高楠
- 作品数：19 被引量：50H指数：4
- 供职机构：中山大学中山眼科中心更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人外周血单个核细胞转分化的探讨
- 刘茜黄冰官立萍罗挺葛坚林少春孙雪荣陈梦飞高楠
- βLCR对β地中海贫血基因在转基因小鼠体内表达的影响
- 2007年
- 目的:明确在转基因小鼠体内,βLCR对β地中海贫血基因表达的影响。方法:将完整人β-IVSⅡ-654地中海贫血基因,与串连了人βLCR的β-IVSⅡ-654地中海贫血基因分别经显微注射法制作转基因小鼠;荧光定量RT-PCR法检测β-IVSⅡ-654地贫基因在转基因小鼠体内的表达;采用统计分析比较两类转基因鼠中外源基因的表达量。结果:成功建立两类整合了人β-IVSⅡ-654地贫基因的转基因小鼠模型。荧光定量RT-PCR分析结果表明,在整合了串连人βLCR的β-IVSⅡ-654地贫基因的小鼠体内,外源基因mRNA的表达量远高于仅整合β-IVSⅡ-654地贫基因的小鼠(统计分析P值)。结论:βLCR核心片段的存在是β珠蛋白基因家族(包括β-地贫基因)在转基因小鼠体内获得高效表达的必要条件。
- 卢丽黄冰陈系古黄树林杨国柱高楠贾秀华彭展
- 关键词：Β地中海贫血转基因小鼠基因表达
- 猴表皮干细胞的分离和培养被引量：5
- 2006年
- 目的:探索猴表皮干细胞分离纯化和培养方法。方法:将猴皮肤标本剪成皮条,加入0.25%胰酶浸泡过夜;然后去除角质层,刮上皮面获取表皮细胞进行培养。取第2-4代的细胞,经消化后,用Ⅳ型胶原黏附法获得为快吸附的表皮细胞。对快吸附的表皮细胞行流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR检测。结果:快吸附细胞从mRNA转录水平及蛋白表达水平均呈现表皮干细胞的特性:β1整合素、K15和α6整合素阳性,而CD71和K1/K10阴性。结论:所采用的分离纯化方法和培养条件适合猴表皮干细胞的分离纯化及生长。
- 张可飞黄冰葛坚王智崇陈系古高楠彭展李彦峰
- 关键词：恒河猴表皮干细胞
- Hoechst 33342标记恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化被引量：2
- 2007年
- 【目的】探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。【方法】在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Transwell非接触共培养10d,然后对诱导后的细胞用细胞免疫化学以及流式细胞术检测结膜上皮细胞的特异性表面标志,包括角蛋白4和粘蛋白4,同时检测细胞的Hoechst 33342表达情况。【结果】纯化后的皮肤干细胞比例接近90%。Hoechst 33342标记后的皮肤干细胞胞核显示蓝色荧光。在与结膜上皮细胞共培养10d后,皮肤干细胞显示结膜上皮细胞的标志粘蛋白4和角蛋白4阳性,流式细胞术检测阳性细胞比例分别为49.9%和95.6%,同时细胞还显示胞核的Hoechst 33342表达。【结论】灵长类动物恒河猴的皮肤干细胞,在体外的适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞。
- 卢蓉黄丹平黄冰高楠王智崇葛坚
- 关键词：皮肤干细胞结膜上皮细胞恒河猴
- 羊膜接触镜输送人表皮干细胞重建兔角膜上皮被引量：1
- 2009年
- 目的利用眼表生物膜固定装置（BMFD）与羊膜（AM）制成接触镜，输送人表皮干细胞至角膜缘干细胞缺损（LSCD）的兔眼表，并评价其重建角膜上皮的效果。方法制作去角膜上皮及角膜缘干细胞的雌性LSCD兔模型，分为3组：羊膜加人表皮干细胞移植组（n=20），将男性人表皮干细胞悬液注射到BMFD—AM接触镜（简称羊膜接触镜）与眼表之间；羊膜遮盖组（n=20），戴羊膜接触镜；对照组（n=20），单纯药物治疗：裂隙灯显微镜结合角膜荧光素钠染色观察并评价角膜修复情况：随访至角膜完全上皮化后，取角膜组织行病理学检查和免疫组织化学鉴定，PCR检测人Y—STR基因鉴定细胞来源。结果羊膜加人表皮干细胞移植组角膜上皮修复快，平均（5．60±0．46）d达到完全上皮化，另外两组角膜上皮修复迟缓，羊膜遮盖组（9．25±0．51）d、对照组（12．45±0．65）d才完成角膜上皮化（P均〈0．05）。组织病理学示羊膜加人表皮干细胞移植组角膜上皮细胞形态接近正常，K3／K12（＋）、Mucin5AC（-）、K4（-），并可检测到人Y—STR基因。组织病理学示另外两组角膜上皮结膜化，K4（＋）、Mucin5AC（＋）、K3／K12（-）。结论羊膜接触镜联合人表皮干细胞悬液注射能够重建LSCD兔角膜上皮.
- 万鹏霞王智崇马萍高楠
- 关键词：羊膜接触镜上皮角膜
- 新型羊膜接触镜输送移植人表皮干细胞重建兔角膜上皮
- 万鹏霞王智祟马萍高楠
- 诱导骨髓间质干细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究被引量：18
- 2007年
- 目的:观察人骨髓间质干细胞(MSCs)移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:24只新西兰兔随机分为2组。实验组:将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到兔角膜基质;对照组:采用保存羊膜移植到兔角膜基质。分别于移植后1、2、3、4、6和8周,摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查,检查移植到兔角膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况;免疫组织化学检测移植到角膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白K3/12(CK3/CK12)和角蛋白K13(CK13)的表达。结果:MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长,与羊膜共培养4d后,MSCs贴附羊膜生长迅速,组织学特征无明显改变。羊膜负载MSCs移植到兔角膜基质表面,术后免疫组织化学检测角膜上皮层CK3/CK12表达阳性,CK13表达阴性,在重建的角膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞并同时表达角膜上皮细胞特异性表面标志蛋白K3/K12,未发生免疫排斥反应,未见异常增殖细胞。结论:羊膜负载MSCs移植到兔眼表角膜基质后,MSCs能存活、增殖并向角膜上皮样细胞分化。
- 黄丹平葛坚高楠卢蓉高前应
- 关键词：骨髓间质干细胞羊膜上皮角膜细胞分化
- 恒河猴皮肤干细胞的体外培养纯化与鉴定
- 目的:探索恒河猴皮肤干细胞的体外培养及纯化条件,为进一步的研究奠定基础。方法:通过组织块培养法和消化培养法在体外培养恒河猴表皮细胞,然后用Ⅳ型胶原吸附法吸附20分钟,获得快吸附细胞,对快吸附细胞进行克隆培养, 并进行免疫...
- 卢蓉黄丹平宋革黄冰高楠王智崇葛坚
- 文献传递
- 羊膜接触镜输送人表皮干细胞重建兔角膜上皮
- 万鹏霞王智崇马萍高楠
- 猴表皮干细胞横向分化为角膜上皮细胞的研究被引量：7
- 2006年
- 表皮干细胞可以作为角膜上皮细胞的替代物，在自体眼表修复及组织工程生物角膜的构建中将产生不可估量的作用．将体外分离培养的2～4代猴表皮干细胞和人角膜缘基质组织及角膜上皮细胞进行共培养Crranswell法），于共培养前后使用流式细胞仪、RT—PCR和免疫组织化学技术对其分化情况进行检测和鉴定．并于第2，4，6，8和10天进行免疫组织化学染色观察表皮干细胞转分化的比率．实验采用条件培养基诱导法作为对照．表皮干细胞在共培养前表达表皮干细胞标志，K15和整合素β1阳性，K3／K12阴性；共培养后转为表达K3／K12，从基因水平和蛋白质水平表现出角膜上皮细胞的特征，但是条件培养基诱导法阳性率较低．可见，表皮干细胞具有可塑性，在角膜缘基质组织及角膜上皮细胞的调控下，可以横向分化为类角膜上皮细胞，有可能重建角膜上皮，进行自体生物角膜的构建．
- 高楠王智崇黄冰葛坚陈系古卢蓉张可飞范志刚卢丽彭展崔光辉
- 关键词：表皮干细胞角膜上皮细胞
