刑福彬
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：长春生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技重大专项国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 圣路易斯脑炎病毒样颗粒的真核表达、纯化与鉴定
- 2011年
- 目的 利用293T细胞表达、纯化圣路易斯脑炎病毒样颗粒（Virus like particles,VLPs）,为研制圣路易斯脑炎病毒免疫诊断试剂奠定基础.方法 构建含圣路易斯脑炎病毒PrM和E基因的重组质粒pcDNA5/FRT-SJME,瞬时转染293T细胞,表达并纯化重组蛋白,通过透射电镜、间接免疫荧光试验、Western-Blot和ELISA对其进行鉴定.结果 表达的重组蛋白形成50 nm的球型颗粒,能与抗圣路易斯脑炎病毒抗体产生特异性反应,与部分黄病毒属阳性血清发生交叉反应.结论 已成功在哺乳动物细胞中表达并纯化了圣路易斯脑炎病毒样颗粒,其具有良好的抗原性和完整的颗粒形态,为进一步研制圣路易斯脑炎病毒感染的免疫诊断试剂奠定了基础.
- 郭雪刑福彬咸庆杰王琳杨鹏飞张丽萍平芮巾胡孔新
- 关键词：脑炎病毒荧光抗体技术酶联免疫吸附测定
- 西尼罗病毒NS1蛋白的原核表达及其免疫原性研究
- 2011年
- [目的]采用大肠杆菌表达系统表达西尼罗病毒NS1蛋白,并对表达产物进行免疫原性分析。[方法]将WNV NS1基因克隆入pET30a载体,获得重组表达质粒pET30a-WNV-NS1,并转化入BL21感受态细胞,将表达产物进行SDS-PAGE和W estern-blot分析,经N i+亲和层析纯化、阴离子交换层析后获得纯化的WNV NS1蛋白;将纯化产物免疫新西兰兔,获得的免疫血清作ELISA检测。将重组蛋白包板,检测FOCUS公司商品化试剂盒中的阳性血清。[结果](1)重组WNV NS1蛋白获得表达并纯化成功。(2)W estern blot结果显示表达的蛋白是带有H is标签的目的蛋白。(3)兔免疫血清的间接ELISA结果显示血清效价达到1:50000以上。(4)检测商品化试剂盒中的阳性血清,其OD450吸光值与阴性血清吸光值之比大于2。[结论]重组NS1蛋白能在大肠杆菌系统中获得表达;纯化产物具有免疫原性,而且可以作为抗原检测西尼罗病毒感染的血清,为进一步研究NS1蛋白的生物学特性及西尼罗病毒的诊断试剂奠定了基础。
- 王彦芳杨鹏飞张丽萍平芮巾刑福彬咸庆杰胡孔新
- 关键词：西尼罗病毒原核表达免疫原性
