陈秀华
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：四川农业大学食品学院更多>>
- 发文基金：四川省教育厅自然科学科研项目国家自然科学基金四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学生物学更多>>
- 饲料中苏氨酸含量对建鲤肉质及组织蛋白酶B、L的影响被引量：6
- 2019年
- 该试验测定了饲料中3组苏氨酸含量,即7.4 g/kg(缺乏组)、15.7 g/kg(适宜组)、25.2 g/kg(过量组),对建鲤肉质及组织蛋白酶B、L的影响。通过利用显微镜图像分析各处理组肌纤维特征、鱼肉品质指标,荧光合成肽底物法测定组织蛋白酶B(cathepsin B,CTS B)、组织蛋白酶L(Cathepsin L,CTS L)的活性,免疫组化法测定蛋白表达量,研究发现,饲喂90 d后,适宜组的肌纤维密度最高,肌纤维平均直径(22.12μm)最小;肌原纤维耐折力(0.1163μm)相对较高,而其断裂指数(A540=59.70)最低;剪切力(0.1684 kg·f)最高,失水率(21.02%)最低,p H值(6.91)最低;组织蛋白酶B、L的酶活性及表达量最低。综上,饲料中添加适宜水平苏氨酸能够改善鱼肉肌纤维特性及硬度品质,为通过营养素水平调节而提高建鲤鱼肉品质提供一定理论依据。
- 白稚子刘明宇李树红林昊林灵李冉陈治光陈秀华
- 关键词：建鲤肌纤维特性鱼肉品质组织蛋白酶
- 建鲤组织蛋白酶L的克隆表达、纯化及活性特征鉴定被引量：1
- 2015年
- 首先采用TA克隆技术克隆建鲤组织蛋白酶L（Cathepsin L,CAT L）成熟肽基因片段并进行双酶切鉴定,进而构建表达载体CAT L-p ET-30a并转入宿主菌E.coli BL21,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）在37℃诱导2 h表达重组CAT L蛋白。而后经尿素梯度洗涤和镍离子亲和层析纯化目的蛋白,并利用SDS-PAGE检测诱导效果和纯化过程。最后以荧光合成肽底物（Z-Phe-Arg-MCA）测活法鉴定建鲤重组CAT L的热稳定性、p H稳定性,以及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对其活性稳定性的影响。双酶切鉴定结果表明成功克隆了目的基因片段,与鲤鱼CAT L基因序列相似性为99.11%。SDS-PAGE分析表明经诱导、尿素梯度洗涤及亲和层析后,成功获得高度纯化目的蛋白,分子量约28 ku。活性鉴定结果表明重组CAT L在20~50℃及p H3.0~6.5范围内稳定;氯化钠、焦磷酸钠对重组CAT L活性的抑制作用呈现剂量依赖关系,而各浓度蔗糖、山梨醇则对其活性无明显作用。本研究成功克隆、表达和纯化了建鲤CAT L,并阐明了热、p H及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对该酶稳定性的不同影响。
- 李冉陈治光蒋然然陈秀华李树红李新钟海霞但静
- 关键词：建鲤组织蛋白酶L克隆表达纯化
- 建鲤组织蛋白酶L的原核表达、纯化鉴定及多克隆抗体的制备
- 2015年
- 对原核表达的重组建鲤组织蛋白酶L(Cathepsin L,CAT L)蛋白进行尿素洗涤和Ni-NTA亲和层析纯化,该目的蛋白经300 mmol/L咪唑洗脱为单一峰,SDS-PAGE结合TSK-GEL G2000SWxl凝胶过滤高效液相色谱分析表明重组CAT L获得了高度纯化,分子量约28 k D,纯度超过95%。Z-Phe-Arg-MCA底物测活法显示该重组CAT L表现为半胱氨酸蛋白酶活性,能与其内源抑制因子Cystatin以1︰1的摩尔比结合,具有生物学活性。以纯化的重组CAT L蛋白免疫Balb/C小鼠获得抗血清,经ELISA法检测获得的CAT L抗血清效价高于1︰512000;Western blotting鉴定结果表明该抗体具有良好的特异性,能够识别原核表达的重组CAT L蛋白。免疫组织化学分析结果表明,该抗体还能识别建鲤小肠、肝胰脏、脾、背肌和心肌组织表达的内源性CAT L蛋白。因此可利用该抗体从蛋白水平检测CAT L在鱼类不同组织中的表达和分布情况。
- 李树红陈志光李冉李新李松陈秀华蒋然然李美良马璐阳
- 关键词：组织蛋白酶L原核表达纯化多克隆抗体免疫组化
- 建鲤重组Cystatin蛋白的原核表达、鉴定及多克隆抗体制备被引量：3
- 2014年
- 目的:对建鲤半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPIs)Cystatin进行原核表达和纯化鉴定,并以重组Cystatin为抗原制备多克隆抗体。方法:用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入pET-30a-Cystatin的E.coli BL21(DE3)表达重组蛋白,经过Ni 2+-NTA镍离子亲和层析纯化重组Cystatin,高效液相色谱鉴定重组Cystatin的纯度,Azocasein法测定其对木瓜蛋白酶的抑制作用。利用QuickAntibody-Mouse5W快速佐剂和纯化的重组Cystatin免疫Balb/C小鼠获得抗血清,采用夹心ELISA法鉴定抗血清的效价,Western blotting和免疫组织化学法鉴定抗血清的抗原识别特异性。结果:原核表达的目的蛋白相对分子质量约20 000;镍亲和层析纯化后重组Cystain在SDS-PAGE上显示单一条带,纯度>95%;Azocasein法检测,0.014μg重组Cystain抑制木瓜蛋白酶活性达50%以上;ELISA夹心法检测获得的Cystatin抗血清效价达到1∶512 000;Western blotting检测,转入pET-30a空质粒的全菌蛋白中未检测到Cystatin存在,而在转入pET-30a-Cystatin的全菌蛋白及纯化各步样品中均检测到Cystatin信号,且均为单一条带;免疫组织化学检测,建鲤各组织呈现不同强度的Cystatin阳性染色,抗血清中的多克隆抗体与原核和真核表达的Cystatin均特异性结合。结论:成功表达和纯化了建鲤Cystatin;获得含高效价多克隆抗体的Cystatin抗血清,具有高特异性和灵敏性。
- 李松杨立彬张舒岩金羽陈秀华李新刘玲李树蕾李树红
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂原核表达多克隆抗体
- 饲料中添加硫胺素对建鲤鱼肉、鱼糜品质及肌肉Cystatin/Cathepsins表达的影响
- 本实验主要研究饲料中添加硫胺素(VB1)对幼建鲤肌纤维特性、鱼肉品质及鱼糜冻藏品质的影响。在此基础上，初步探讨具有抗氧化特性的硫胺素通过调节Cystatin/Cathepsins表达影响鱼肉品质形成的可能作用途径，以及其...
- 陈秀华
- 关键词：硫胺素鱼肉品质建鲤抗氧化特性
- 文献传递
- 漂洗水中不同质量分数VB_1对鲢鱼鱼糜冷藏品质的影响被引量：4
- 2014年
- 分析用含不同梯度水平(0.01%、0.05%、0.10%和0.20%)VB1的漂洗水处理鲢鱼鱼糜对其冷藏品质的影响。结果表明:漂洗后,除0.20%组外,其他各处理组的鱼糜pH值均在6.5~7.5的近中性范围,白度与不含VB1的对照组鱼糜差异不显著(P>0.05),且具有正常鱼肉气味,无苦味。漂洗后(冷藏0 d),各处理组鱼糜蛋白总巯基(the total sulfhydryl,TSH)和Ca2+-ATPase(CA)活性极显著(P<0.01)高于对照组;表面疏水性(protein surface hydrophobicity,PSH)则显著(0.05>P>0.01)或极显著(P<0.01)低于对照组。4℃冷藏期间,TSH和CA活性呈下降趋势,6 d时各处理组均显著(0.05>P>0.01)或极显著(P<0.01)高于对照组;PSH呈上升趋势,6 d时除0.01%组外,其余各处理组均极显著低于对照组(P<0.01)。鱼糜硫代巴比妥酸值冷藏4 d内无显著变化(P>0.05),6 d时显著上升(0.05>P>0.01),但各处理组均极显著低于对照组(P<0.01)。上述结果表明在漂洗和冷藏过程中,VB1可通过其抗氧化作用保护鱼糜蛋白免于氧化,延缓鱼糜冷藏品质下降,且综合各项指标,以含0.10% VB1的漂洗水处理鲢鱼鱼糜为佳。
- 陈秀华李松李冉陈治光陈海何杰李美良李树红
- 关键词：鲢鱼鱼糜漂洗冷藏抗氧化
