陈广生
- 作品数：75 被引量：195H指数：8
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金国家杰出青年科学基金更多>>
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- 促凋亡基因bak及其在星形细胞瘤中的表达关系研究被引量：5
- 2003年
- 目的研究促凋亡基因bak及其在星形细胞瘤(Astrocytoma)中的表达与意义,探讨二者之间的关系及对患者临床康复意义。方法采用兔抗人Bak、Bax多克隆抗体及免疫组织化学SABC法。结果在99例星形细胞瘤中Bax阳性反应62例(62.6%),Bax阳性反应60例(60.6%),在10例用于对照的正常脑组织中,Bak阳性仅1例(10%),Bax阳性2例(20%)。Bak、Bax在星形胶质细胞瘤中的表达均强于正常对照组(P<0.01,χ2=6.80);二者在Ⅰ和Ⅱ、Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ级星形胶质细胞瘤相互间表达无显著差异(P>0.05,χ2=3.49);但在50例低度恶性星形细胞瘤(WHOⅠ～Ⅱ级)中明显均强于49例高度恶性星形细胞瘤(WHOⅢ～Ⅳ级)中的表达(P<0.01,χ2=7.71)。结论促凋亡基因促凋亡基因Bak及其Bax在大部分星形细胞瘤中有不同程度表达,Bak、Bax可能协同参与星形细胞瘤的凋亡调变,二者的表达与星形细胞瘤分化有关,其研究有利于采取有效的治疗措施为改善患者生活质量和减少功能损害提供依据。
- 陈广生李青黄高升宋宏萍叶菁
- 关键词：促凋亡基因BAK星形细胞瘤BAX细胞凋亡
- 肿瘤抗原MAGE-3基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆肿瘤抗原MAGE 3基因 3’端 6 5 7bp片段 ,对其编码的蛋白羧基端 97～ 314aa进行原核表达。方法 从含人MAGE 3基因全长cDNA的pUC19 MAGE 3质粒中经聚合酶链式反应 (PCR)扩增 3’端 6 5 7bp片段 ,并克隆入pGEX 4T 1载体 ,构建重组原核表达质粒pGEX MAGE 3,对含有该质粒的大肠杆菌DH5α进行诱导表达。结果 从pUC19 MAGE 3重组质粒中扩增获得一条约 6 6 0bp的条带 ,测序结果表明与GenBank公布的MAGE 3序列一致 ,成功地构建了pGEX MAGE 3原核表达质粒 ,含有该质粒的大肠杆菌DH5α经异丙基 β D 半乳糖苷 (Isopropyl beta D thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后表达Mr 为5 4 0 0 0的谷胱甘肽巯基转移酶 (GlutathioneS transferse,GST)融合蛋白。表达的融合蛋白约占菌体蛋白总量的 2 8%。结论 成功地构建了pGEX MAGE 3原核表达质粒 ,获得了MAGE 3蛋白羧基端 97～ 314aa融合蛋白 ,为该蛋白应用于肿瘤免疫治疗奠定了基础。
- 马加海隋延仿叶菁黄亚渝陈广生张秀敏
- 关键词：原核表达聚合酶链式反应
- 携带人MAGE-1基因重组腺病毒的构建及其在肝癌细胞中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建人黑色素瘤相关抗原-1(MAGE-1)基因的腺病毒,并研究其感染肝癌细胞系HepG2细胞的效率。方法采用基因克隆技术,将人MAGE-1基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-IRES-hrGFP中,构建pShuttle-MAGE-1-IRES-hrGFP质粒,利用细菌BJ5183将穿梭质粒与pAdEasy-1进行重组,获得重组的腺病毒质粒。线性化的腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增。采用CsCl密度梯度离心进行病毒浓缩和纯化。获得的腺病毒感染肝癌细胞HepG2,观察其感染效率和MAGE-1表达水平。结果通过酶切鉴定证明腺病毒载体构建成功,包装出携带人MAGE-1基因的腺病毒,滴度达2.1×1010pfu/mL,获得的腺病毒对HepG2细胞的感染效率高于98%以上。结论成功地利用细菌内同源重组方法构建了携带人MAGE-1基因的腺病毒,并能够在肝癌细胞中高效地表达,为利用MAGE-1进行免疫治疗提供了材料。
- 张利军张惠忠陈广生叶菁师建国
- 关键词：腺病毒肝细胞癌
- 冷冻保存人鼻中隔软骨被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨不同冷藏温度下保存成人鼻中隔软骨块活性的可行性。方法:实验于2005-03/09在解放军第四军医大学基础部病理与病理生理博士后流动站完成。取临床常规手术切除的成人鼻中隔软骨15块,切成大小约15mm×10mm,随机分成3组,每组5块。分别置入4℃,-20℃和-80℃冷冻保存,在保存24h,7d,14d,20d和30d时取材,进行软骨活性比较。①软骨样品于质量浓度为40g/L甲醛固定后制备石蜡切片,组织切片经苏木精-伊红染色和阿尔辛蓝染色后于光学显微镜下观察软骨细胞及软骨基质。②锥虫蓝排斥试验检测软骨细胞活性,根据下式求细胞活力:活细胞率(%)=活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%。结果:①软骨石蜡切片经苏木精-伊红染色和阿尔辛蓝染色后于光学显微镜下观察可见:冷冻保存24h时,各组软骨中大部分为活的软骨细胞充填软骨陷窝,软骨基质无明显变化,鼻中隔软骨活性程度较好。-80℃冷冻保存7d,-20℃保存14d及各组保存30d后,软骨细胞基本变性坏死,胞核消失,基质成份断裂、强度降低。4℃保存20d软骨中部有较多变性细胞,但软骨基质中酸性黏多糖及胶原成分无明显断裂现象。②-80℃冷冻保存软骨在保存24h时,软骨细胞活性为80%;保存7d时软骨基本失去活性,软骨细胞及基质变性坏死。-20℃保存软骨在保存24h时,软骨细胞活性为85%;14d后软骨基本失去活性。4℃保存软骨在保存24h至20d时仍保持较好活性,软骨细胞活性保持在60%以上,软骨细胞及基质成分无明显变化;保存30d时软骨活性降为20%左右。结论:4℃和-20℃在2周内保存是较好的鼻中隔软骨保存方法,而4℃保存法更具优越性,有望为临床提供一种较好的活性软骨保存方法。
- 赵大庆赵春晨江逊牛霞陈广生马钰李航李青
- 关键词：软骨鼻中隔冷冻保存
- 点突变SEA(D227A)的基因构建、原核表达与鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 :进行点突变的SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体的构建 ,并进行表达、分离纯化与鉴定。方法 :采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使得到的SEA基因 75 2位碱基突变由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7位氨基酸残基由D(GAT)突变为A(GCT) ,构建pRSET SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中进行原核表达 ,再通过Westernblot进行鉴定。结果 :构建的SEA(D2 2 7A)基因经测序证实与设计的序列一致。成功地构建pRSET SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,通过IPTG诱导得到分子量约为 32kD的蛋白 ,Westernblot显示其能够与抗SEA的单克隆抗体特异性结合 ,最后采用Ni2 + NTA柱进行分离纯化。结论 :成功地构建SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 。
- 叶菁隋延仿陈广生李增山张秀敏曹云新
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A超抗原原核表达点突变
- 超抗原SEA的基因克隆、原核表达与鉴定被引量：7
- 2002年
- 目的 构建pRSET SEA重组表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)pLysS ,诱导表达超抗原葡萄球菌肠毒素A(staphylococcalenterotoxinA ,SEA) ,进行分离、纯化及westernblot鉴定。方法 采用PCR技术 ,从产SEA的葡萄球菌标准菌株FRI1 0 0基因组DNA中获得SEA全长序列 ,克隆入pUC1 9中 ,进行测序 ,构建pRSET SEA表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)pLysS ,通过异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (isopropyl beta D thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达 ,分离、纯化及westernblot鉴定。结果 PCR获得超抗原SEA基因片段 ,DNA测序结果与文献报道一致 ;构建了pRSET SEA表达质粒 ,并成功地诱导表达出32 0 0 0u的蛋白 ;Westernblot鉴定所得蛋白能够与SEA单克隆抗体特异性结合。结论 本研究成功地克隆了SEA全长 ,并进行了原核表达和分离、纯化 ,获得了SEA蛋白。
- 叶菁隋延仿李增山陈广生张秀敏曹云新
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A超抗原原核表达PCR
- Axin与细胞信号转导的研究进展
- 2005年
- 张彦骅陈广生李青
- 关键词：WNT信号转导通路JNK信号转导通路肿瘤抑制物
- 兔抗MAGEn血清的制备、纯化及鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的: 制备高效价、特异性的兔抗人MAGE-n血清。方法: 对原核表达的MAGE-n蛋白进行纯化, 与弗氏佐剂混合免疫新西兰兔制备抗血清, 用硫酸铵盐析法及溴化氰活化的Sephrose4B(CNBr-ActivatedSephrose4B)亲和层析柱纯化抗血清, 以双向免疫扩散实验、ELISA、Westernblot和免疫组化对兔抗人MAGE-n血清进行鉴定。结果: 经免疫得到高效价的兔抗人MAGE-n血清, 抗血清能够与MAGE-n特异性结合, 免疫组化结果表明MAGE-n是一种胞质蛋白。结论: 用MAGE-n蛋白与弗氏佐剂混合免疫兔, 制备得到高效价的抗血清, 纯化后的特异性兔抗人MAGE-n血清, 为进一步研究MAGE-n在各种组织中的表达奠定了基础。
- 黄亚渝叶菁马加海陈广生宋宏萍隋延仿
- 关键词：抗血清纯化
- MAGE-n的原核表达与分离纯化被引量：13
- 2004年
- 目的 构建MAGE n的原核表达质粒 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并通过谷胱甘肽巯基转移酶 (GlutathioneS trans ferse,GST)纯化系统进行分离纯化。方法 用ANTHEPROTV5 .0软件预测MAGE n的生物学特性 ,从中选择抗原性及特异性较强的一段。利用PCR方法扩增MAGE n基因片段 ,连入原核表达载体pGEX 4T 1,构建MAGE n的原核表达质粒pGEX MAGE n并测序。将该质粒转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达和分离纯化。结果 成功地扩增了MAGE n基因片段 ,测序结果表明与GenBank公布的序列一致 ,成功地构建了pGEX MAGE n原核表达质粒 ,含有该质粒的大肠杆菌经异丙基 β D 半乳糖苷 (Isopro pyl beta D thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后表达一Mr 约为 4 30 0 0的蛋白 ,经GST融合蛋白纯化系统纯化 ,得到了MAGE n的重组蛋白。结论 首次获得了新的肿瘤抗原MAGE n的重组蛋白 ,并进行分离纯化 ,为进一步研究MAGE
- 黄亚渝隋延仿叶菁董海龙陈广生张秀敏
- 关键词：原核表达纯化重组蛋白
- MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建及在小鼠黑色素瘤细胞内的表达
- 2006年
- 目的:构建MAGE-1(melanomaantigen1)与人HSP70(heatshockprotein70)融合基因的真核表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70,并观察在小鼠黑色素瘤细胞内的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法:HSP70基因经酶切后连入真核表达载体PIRES2-EGFP,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因,测序后插入PIRES2-EGFP-HSP70中HSP70基因的5'端,构建了MAGE-1与人HSP70融合基因表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70。结果:扩增了MAGE-1基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致,成功地构建了PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70真核表达载体。结论:成功地构建MAGE-1与人HSP70融合基因的真核表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70,并在小鼠黑色素瘤细胞系稳定表达,为进一步DNA肿瘤疫苗研究提供了实验基础。
- 陈广生隋延仿叶菁宋宏萍黄亚渝马加海张秀敏
- 关键词：融合基因
