刘宾
- 作品数：8 被引量：12H指数：3
- 供职机构：北京大学工学院更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程经济管理更多>>
- 人血清透明质酸夹心化学发光免疫检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 目的建立人血清透明质酸夹心化学发光免疫检测方法。方法用透明质酸结合蛋白分别进行固相载体包被和与辣根过氧物酶偶联，建立定量测定人血清透明质酸的夹心化学发光免疫检测法，并对该方法进行方法学和临床应用性评价。结果所建立血清透明质酸化学发光免疫检测法灵敏度为0．66μg/L，线性范围在1．8-1000μg/L，批内变异系数低于7．05％，批间变异系数低于8．0％，平均添加回收率为103．1％，稀释回收率为106．8％，与肝纤维化其他血清标志物Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原和层黏连蛋白的交叉反应率分别只有0．19％、0．16％和0．17％，样本中添加的抗凝剂及胆红素、胆固醇、甘油三酯等物质对检测结果没有影响。辽宁抚顺市传染病医院用该方法检测737份样本的临床总符合率为98．64％；检测197份样本透明质酸含量的结果与美国Corgenix试剂盒检测结果的相关性为Y=0．855x＋26．874（F=0．9877）。结论该方法灵敏度高、特性好、线性范围宽，有良好的准确性和重复性，完全可用于临床样本的肝纤维化检测。
- 于峰李瑞娟李鹏聪张鑫孙旭东刘宾
- 关键词：透明质酸抗原CD44化学发光免疫分析
- 苯丙酮尿症及其治疗方法的分子机制研究进展被引量：3
- 2012年
- 苯丙酮尿症（PKU）是一种严重的常染色体隐性遗传疾病，会对患者神经系统造成不可逆损伤。虽然低苯丙氨酸（Phe）饮食能够实现对PKU的有效控制，但患者反应能力和执行能力仍低于正常人，并且严格的低Phe饮食控制难以终身实行。因此，PKU的基因工程、酶替补、四氢生物蝶呤（BH。）、大量中性氨基酸（LNAA）、肝脏移植等新疗法的相关研究Et益深入和发展，低Phe饮食控制疗法也被进行了改进。针对PKU的致病机理和治疗方法相关分子机制的最新研究进展进行综述。
- 刘宾方竞杨晓林孙旭东
- 关键词：苯丙酮尿症基因工程苯丙氨酸羟化酶
- 单纯疱疹病毒1型糖蛋白D主要抗原表位区的表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的原核表达单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白D(gD)主要抗原表位区,纯化融合表达蛋白并对其进行鉴定。方法用Lasergene7.0中Protean软件对HSV-1 gD氨基酸序列进行抗原表位预测和分析,筛选出gD主要抗原表位区(gD MED),人工合成该区域cDNA序列,构建原核表达载体pET-GST-gD MED;将重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)pLysS,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过GST.Bind纯化试剂盒对gDMED融合蛋白进行纯化;Western blot对gD MED融合蛋白的免疫活性进行分析。结果 HSV-1 gD在266～394区域富含抗原表位,人工合成了该区域的cDNA序列,并成功构建了原核表达载体pET-GST-gD MED;gD MED融合蛋白主要以可溶形式表达,分子质量约为45 ku,纯度能达95%;Western blot结果显示,gD MED融合蛋白能与感染HSV-1患者的血清发生特异结合。结论成功表达和纯化了具有良好抗原性的HSV-1 gD MED融合蛋白,为HSV免疫诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制提供了依据。
- 刘红刘宾和骁赵晓涛
- 关键词：单纯疱疹病毒1型糖蛋白D原核表达
- 一步化学发光免疫分析法检测滤纸干血斑中促甲状腺素
- 2013年
- 目的建立定量检测新生儿滤纸干血斑中促甲状腺素（TSH）的一步化学发光免疫分析方法。方法应用含有表面活性剂NP40s的滤纸干血斑高效蛋白洗脱液作为TSH洗脱液,抗人h-TSH单克隆抗体（mAb）作为辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体,抗人α-TSH的mAb作为固相包被抗体,鲁米诺作为发光底物,建立一步新生儿滤纸干血中TSH双抗体夹心化学发光免疫定量检测方法。结果所用高效蛋白洗脱液NP40s最佳工作浓度为55‰,最佳洗脱反应时间为3 h,该方法检测灵敏度为1.02 mIU/L,线性范围为1.6-160 mIU/L,批内变异系数为3.18%-8.95%,批间变异系数为5.43%-9.26%,添加回收率在87.23%-114.36%之间,稀释回收率在96.80%-111.00%之间,与TSH类似物黄体生成素h链（hLH）、促卵泡激素h链（hFSH）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）均无明显交叉反应,与现有新生儿滤纸干血TSH检测试剂盒相关性良好,相关系数为0.969 90。结论该方法 TSH洗脱和与抗体结合反应只需一步就能实现,整个检测过程在室温下就可完成,并且具有较高的灵敏度、重复性和准确性,完全可用于新生儿滤纸干血中TSH的定量检测。
- 刘宾孙旭东杨晓林李瑞娟孙中锋张鑫李鹏聪
- 关键词：促甲状腺素化学发光免疫分析新生儿筛查先天性甲状腺功能减退症
- 微藻脂类组成及脂肪酸分布的分析技术
- 2013年
- 微藻具有光合效率高、生长周期短、有可能异养生长等特性,并含有多种生物活性物质,尤其是EPA、DHA等多不饱和脂肪酸含量丰富,可以作为功能食品的优质生物资源。多不饱和脂肪酸在微藻细胞中主要以脂质的形式存在,脂类组成及脂肪酸分布信息可以为藻种筛选、不饱和脂肪酸的分离纯化等提供依据。本文综述了高产多不饱和脂肪酸的藻种,脂质及脂肪酸的萃取方法与分离鉴定技术,特别对全二维气相色谱法、高压液相色谱法在微藻中的应用进行了阐述。
- 孙培培刘宾杨博陈峰
- 关键词：微藻脂质EPADHA萃取
- 苯丙酮尿症新生儿筛查及诊断方法研究进展被引量：4
- 2012年
- 【摘要】苯丙酮尿症（PKU）是最常见的先天性氨基酸代谢异常疾病，会引起智力发育迟缓、肤色异常、小头畸形、语言障碍、癫痫等症状，但通过及时诊断，并结合有效的治疗方法能使PKU患者保持相对正常发育。目前，利用细菌抑制、化学荧光、酶定量、高效液相、质谱等技术对血液苯丙氨酸（Phe）水平测定，实现PKU筛查和诊断的方法已经比较成熟。随着分子生物学的发展，PKU的基因诊断、尿液代谢物分析方法也被成功建立和发展。就PKU的筛查和诊断方法的最新研究进展进行综述。
- 刘宾方竞杨晓林孙旭东
- 关键词：苯丙酮尿症新生儿
- 人细胞角蛋白19片段单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的制备人细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)的单克隆抗体(mAb),并对其免疫特性进行鉴定。方法用重组CYFRA21-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取血清效价最高小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选出阳性杂交瘤细胞株,进行亚克隆,并鉴定分泌抗体亚型;制备小鼠腹水,用protein G从腹水中纯化出CYFRA21-1的mAb;用间接ELISA测定mAb的效价,Western blot和竞争ELISA对mAb的免疫特性进行检测,竞争ELISA对mAb的临床应用性进行评价。结果获得2G8和12G7两株能稳定分泌人CYFRA21-1mAb的杂交瘤细胞株,其分泌抗体都为轻链为κ的IgG1;两株mAb都能特异识别人血清中的CYFRA21-1,效价分别为1×10-6和5×10-7;检测134份血清样本CYFRA21-1含量的结果与北京源德生物医学工程有限公司CYFRA21-1化学发光法定量检测试剂盒检测结果的相关性分别为y=0.8167x+0.3755(r=0.9772)和y=0.8142x+0.3655(r=0.9770)。结论成功制备两株人CYFRA21-1的特异mAb,为后期人血清CYFRA21-1定量测定试剂盒的完全国产化奠定了良好的基础。
- 刘红刘宾李瑞娟杨萌萌李鹏聪张鑫孙旭东杨铁生
