何怡宁
- 作品数：39 被引量：71H指数：5
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 基于禽偏肺病毒N蛋白的间接ELISA检测方法的建立和初步应用被引量：1
- 2021年
- 为进一步了解我国鸡群禽偏肺病毒(aMPV)的感染情况,加强对aMPV的防控,应用RT-PCR方法扩增出aMPV N基因的保守片段并连入原核表达载体pET32a-1中,再转入Rosseta(DE3)细胞进行表达,表达的蛋白经纯化后作为包被抗原,经一系列条件优化,建立间接ELISA检测方法并进行初步应用。结果显示,成功表达且纯化了重组N蛋白,以此N蛋白建立的间接ELISA方法对新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、白血病病毒(ALV)、马立克病病毒(MDV)等血清的检测结果为阴性;而阳性血清1∶3200稀释时仍检测为阳性结果;批内和批间重复性试验的最大变异系数均小于10%。应用建立的间接ELISA方法与商品化aMPV ELISA试剂盒对样品进行平行检测,阳性符合率为95.88%(256/267),阴性符合率为93.22%(55/59),总符合率为95.40%(311/326)。应用本方法对广西地区7个种鸡场和6个肉鸡场的960份血清进行检测,结果,种鸡血清aMPV抗体阳性率为93.33%(784/840),肉鸡血清aMPV抗体阳性率为99.17%(119/120)。本研究建立的间接ELISA方法为该病的早期诊断与流行病学调查提供了技术手段。
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- 关键词：N蛋白原核表达间接ELISA
- C型禽偏肺病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用被引量：4
- 2018年
- 根据GenBank发表的禽偏肺病毒(aMPV)F基因序列,设计一对特异性引物,建立C亚型aMPV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。对该反应体系进行条件优化,建立了标准曲线,并进行特异性、敏感性及重复性试验,然后将建立的方法应用于临床样品和攻毒样品的检测。结果显示:标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系;建立的方法只能检测出C亚型aMPV,最低可以检测到0.8×10~1拷贝/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于4%。应用建立的方法对43份临床样品检测,结果显示均为阴性;对42份35日龄SPF鸡人工感染后1～21 d的气管和肺脏样品进行检测,结果显示攻毒样品均为阳性。因此,研究建立的特异、灵敏、重复性好的C型aMPV实时荧光定量PCR方法,既可适合于该病的早期诊断和流行病学调查,又为该病毒的致病机制研究提供技术支撑。
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- 关键词：基因SYBR荧光实时定量PCR
- 蜂素信号肽介导鸡传染性支气管炎病毒N蛋白分泌表达的方法
- 本发明公开了一种蜂素信号肽介导鸡传染性支气管炎病毒N蛋白分泌表达的方法，即先获取融合蜂素信号肽的鸡传染性支气管炎病毒N基因HBM-N，然后构建重组转移载体pFast-HBM-N和重组杆粒rHBM-N，最后将重组杆粒转染S...
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- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒M41株感染雏鸡的组织病理学研究
- 为全面了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染引起雏鸡多个器官组织病理损伤情况,本研究对IBV M41株人工感染SPF雏鸡后不同时间的气管、肺脏、肾脏、哈德氏腺、胸腺、法氏囊、脾脏、肝脏、胰腺和十二指肠进行病理组织学变化观...
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- 关键词：传染性支气管炎病毒雏鸡组织病理学病毒载量
- 文献传递
- 20122013年广西IBV分离株S1基因序列分析与血清型鉴定
- 为继续跟踪了解近年来广西鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的流行状况及其基因和抗原的变异情况,本研究对2012013年获得的15个广西IBV分离株进行了S1基因的扩增、...
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- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒病毒中和试验血清型
- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒纳米PCR检测方法的建立与应用
- <正>引言鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）引起一种急性高度接触传染性呼吸道疾病,主要侵害1～4...
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- 文献传递
- 近十年广西地区鸡传染性支气管炎流行病学调查
- <正>引言鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是养鸡业的一种急性、高度接触性传染病,常继发细菌感染,导致养殖场的严重经济损失[1]。鸡传染性支气管炎病毒（IBV）容易变异,血清型众多,各血...
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- 文献传递
- 禽偏肺病毒SYBR GREEN I的实时荧光定量PCR方法的建立与应用
- <正>引言禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus,aMPV）是火鸡鼻气管炎的病原以及鸡肿头综合征的主要诱因[1],aMPV感染临床特征为咳嗽、打喷嚏、流鼻涕、眶下窦肿胀、头部肿胀、角弓反张和产蛋下降等[2...
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- 文献传递
- 1985-2017年广西鸡传染性支气管炎病毒流行株演化变异分析
- <正>引言鸡传染性支气管炎(IB)给养禽业造成较大经济损失。鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因组容易发生变异,导致基因型和血清型众多复杂,且不同地区IBV流行株存在差异。因此,非常有必要对特定地区IBV流行株进行长期持续...
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- 文献传递
- 鸡MDA5蛋白原核表达、多克隆抗体的制备及初步应用
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