钟乃凤
- 作品数：13 被引量：27H指数：3
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家自然科学基金贵州省卫生厅科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 2-型猪链球菌保护性抗原ESA的细胞定位及B细胞表位预测
- 2016年
- 通过生物信息学方法预测2-型猪链球菌（Streptococcus suis serotype 2,SS2）保护性抗原ESA（epidermal surface antigen,ESA）在SS 2中的分布和B细胞表位,为研究SS2的多表位疫苗奠定基础。以ESA推定的氨基酸序列为基础,通过生物信息学软件对ESA进行信号肽、跨膜序列等分析,然后分别以Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法分析蛋白的亲水性、表面可能性以及抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法分析蛋白二级结构中柔性区域,进而预测ESA的B细胞表位。结果表明,ESA为跨膜蛋白,B细胞表位位于N-端第30~35、59~64、178~185、245~253区域。多参数或多个软件联合使用能预测SS2保护性抗原ESA的B细胞表位和细胞定位,为实验研究提供帮助,大大缩减实验时间。
- 刘丽娜钟乃凤王赟张洁周静
- 关键词：ESA细胞定位B细胞表位
- 不同方式构建的单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的活性分析被引量：6
- 2015年
- 为了研究不同方式构建的单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白原核表达后的生物活性差异,并分析其可溶性表达的影响因素,本研究通过基因工程操作构建含有不同类型的单链抗体-碱性磷酸酶融合基因的表达载体,优化原核表达条件并诱导表达,比较分析宿主菌、连接肽、抗体的单体或二聚体等因素对融合蛋白可溶性表达和生物活性的影响。结果显示不同方式构建的单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的活性差异显著,在单链抗体和碱性磷酸酶之间添加连接肽能够获得更高活性的融合蛋白,而单链抗体二聚体与碱性磷酸酶的融合蛋白的活性明显降低。因此,单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的可溶性表达和活性与单链抗体及其构建方式有关,而抗体自身的特性起着关键性作用。
- 王赟周静刘丽娜钟乃凤王玉林胡祖权
- 关键词：单链抗体碱性磷酸酶可溶性免疫检测
- 金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用研究被引量：1
- 2016年
- 为研究金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用,分别用纯化蛋白StbA、SirH以及甲醛灭活的金黄色葡萄球菌为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定血清效价,然后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价两种抗原的免疫保护作用。分别用SirH和StbA抗血清免疫小鼠,4 h后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价抗血清的保护作用。结果显示,StbA和SirH抗血清效价均为1：1 638 400。金黄色葡萄球菌攻击主动免疫小鼠,SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均明显高于对照组（0%）（P〈0.05）,金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）存活率与对照组（0%）差异不具备显著统计学意义（P〉0.05）。SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均高于金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）。将抗血清免疫小鼠后,用金黄色葡萄球菌腹腔内注射攻击小鼠,免疫组小鼠16-18 h内全部死亡,而对照组小鼠在攻毒后12-14 h内全部死亡。结果表明,SirH和StbA是具有潜力的保护性抗原,但其抗血清都不具有保护作用。
- 刘丽娜钟乃凤王赟周静张洁
- 关键词：金黄色葡萄球菌疫苗抗原抗血清免疫保护
- 课程思政在生物技术与疾病诊断课程中的实践体会被引量：2
- 2021年
- 本文介绍结合生物技术专业特点推进生物技术与疾病诊断课程思政的建设,重点探讨如何立足专业特色转换教学思路,以专业课程教学为前提进行家国情怀及使命担当、服务地方生物医疗卫生事业、遵守职业道德等思政元素挖掘,在课程教学的专业知传授中结合课程思政元素的经验与体会,以期为相关专业课程思政建设提供一些思路和参考。
- 钟乃凤胡祖权刘丽娜张婷婷张洁
- 关键词：教学实践教学研究
- 金黄色葡萄球菌基因组表达文库的构建及免疫学初步筛选
- 2016年
- 为从基因组水平筛选金黄色葡萄球菌疫苗抗原，建立金黄色葡萄球菌基因组表达文库，用患者恢复期血清对表达文库进行血清学筛选，并对获得的阳性克隆进行序列测定及同源性分析。结果显示，构建的金黄色葡萄球菌基因组表达文库共有5x10。个克隆，片段插入正确率为91．67％。对文库进行初步筛选，共获得6个阳性克隆，经测序鉴定和同源性分析发现6个克隆涉及金黄色葡萄球菌基因组6个开放阅读框（ORF）。结果表明，本研究建立的疫苗抗原筛选方法可用于金黄色葡萄球菌疫苗抗原的系统筛选。
- 刘丽娜张洁周静钟乃凤胡祖权王赟
- 关键词：金黄色葡萄球菌免疫学筛选疫苗抗原
- MsrB1对ONOO^-诱导的人晶状体上皮细胞周期的影响
- 2015年
- 目的探讨蛋氨酸亚砜还原酶B1(methionine sulfoxide reductase B1,MsrB1)基因沉默对过氧亚硝酸根(ONOO-)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)细胞周期的影响和ERK信号通路在其中的调节作用。方法将培养的HLEC分为两组:正常组和MsrB1基因沉默组,分别用0μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1和300μmol·L-1 ONOO-处理20 min后,继续培养12 h。用RT-PCR法检测MsrB1基因表达水平变化,流式细胞仪检测细胞周期水平变化,Western blot法检测MsrB1基因沉默和ONOO-对pERK表达水平的影响。结果 300μmol·L-1 ONOO-处理HLEC会导致MsrB1表达水平显著下降(P<0.01),当MsrB1基因沉默细胞经300μmol·L-1ONOO-处理后,MsrB1表达水平进一步显著下调(P<0.05)。经200μmol·L-1或300μmol·L-1 ONOO-处理,HLEC细胞周期分别阻滞在G2/M期和S期,当MsrB1基因沉默细胞经200μmol·L-1或300μmol·L-1 ONOO-处理后,更多的细胞阻滞在G2/M期或S期(P<0.05)。pERK检测结果表明,MsrB1基因沉默前后经ONOO-处理导致的细胞周期阻滞和pERK表达水平显著下降有关(P<0.01)。结论 ONOO-可以下调HLEC MsrB1表达水平,MsrB1基因沉默细胞经ONOO-处理,pERK表达水平显著下降,导致更多细胞阻滞在G2/M期和S期。
- 贾义钟乃凤周静
- 关键词：人晶状体上皮细胞细胞周期细胞外信号调节激酶
- 金黄色葡萄球菌疫苗候选分子StbA主要抗原表位区的表达及重组蛋白抗血清的制备被引量：4
- 2015年
- 通过生物信息学软件分析金黄色葡萄球菌转铁蛋白结合蛋白(StbA)的主要抗原表位区,PCR扩增StbA主要抗原表位区的编码序列;将该序列插入表达载体pGEX-4T-1中,测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌能表达出分子质量约为54 000u的重组融合蛋白。表达产物经亲和层析纯化后可获得较高纯度的目的蛋白。Western-blot检测证实该重组蛋白能与乳腺炎患病奶牛恢复期血清发生阳性反应。ELISA结果显示,重组蛋白免疫新西兰大白兔能产生高效价的抗血清,提示StbA主要抗原表位区能刺激机体产生强大的免疫应答,StbA是一个有潜力的保护性抗原候选分子。
- 刘丽娜张洁周静钟乃凤胡祖权贾义谭承建
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗血清制备
- 检测不同活动期强直性脊柱炎患者Th1、Th2、Th17细胞的临床意义被引量：9
- 2014年
- 目的初步探讨辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞2(Th2)和辅助性T细胞17(Th17)在强直性脊柱炎(AS)发生、发展中的作用及临床意义。方法应用流式细胞术(FCM)及细胞内因子染色技术(ICS)检测78例AS患者(其中低活动性AS 44例、高活动性AS 34例)和30例健康体检者(正常对照组)外周血中Th1细胞、Th2细胞和Th17细胞数量,分析与AS活动性的相关性。结果 AS组、低活动性AS组和高活动性AS组外周血Th1细胞比例分别为15.86%±3.30%、14.18%±2.35%和17.75%±3.14%,均明显高于正常对照组(12.05%±2.35%,P<0.01),且高活动性AS组明显高于低活动性AS组(P<0.01)。AS组和高活动性AS组外周血Th2细胞比例分别为1.51%±0.51%、1.31%±0.41%,均明显低于低活动性AS组(1.90%±0.51%)和正常对照组(1.98%±0.60%)(P均<0.05)。AS组、低活动性AS组和高活动性AS组外周血Th17细胞比例分别为1.57%±0.78%、1.26%±0.57%和2.00%±0.86%,均明显高于正常对照组(0.82%±0.35%,P<0.05),且低活动性AS组明显低于高活动性AS组(P<0.01)。相关分析显示AS患者外周血Th1细胞、Th17细胞比例与Bath AS病情活动指数(BASDAI)呈正相关[相关系数(r)分别为0.809、0.409,P均<0.01],Th2细胞与BASDAI呈负相关(r=-0.340,P<0.01)。结论 AS患者CD4+T淋巴细胞亚群功能异常,由此导致的细胞因子网络失衡及体内免疫功能紊乱参与了AS的发生、发展。检测外周血Th1、Th2、Th17细胞数量有助于判断AS病情、提示预后。
- 钟乃凤马莉
- 关键词：辅助性T细胞17强直性脊柱炎
- 金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备被引量：1
- 2014年
- 为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清,通过生物信息学软件分析SirH的主要抗原表位区,PCR扩增SirH主要抗原表位区的编码序列,插入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,GST亲和层析纯化获得重组蛋白后,采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清效价。结果显示,PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759bp,SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54ku,与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白,Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409 600以上。结果表明,SirH主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答,SirH是一个有潜力的疫苗候选抗原。
- 刘丽娜张洁周静胡祖权贾义钟乃凤谭承建
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗原表位蛋白表达抗血清制备
- 锌对3-吗啉-斯得酮亚胺(SIN-1)诱导的人晶状体上皮细胞Cu/Zn-SOD表达及活性的影响被引量：3
- 2017年
- 目的研究补锌和缺锌条件下3-吗啉-斯得酮亚胺(SIN-1)对人晶状体上皮细胞铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)表达及活性的影响。方法将培养的SRA01/04细胞系分为6组:对照组、SIN-1处理组、补锌组、补锌联合SIN-1处理组、缺锌组和缺锌联合SIN-1处理组。采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒分别检测Cu/Zn-SOD蛋白表达和活性水平的变化。结果我们选择对细胞存活率无显著影响的50μmol·L^(-1)ZnSO_4和1μmol·L^(-1)N,N,N,N-四-(2-吡啶基甲基)乙二胺作为补锌和缺锌的条件,选择对细胞存活率有显著影响的500μmol·L^(-1)SIN-1作为细胞受损的条件。在此条件下对照组、SIN-1处理组、补锌组、补锌联合SIN-1处理组、缺锌组和缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率分别为(100.0±1.4)%、(84.7±1.8)%、(101.2±1.6)%、(95.5±1.9)%、(100.9±2.3)%和(75.3±1.2)%,与对照组相比,SIN-1处理组和缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率均显著下降(均为P<0.05),与SIN-1处理组相比,补锌联合SIN-1处理组的细胞存活率显著升高(P<0.05),缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率则进一步下降(P<0.05)。各组的Cu/Zn-SOD蛋白相对表达量分别为1.005±0.007、0.991±0.015、1.044±0.008、0.945±0.007、1.278±0.011和0.850±0.057,Cu/Zn-SOD活性分别为(1.00±0.03)U、(0.85±0.05)U、(1.69±0.04)U、(1.35±0.05)U、(1.52±0.04)U和(1.09±0.03)U。与对照组相比,补锌组和缺锌组Cu/Zn-SOD蛋白表达量和活性均显著增加(均为P<0.05)。分别与补锌组或缺锌组相比,补锌联合SIN-1处理组和缺锌联合SIN-1处理组的Cu/Zn-SOD蛋白表达水平和活性均显著下降(均为P<0.05)。结论补锌可以通过上调Cu/Zn-SOD的表达水平和活性,保护人晶状体上皮细胞抵抗由SIN-1造成的损伤,可能对白内障的形成有抑制作用。
- 贾义宋萍萍周静钟乃凤
- 关键词：人晶状体上皮细胞锌铜锌超氧化物歧化酶
