丛丽娜
- 作品数：82 被引量：257H指数：9
- 供职机构：大连工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金辽宁省高校创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学农业科学化学工程更多>>
- 重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶
- 一种重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶，该方法是将海参溶菌酶基因(SEQ ID NO.1)连接到真核表达载体pPIC9K中构建重组质粒，并将所形成的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168中，经甲醇诱导表达，...
- 丛丽娜朱蓓薇王秀霞谷跃峰杨冠科郝明董秀萍
- 文献传递
- 产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其发酵条件优化被引量：3
- 2013年
- 从大连海域的海参肠道中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌HS-A156，经形态学和16SrDNA序列分析初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）（GenBank检索号KCl66863）。对菌株HS-A156的酶学性质进行初步研究，结果表明该菌株所产蛋白酶最适作用pH为9．0，在pH8．O～11．0性能稳定；最适作用温度为40℃，在25～45℃具有良好的热稳定性。同时对该菌株产酶发酵培养基和发酵条件进行优化，确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖1．5％、牛肉膏1．0％、酵母粉2．0％、CaCl20．05％；最佳发酵条件培养基初始pH8．0、发酵温度30℃、接种量3％。经过优化后菌株HS-A156产碱性蛋白酶的酶活力达到538U／mL，比优化前的产酶量提高了3．7倍。
- 宋明徽丛丽娜王红英姜启晨
- 关键词：海洋细菌碱性蛋白酶发酵优化
- 重组海参溶菌酶理化特性及生物活性的初步研究被引量：2
- 2010年
- 将构建好的重组海参溶菌酶毕赤酵母菌株进行诱导表达，用CM52-纤维素阳离子交换柱分离得到电泳纯的重组海参溶菌酶。利用浊度法测定该酶的活性，滤纸片液体扩散法测定其抑菌谱。结果显示，重组海参溶菌酶的最适pH值为6．5，最适温度为35℃，在pH5．0～7．5、50qC以下有较好的稳定性。抑菌谱测定结果显示重组海参溶菌酶对6种指示菌均表现出抑菌性，尤其对副溶血弧菌的抑制作用最强。上述结果均与天然海参溶菌酶一致。
- 谷跃峰丛丽娜骆宁
- 关键词：理化特性生物活性
- 一种重组海参溶菌酶C端多肽、其制备方法和应用
- 本发明涉及对来源于海刺参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)基因(GenBank注册号为EF036468)进行C端多肽的重组表达。首先构建出重组表达质粒pET-32a-SjLys-C，再转化至大...
- 丛丽娜常艺海
- 枯草芽孢杆菌诱变菌mutHS-407产活性物质的纯化及对黄曲霉菌的抑制作用被引量：4
- 2020年
- 通过对枯草芽孢杆菌HS-301进行紫外化学复合诱变,筛选得到一株对黄曲霉菌有明显抑制作用的高产抗菌脂肽诱变菌株mutHS-407。采用酸沉淀分离和有机溶剂抽提的方法从该诱变菌发酵液中提取得到抗菌活性物质,产率为2.305 g/L。通过Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析,检测到该提取物中包含活性物质的分子质量在3.3 ku以下。利用硅胶柱层析和大孔吸附树脂对该提取物进行分离纯化,得到一个单组分。利用高效液相色谱(HPLC)对纯化组分进行分析,结果表明,该组分在保留时间为16~18 min时产生单峰,其质量分数高达92.42%。经质谱(MALDI-TOF-MS)分析和数据比对,其中的主要成分为杆菌霉素D(Bacillomycin D)。将该抗菌提取物应用到花生的抗霉菌实验中,发现其抗菌作用显著,且抗霉菌效果略高于几种常见抗霉剂。
- 马艺萌丛丽娜胡雅莉谢定刚
- 关键词：枯草芽孢杆菌黄曲霉菌纯化
- 海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：5
- 2010年
- 研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No.EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。
- 谷跃峰丛丽娜骆宁
- 关键词：毕赤酵母纯化
- 海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定被引量：3
- 2018年
- 采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(GenBank:JX097096.1,459bp),构建克隆载体pMD18-Aj-SOD1;在目的基因两端引入(XhoⅠ/NdeⅠ)酶切位点,构建克隆载体pMD18-AjSOD1(XhoⅠ/NdeⅠ)。将此载体与表达质粒pET30a(+)分别双酶切后连接,构建重组表达载体pET30a-Aj-SOD1。转化至大肠杆菌BL21(DE3),Kan+抗性筛选阳性转化子,获得基因工程菌BL21(DE3)-pET30a-Aj-SOD1。SDS-PAGE和邻苯三酚自氧化法检测发现,经0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,成功获得具有抗氧化活性的Aj-SOD1蛋白。
- 车明月穆贤李学一张齐丛丽娜牛庆昌李成
- 关键词：仿刺参铜锌超氧化物歧化酶反转录PCR抗氧化活性
- 丁酸梭菌发酵培养基的优化及发酵产物对黄曲霉毒素B_(1)的降解被引量：1
- 2023年
- 【背景】丁酸梭菌是专性厌氧的新一代芽孢益生菌,耐热、耐酸、抗逆性强,极具应用价值和开发前景。【目的】优化丁酸梭菌发酵培养基并初步研究其发酵液对黄曲霉菌的抑制作用和降解黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))的能力。【方法】利用响应面法对发酵培养基进行优化,采用牛津杯法对丁酸梭菌发酵液抑制黄曲霉菌生长进行研究,并通过酶联免疫法测定发酵液对AFB_(1)的降解能力。【结果】优化后的发酵培养基为:葡萄糖18.1g/L,大豆蛋白胨29.7g/L,磷酸氢二钾3.8 g/L,氯化钠2.0 g/L,乙酸钠4.0 g/L,结晶硫酸镁1.2 g/L,L-半胱氨酸盐酸盐0.3 g/L。优化后的丁酸梭菌生物量由8.99×10^(8)个/mL提高至2.28×10^(9)个/mL,是优化前的2.54倍。丁酸梭菌发酵液对致病真菌黄曲霉菌的抑菌效果十分显著,其上清液经浓缩后对AFB_(1)降解72h的降解率达到68.65%,初步分析表明上清液中对AFB1具有脱毒作用的活性组分为丁酸梭菌分泌产生的胞外酶。【结论】本研究通过发酵培养基优化明显提高了丁酸梭菌的生物量,并将其应用于抑制黄曲霉菌的生长与降解AFB1,为丁酸梭菌的规模化生产及其微生态制剂的开发应用提供了科学依据。
- 刘亚妹丛丽娜陈明
- 关键词：丁酸梭菌培养基优化生物量降解
- 重组海参溶菌酶N端可溶性表达与抑菌分析
- 2013年
- 通过对海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)cDNA(Genbank accession no:EF036468)片段的分析,结果发现N端基因区域所对应的蛋白质序列中含有糖苷酶活性。因此利用RT-PCR技术以其为模板,扩增出长度为174 bp的溶菌酶N端(SjLys-N)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-N,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组SjLys-N的基因工程菌。该工程菌在改造的LB培养基和最适的发酵条件下经IPTG诱导后,表达约23 kD的重组SjLys-N蛋白。此外,它还能以可溶性的形式表达,占总菌体蛋白约46%。经过Western blotting分析,重组SjLys-N在23 kD左右能够与penta-his抗体发生特异性免疫反应,结果表明重组SjLys-N得到正确的表达。最后对纯化后的重组SjLys-N进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌和副溶血弧菌有较高的抑菌活性。上述结果将为进一步研究海参溶菌酶的基因结构与功能之间的关系提高参考。
- 常艺海丛丽娜栾桂花刘志文杨杰钱斯日古楞
- 关键词：可溶性表达抑菌活性
- 仿刺参溶菌酶在重组酿酒酵母中的表达被引量：1
- 2017年
- 采用酿酒酵母MKP-0表达仿刺参溶菌酶蛋白(AjLys)。以质粒pMD18-AjLys为模板,PCR扩增将组氨酸标签His-tag克隆到AjLys基因的N末端,构建克隆载体pMD18-His6-AjLys。根据密码子偏好性,通过定点突变对AjLys蛋白第69、77和95位的3个精氨酸的密码子进行优化,得到克隆载体pMD18-His6-AjLys(Δ69,77,95)。经SpeⅠ/BglⅡ酶切,构建重组表达质粒pESC-LEU-His6-AjLys和pESC-LEU-His6-AjLys(Δ69,77,95)。基因工程菌pESC-LEU-His6-AjLys(Δ69,77,95)/MKP-0通过半乳糖诱导72h后,Western Blot检测结果表明其成功表达了AjLys蛋白。抑菌实验结果表明,AjLys蛋白对溶壁微球菌具有一定的抑制作用。本实验成功构建了AjLys的酿酒酵母表达载体,并可在MKP-0细胞中表达了具有活性的AjLys蛋白,为AjLys的生产提供了一种具有可行性的新方法。
- 随瑞瑞沈咪娜李成赵钰车明月张齐丛丽娜
- 关键词：仿刺参溶菌酶酿酒酵母密码子优化
