刘忠渊
- 作品数：70 被引量：356H指数：10
- 供职机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 新疆家蚕抗菌肽的抗体制备及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:制备鼠抗新疆家蚕抗菌肽(Cecropin-XJ)的抗体,用于抗菌肽的体外细胞定位分析。方法:将编码抗菌肽的cDNA序列亚克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建重组真核表达载体pcDNA3/Cecropin-XJ,进行核酸免疫昆明白小鼠;同时构建原核表达载体,对抗菌肽进行融合表达,以表达的融合蛋白作为检测抗原。采用免疫电镜技术分析Cecropin-XJ的作用部位。结果:间接ELISA表明,重组质粒第5次免疫的效价最高;免疫胶体金实验显示,所制备的抗血清能够对抗菌肽作用部位进行准确清晰的定位。结论:所制备的鼠抗Cecropin-XJ的抗血清具有较高的免疫反应性和特异性,为Cecropin-XJ的抑菌机制研究提供了有力的工具,同时也为小分子肽抗体的制备提供了参考。
- 郑树涛刘忠渊王慧窦君张富春
- 关键词：新疆家蚕抗菌肽核酸免疫小分子肽抗体制备
- 黄粉虫抗菌肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测被引量：2
- 2011年
- 昆虫抗菌肽具有广谱抗菌活性,克隆黄粉虫Tenebrio molitor抗菌肽基因,进行原核表达和活性检测,为昆虫抗菌肽推广应用奠定一定基础。根据GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物,以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因TmAMP3,将其亚克隆至pET-30a表达载体中,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,同时检测生物活性。结果表明我们成功构建了重组质粒pET-30a-TmAMP3,大部分目的蛋白呈可溶性分泌表达。经Ni2+亲和层析,获得较纯融合蛋白HIS-TmAMP3,诱导表达的融合蛋白使BL21转化菌生长受到一定程度的抑制。融合蛋白在100℃煮沸10h、与pH2～12的缓冲液混匀后,依然保持稳定的抗菌活性,具有较强的稳定性。同时检测了融合蛋白对5种菌株的最小抑菌浓度(minimun inhibitory concentration,MIC)。本研究为具有稳定活性抗菌肽进行大规模生产发酵提供了理论基础。
- 唐馨毛新芳热西力·克来木刘忠渊
- 关键词：黄粉虫抗菌肽蛋白纯化抗菌活性
- 赤翅甲抗冻蛋白基因的原核表达及蛋白生物活性检测被引量：19
- 2005年
- 根据GenBank中序列人工合成赤翅甲 Dendroides canadensis 的抗冻蛋白基因 (afp), 将其克隆到载体 pGEX_4T_1上, 构建融合表达的重组质粒, 转化大肠杆菌 BL21并进行原核表达。通过优化表达的诱导条件和SDS_PAGE检测, 证明人工合成的赤翅甲抗冻蛋白基因能够特异性地表达, 并以可溶性融合蛋白形式存在, 相对分子质量约为40 kD。抗冻蛋白的生物活性检测表明, 赤翅甲的抗冻融合蛋白能够提高细菌的耐寒能力。
- 刘忠渊张富春王芸吕国栋
- 关键词：抗冻蛋白原核表达抗冻活性
- 光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因ApSerpin-FA72的克隆、表达及功能验证被引量：2
- 2017年
- 【目的】本研究旨在对光滑鳖甲Anatolica polita borealis丝氨酸蛋白酶抑制剂基因进行克隆及表达分析,以验证光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能。【方法】利用PCR和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆获得光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因。采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本性质进行预测和分析,同时构建其编码产物的系统进化树;构建光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白重组表达载体,表达、纯化蛋白进行功能验证。【结果】获得光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Ap Serpin-FA72(Gen Bank登录号:MF188125),其基因编码序列长为1 176 bp,编码由391个氨基酸残基组成的多肽,蛋白理论分子量为43.7 k D,理论等电点为5.14,包含一个由21个氨基酸组成的信号肽。As Serpin-FA72属亲水蛋白,分泌到胞外发挥作用,可能具有胁迫应答的功能,与赤拟谷盗Triboloum castaneum Serpin的同源性最高。纯化得到的融合蛋白Trx A-Ap Serpin-FA72大小约为63.7 k D。功能验证表明,重组蛋白Trx A-Ap SerpinFA72对胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶活性均有抑制作用。【结论】光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达产物对胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶活性具有抑制作用,表明其可能对消化类丝氨酸蛋白酶活性起抑制作用,对其功能活性的验证有助于深入研究Ap Serpin-FA72与丝氨酸蛋白酶之间的关系。
- 赵钰刘忠渊
- 关键词：光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂原核表达蛋白纯化
- 草原兔尾鼠卵透明带3在Pichia pastoris酵母中的分泌表达被引量：1
- 2004年
- 本研究通过酵母Pichiapastoris系统表达草原兔尾鼠卵透明带 3(lZP3)蛋白 ,获得控制害鼠生育研究的抗原物质。根据本实验室克隆获得的lZP3基因序列设计引物 ,并分别在 5’引物和 3’引物中引入了EcoRI和XbaI酶切位点。经PCR扩增 ,将lZP3克隆至穿梭质粒pSuperY上 ,获得的重组穿梭质粒pSuperY -lZP3经线性化后 ,采用电激法将重组穿梭质粒转入酵母SMD116 8菌株中 ,Zeocin+筛选阳性克隆 ,经小瓶发酵后 ,取上清作SDS -PAGE和Western -blot检测 ,结果表明lZP3在酵母中得到了成功表达 ,表达产物的分子量约为 5 5kD 。
- 单文娟张富春刘忠渊朱馨蕾
- 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3PICHIAPASTORIS
- 黄粉虫抗菌肽TmAMP3m在大肠杆菌中的高效表达及其应用
- 本发明公开黄粉虫抗菌肽TmAMP3m及其在大肠杆菌中高效表达的方法。利用GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物，以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因，并将其突变成TmAMP3m，将基因TmAMP3m亚克...
- 刘忠渊张富春唐馨
- 新疆家蚕抗菌肽对雏鸡生长性能及血清激素、理化指标的影响被引量：12
- 2007年
- 将240只1日龄南宁麻花鸡随机分成4组。对照组饮用自来水,3个试验组的饮水中分别添加0.5、1.5、3.5mL/L抗菌肽。试验期为56d。结果表明:与对照组相比,1.5、3.5mL/L添加量的试验组雏鸡增重效果显著(P<0.05),试验组血清总蛋白浓度差异不显著(P>0.05),尿素氮水平下降显著(P<0.05),血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平显著升高。在28日龄,试验组的三碘甲状腺原氨酸(T3)浓度高于对照组,差异不显著(P>0.05),甲状腺素(T4)水平下降显著(P<0.05);在56日龄,试验组的T3水平显著降低(P<0.05),但T4水平高于对照组,差异显著(P<0.05)。
- 刘忠渊徐涛王启贵孙峰张富春
- 关键词：新疆家蚕抗菌肽雏鸡激素生理生化指标
- 骆驼蓬种子提取物及其β咔保啉生物碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用被引量：18
- 2008年
- 目的探讨去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱、骆驼蓬总碱及哈尔满碱(止咳药用植物)对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用。方法从体外培养的Q3肝癌细胞中,提取分离DNA拓扑异构酶Ⅱ;以阿霉素为阳性对照,用琼脂糖凝胶电泳法检测药物对DNA拓扑异构酶Ⅱ的作用。结果骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱及哈尔满碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性均有一定的抑制作用。结论对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用是骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱等生物碱抗癌作用和细胞毒作用的机制之一。
- 王长虹程雪梅刘忠渊孙殿甲马正海张富春王峥涛
- 关键词：骆驼蓬总碱去氢骆驼蓬碱骆驼蓬碱
- 光滑鳖甲抗菌肽的原核表达条件优化及其抗菌活性被引量：6
- 2016年
- 【目的】本研究旨在探索光滑鳖甲Anatolica polita borealis抗菌肽Ap AMP1015的最佳原核表达条件及其抗菌活性。【方法】利用生物信息学方法对得到的Ap AMP1015基因序列和蛋白结构进行分析,运用原核表达技术表达Trx A-Ap AMP1015融合蛋白,通过Western blot方法鉴定蛋白,并利用亲和层析的方法获得纯化的Trx A-Ap AMP1015融合蛋白,抑菌圈实验验证蛋白抗菌活性。【结果】克隆得到光滑鳖甲抗菌肽基因Ap AMP1015,其开放阅读框长387 bp,编码128个氨基酸,其中包含由19个氨基酸组成的信号肽和75个氨基酸组成的成熟肽。NCBI数据库同源序列比对结果显示该蛋白属Coleoptericin抗菌肽家族。确定了蛋白表达的最佳条件:0.1 mmol/L IPTG 150 r/min 25℃诱导4 h。肠激酶切割后的Ap AMP1015能够有效抑制大肠杆菌Escherichia coli的生长。【结论】克隆得到光滑鳖甲抗菌肽基因Ap AMP1015,获得了其编码蛋白的最优表达条件,研究发现Ap AMP1015能够有效抑制大肠杆菌的生长。本研究为光滑鳖甲抗菌肽Ap AMP1015的应用和进一步研究奠定了基础。
- 海力且木·艾力徐鑫刘忠渊
- 关键词：光滑鳖甲抗菌肽原核表达蛋白纯化抗菌活性
- 先天免疫系统中肽聚糖识别蛋白研究进展被引量：2
- 2014年
- 先天免疫系统是机体最原始的抵御外源病原体侵染的防护机制,普遍存在于脊椎动物与无脊椎动物体内。肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是一类可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的模式识别受体,在先天免疫应答中发挥着重要的识别和调节功能。对肽聚糖识别蛋白的认识,对于了解先天免疫系统的反应机制有重要意义。论文根据近年来的研究进展对先天免疫系统中PGRPs的结构、功能、信号通路以及PGRPs与肽聚糖的相互作用进行了综述。
- 徐鑫刘忠渊
- 关键词：先天免疫肽聚糖识别蛋白信号通路免疫耐受
