侯纬敏
- 作品数：25 被引量：158H指数：7
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- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
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- 以杆状病毒作为基因治疗载体的一种新方法
- 1999年
- 目的：报道一种新的基因治疗方法。方法：将人全长血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）基因克隆至ｐＢａｃＭａｍ２载体，与ＢａｃＶｅｃｔｏｒ３０００病毒ＤＮＡ共转染昆虫ｓｆ９细胞，经筛选后获得可在哺乳类动物细胞高效表达的昆虫病毒，以此为载体，将人ＴＰＯ基因导入小鼠体内。结果：获得可在哺乳类动物细胞高效表达的昆虫病毒株，动物实验外周血小板计数升高至正常的２～３倍，ＲＴＰＣＲ结果显示ＴＰＯ在小鼠组织中得到表达。结论：重组ｒｈＴＰＯ昆虫病毒是一种有效的基因治疗载体。
- 陆爱丽董东生董东生伏爽伏爽侯纬敏
- 关键词：血小板生成素基因治疗昆虫病毒杆状病毒
- rhTPO的分子克隆表达及活性测定被引量：2
- 1997年
- 目的；分子克隆并表达具有生物学活性的人血小板生成素（rhTPO）。方法：采用PCR、序列测定、原核表达及亲和层析法。结果：以人全长的TPOCDNA为模板[1]，用PCR法获得了编码195个氨基酸残基的hTPO195cDNA并克隆至原核表达质粒pMal－p2中，以麦芽糖融合蛋白（MBP）方式进行了表达。经Amylose树脂系和层析纯化获得了较高纯度的rhTPO195融合蛋白。生物学活性测定结果显示，其促进体外培养的巨核细胞集落形成与日本麒麟（Kirin）公司产品类似。结论；获得了具有天然生物学活性rhTPO，并在原核细胞中获得表达。
- 陆爱丽岱美茹董冬生侯纬敏许尉林马明信
- 关键词：血小板生成素分子克隆巨核细胞
- 平阳霉素体外诱发大鼠白内障的早期生化变化被引量：1
- 1999年
- 目的和方法：用器官培养的方法在培养基中加入一定剂量的平阳霉素（ｐｉｎｇｙａｎｇｍｙｃｉｎ）作用于大鼠晶体而诱发形成白内障，并在白内障形成的早期过程中观察了晶体内非蛋白质巯基（ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌ，ＮＰＳＨ）、蛋白质巯基（ｐｒｏｔｅｉｎｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌ，ＰＳＨ）和二硫键（ｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄ），以及脂类过氧化水平（ｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ）的动态变化。结果和结论：培养１０ｍｉｎ时，非蛋白质巯基首先下降；随后蛋白质巯基含量也开始降低；二硫键的含量至４０ｍｉｎ时才呈现升高的趋势；而ＭＤＡ在培养的初期无变化，３０ｍｉｎ后明显升高。
- 陆爱丽董东生董东生贾维红刘莹贾维红
- 关键词：白内障器官培养平阳霉素生物化学
- 胆红素的体外酶促合成
- 1993年
- 利用差速离心、硫酸铵分级沉淀及柱层析技术制备血红素加氧酶和胆绿素还原酶,分别用NADPH和NADH作为辅酶,以血红素为作用物,体外酶促合成胆红素,测得NADPH的Km值为45μmol/L,NADH的Km值为0.9mmol/L。
- 朱应葆陈明哲梁康侯纬敏
- 关键词：血红素加氧酶胆红素
- 紫外线对角膜内抗氧化酶mRNA表达的影响被引量：2
- 1999年
- 为了进一步从基因水平探讨紫外线的损伤机制，我们采用ＲＴＰＣＲ方法，用紫外线照射大鼠角膜，检测大鼠角膜内三种抗氧化酶：谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ），铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ、ＺｎＳＯＤ），过氧化氢酶（ＣＡＴ）ｍＲＮＡ的表达。结果显示，照射早期，三种抗氧化酶ｍＲＮＡ表达均升高，ＧＳＨＰｘ和ＳＯＤ的表达高点为照射５ｍｉｎ，ＣＡＴ的表达高点为照射２ｍｉｎ；照射晚期，照射１５ｍｉｎ，三种酶的ｍＲＮＡ表达明显下降（Ｐ＜００５），照射后４８ｈ，三种抗氧化酶的表达基本恢复正常。由此可见，紫外线可影响大鼠角膜内抗氧化酶ｍＲＮＡ的表达，而且角膜有能力修复这种损伤。
- 刘莹董东生董东生侯纬敏
- 关键词：角膜损伤抗氧化酶MRNA
- 抗白内障药物滴眼对亚硒酸钠性白内障的预防作用被引量：2
- 1990年
- 观察了三种化合物(抗氧化剂与自由基清除剂)对大鼠亚硒酸钠性白内障的滴眼预防作用。实验分为正常对照组、亚硒酸钠组及滴眼预防组。亚硒酸钠组及滴眼预防组系给12─13日龄的大鼠皮下注射亚硒酸钠,首次剂量为6μmol/kg体重,间日一次,逐次递增1μmol/kg体重,连续六次。预防组则为大鼠开眼后同时滴眼抗氧化剂与自由基清除剂。结果表明,三种化合物通过滴眼均能有效的防止亚硒酸钠性白内障的发生,白内障的发生率从95.8％降低至15％～43.5％。同时测定了各组晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GSSG-R)及谷胱甘肽硫转移酶(GSH-S)的活性,结果表明,凡注射硒的大鼠晶状体中GSH-Px及GSSG-R的活性均比正常晶状体的高,接受抗氧化剂与自由基清除剂预防的大鼠晶状体中这两种酶的活性比未接受预防的大鼠晶状体中的低。单独注射硒的大鼠晶状体中GSH-S的活性比正常晶状体的高。接受预防的大鼠晶状体中此酶的活性和正常晶状体无差异,但比单独注射硒的大鼠晶状体中的低。
- 陈辉侯纬敏张昌颖
- 关键词：白内障亚硒酸钠
- 紫外线对大鼠晶状体抗氧化酶mRNA表达水平的影响被引量：4
- 1999年
- 为探讨紫外线对晶状体的损伤机制，用ＲＴ－ＰＣＲ方法（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，反转录聚合酶链反应），研究经紫外线照射后大鼠晶状体抗氧化相关酶，包括铜锌－超氧化物歧化酶（ｃｏｐｐｅｒ－ｚｉｎｃ－ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，Ｃｕ－Ｚｎ－ＳＯＤ），谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕ－ｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨ－Ｐｘ）和过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）等ｍＲＮＡ的表达．结果显示，短时间的照射（２～５ｍｉｎ），抗氧化相关酶的ｍＲＮＡ表达水平有增高表现，随后其ｍＲＮＡ表达水平开始下降，１５ｍｉｎ时抗氧化相关酶ｍＲＮＡ的表达下降更为明显，与对照组相比有非常显著性差异（Ｐ＜０．００１）．照射后２４ｈ，抗氧化相关酶的ｍＲＮＡ表达有不同程度的恢复；照射后４８ｈ，其ｍＲＮＡ表达水平基本恢复，与对照组相比没有显著性差异．
- 陆爱丽刘莹董东生侯纬敏张昌颖
- 关键词：RT-PCRMRNA晶状体抗氧化酶
- 亚硒酸钠诱发大鼠白内障晶状体前列腺素生物合成的研究
- 1990年
- 用亚硒酸钠诱发大鼠产生白内障后,将晶状体微粒体与外源性花生四烯酸共同孵育,用放射免疫方法测定白内障晶状体前列腺素E_2(PGE_2)及前列腺素F_2α(PG-F_2α)的生物合成情况,并与正常晶状体进行了比较,结果表明大鼠晶状体具有酶促合成PGs的能力。正常晶状体及白内障晶状体合成PGE_2的能力分别为687.75±113.97及1095.00±79.39pg/100mg晶状体湿重/15分钟,PGE_2α则分别为51.45±36.72及158.83±115.94pg/100mg晶状体湿重/15分钟(平均数±S.D.)。这说明大鼠白内障晶状体合成PGs的能力明显增高,与正常晶状体相比有显著性差异(PGE_2P<0.001,PGF_2αP<0.02)。在前2次注射亚硒酸钠后,大鼠白内障晶状体PGs的合成能力逐渐高于正常晶状体,并随注射亚硒酸钠的次数增加和白内障晶状体混浊程度加重,PGs在晶状体内的含量增加。
- 胡琳侯纬敏张昌颖付守正
- 关键词：白内障晶状体前列腺素亚硒酸钠
- 抗人TPO单克隆抗体的制备被引量：2
- 1997年
- 目的：制备抗人血小板生成素（hTPO）单克隆抗体，用于建立ELISA方法和检测TPO的表达。方法：用基因重组的hTPO免疫Balb／c小鼠，常规法做细胞融合，用ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株。结果：获得一杂交瘤细胞株（46-6），其免疫球蛋白亚类为IgG1经ELISA和免疫印迹技术证明，此单抗能特异识别TPO。结论：46－6单克隆抗体（McAb）特异性强。用其建立的夹心ELISA检测TPO的方法线性好，灵敏度可达50ng／L。
- 岱美茹陆爱丽张新合侯纬敏
- 关键词：血小板生成素单克隆抗体
- 大鼠晶体上皮细胞Cu-ZnSOD的分子克隆表达和活性鉴定
- 1997年
- 不同来源的超氧化物歧化酶（SOD）的克隆已有报道，用RT－PCR方法我们成功地从大鼠晶体上皮细胞中克隆出了CU－ZnSODcDNA并利用pMal载体在大肠杆菌中高效表达出MBP－SOD融合蛋白可占菌体总蛋白40％左右，采用的蛋白纯化系统的亲和层析柱就是利用的MBP融合蛋白可被快速纯化而设计的，实验证明此方法可快捷、高效地表达有生物学活性的MBP—SOD融合蛋白。
- 董东生陆爱丽万效竹侯纬敏
- 关键词：超氧化物歧化酶上皮细胞晶体分子克隆
