度（viable cell density,VCD）可达3×106个/ml以上,细胞在72-96 h之间,能获得一个较为稳定的平台期,葡萄糖等营养物不会消耗过多以致耗竭,而乳酸、氨等代谢副产物的累积对培养环境造成的压力较小,有利于后期流感病毒的接种,同时还可达到理论最高活细胞值的60%以上。HA效价可达12 log2HA units/50μl。结论控制单个微载体周围细胞数在20-60个之间,细胞生长和代谢显著优于其他条件,且有利于病毒的复制,提高了病毒滴度。为基于MDCK细胞大规模高效生产流感病毒疫苗的工业化生产提供了数据参考。
- 贾涵婧王逸群黄锭罗剑周琳婷陈则刘旭平谭文松周燕
- 关键词：微载体细胞密度
