郑建
- 作品数：29 被引量：86H指数：5
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金农业部动物疫情监测与防治项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达及抗原性研究被引量：2
- 2010年
- 目的构建HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达载体,诱导表达HIV抗原,为HIV快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。方法用PCR方法对HIV-1包膜蛋白gp41和HIV-2包膜蛋白gp36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体pQE30、pET32a（＋）及pGST-MOLUC,重组质粒经异丙基硫代半乳糖苷（isopro-pyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达,并经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和纯化HIV跨膜糖蛋白抗原,对获得的纯化抗原进行Western blot检测,利用HIV抗原制备ELISA检测试剂盒,并分析HIV临床样本。结果成功构建了HIV包膜蛋白的原核表达载体,利用亲和层析纯化得到了纯度较高的HIV包膜蛋白;Western blot分析结果证实表达纯化的HIV跨膜蛋白gp41（aa.538~718）、gp36（aa.533~764）以及gp41-gp36均能和HIV阳性血清反应;ELISA试剂盒检测临床样本显示,特异性达95%以上,灵敏度达100%。结论获得了有生物学活性的HIV截短包膜蛋白,并可用于HIV快速检测试剂盒的研发。
- 袁作为帅光泽张君胡接力郑建
- 关键词：抗原性
- 抗2型登革病毒M蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的克隆表达2型登革病毒M蛋白,用纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备可用于胶体金快速检测试条的抗2型登革病毒M蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用登革热2型病毒全长基因重组质粒,经PCR方法扩增出prm/m基因片段,在pET-32a(+)表达系统中表达,表达产物用Ni柱亲和层析纯化后,用于免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗M蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞Ⅲ1A6和Ⅲ3D2;相对亲和力均在105以上。Western blot显示2株mAb能特异识别重组M蛋白。结论成功地制备出抗登革病毒2型病毒M蛋白的2株mAb,为建立快速特异检测登革病毒的实验方法提供了有力的工具。
- 张娟但妍张君蔡雪飞陈婧郑建黄爱龙
- 关键词：登革病毒M蛋白单克隆抗体生物学特性
- O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定
- 2013年
- 目的:以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法:运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao3G6单抗为靶蛋白,进行噬菌体随机肽库3轮筛选,以双抗夹心ELISA和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽与筛选配基的结合能力及特异性,并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果:3轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,夹心ELISA检测随机挑取的25个噬菌体克隆,有22个噬菌体克隆为阳性,测序表明其中20个阳性克隆的氨基酸序列完全一致,均为APAIPAS。对该序列同源性分析,未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明,O1群小川型霍乱弧菌脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)能很好地抑制阳性克隆与IXiao3G6McAb的结合,抑制程度随LPS浓度的升高而增加,而对照细菌的LPS则不具有相应的抑制作用,进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了O1群小川型霍乱弧菌LPS抗原表位。结论:筛选到模拟O1群小川型霍乱弧菌LPS的抗原表位的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。
- 张娟吴倩彭辉何岸陈维贤黄爱龙郑建
- 关键词：单克隆抗体噬菌体随机肽库模拟肽
- 艰难梭状芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活性被引量：1
- 2013年
- 目的原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性。方法采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性。结果重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正确,重组蛋白的相对分子质量约46 000,可与抗His单抗特异性结合,主要以可溶性形式表达。纯化的目的蛋白纯度可达90%,浓度为1.7 mg/ml。纯化蛋白GDH以NADPH和NADP为辅酶,酶活性分别为42.6和63.3 U/L。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组CD GDH,纯化的目的蛋白纯度高,具有GDH酶活性,为制备GDH单克隆抗体奠定了基础。
- 杜茜吴志鹃蔡雪飞袁作为张君郑建
- 关键词：谷氨酸脱氢酶基因表达纯化酶活性
- 幽门螺杆菌EPIYA多态性与胃癌关系的研究进展被引量：2
- 2015年
- 胃癌是世界第二位致死性肿瘤。大量研究表明,胃癌的发生与幽门螺杆菌(Hp)合成分泌的CagA蛋白密切相关。CagA蛋白羧基末端EPIYA重复序列是酪氨酸磷酸化的主要位点,EPIYA的不同基序片段磷酸化后会引起细胞信号转导通路改变,进而影响细胞有丝分裂,引起细胞形态发生改变,最终导致胃黏膜细胞癌变。因此EPIYA基序多态性可能与胃癌发生密切相关,但目前有关这一关系的前瞻性流行病学研究结果存在争议。此文从EPIYA结构的多态性出发,对比不同方法、不同地域的研究,就EPIYA多态性与胃癌发生的关系作一综述。
- 林震郑建
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA胃癌
- HBV前S2蛋白的研究进展被引量：5
- 2008年
- 随着现代分子生物学和病毒基因工程技术的广泛应用,有关乙型肝炎病毒颗粒表面的preS2蛋白的研究己取得了较大进展。本文综述了近年来有关研究的成果,重点对preS2的基因结构、生物学功能及临床诊断意义等方面的进展进行讨论。
- 赖梅梅郑建
- 关键词：乙型肝炎病毒前S2
- 霍乱疫苗的研究现状与展望
- 2009年
- 从1883年Koch发现霍乱弧菌至今，霍乱疫苗的研究已有100多年的历史。早期的灭活霍乱弧菌全菌苗为注射用疫苗，因保护力低，不良反应大，已停止使用。目前研制的口服疫苗，主要有灭活的全菌体疫苗及减毒活疫苗，这些口服疫苗在国内外还处于大规模的试验和论证中，世界卫生组织还未正式通过使用任何一种口服霍乱疫苗。发展有效的霍乱疫苗需要新思路，采取更灵活、更切合实际和更富有针对性的预防措施。基因工程疫苗的飞速发展为研制理想霍乱疫苗提供了强有力的理论技术支持，着眼于抗原表位的肽疫苗越来越受到关注和认可。
- 张娟郑建黄爱龙
- 关键词：口服霍乱疫苗基因工程疫苗霍乱弧菌口服疫苗减毒活疫苗
- 基于线粒体DNA控制区的黄姑鱼养殖群体与野生群体比较研究被引量：8
- 2021年
- 黄姑鱼(Nibea albiflora)是我国重要的经济鱼类。由于受到过度捕捞和环境污染等因素的影响,野生黄姑鱼资源量急剧下降。为了解黄姑鱼野生群体与养殖群体的种质资源现状,本研究扩增了2个野生群体和2个养殖群体的线粒体DNA控制区高变区部分序列,同时结合NCBI数据库中部分已发表序列进行分析。研究显示:173个黄姑鱼个体共检测到62个单倍型,其中养殖群体仅7个;养殖群体和野生群体之间仅存在1个共享单倍型;养殖群体单倍型多样度(0.4160~0.7123)明显低于野生群体(0.9130~0.9926)。基于线粒体DNA控制区单倍型构建的网络图未发现明显的谱系结构。群体间遗传分化指数FST显示,黄姑鱼养殖群体间以及养殖群体与野生群体间产生了较大的遗传分化。AMOVA分析结果显示,群体内部遗传变异占绝大部分。黄姑鱼野生群体的历史动态分析结果暗示,其可能经历过近期群体扩张事件。综合上述结果,黄姑鱼养殖群体遗传多样性显著降低,有必要开展黄姑鱼遗传多样性监测工作,并采用科学的人工繁育方法,保护黄姑鱼的优质种质资源。
- 赵祥郑建高天翔宋娜
- 关键词：黄姑鱼线粒体DNA控制区野生群体养殖群体
- 重组冠状病毒核衣壳蛋白血清抗体检测被引量：5
- 2004年
- 目的 SARS冠状病毒的核衣壳 (Nucleocapsid)蛋白 (N蛋白 )是病毒的主要结构抗原 ,重组N蛋白可用作抗原检测患者血清中相应抗体。方法 以纯化的目的蛋白N 1,N 2分别包被 96孔板 ,检测正常人群及患者血清中抗SARS病毒抗体。结果 检测SARS感染患者血清 ,N 1阳性检出率为 5 5 .6 8% ,N 2阳性检出率为 5 6 .82 % ,与华大基因试剂盒相比符合率分别为 90 .12 %和 87.6 5 %。结论 重组核衣壳蛋白可做为检测SARS抗体的抗原蛋白。
- 蒲丹闫歌张秉强宋文鑫高小玲唐霓王丕龙郑建黄爱龙闫惠平檀玉芬
- 关键词：SARS核衣壳蛋白ELISA抗体
- 特异性O1群稻叶型霍乱弧菌单克隆抗体的制备、筛选及识别抗原表位的分析被引量：1
- 2008年
- 目的制备并筛选出高特异性高活性的抗O1群稻叶型霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合制备特异性McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行了特异性及排除性筛选,对筛选出的特异性McAb进行了包括亚型鉴定,效价、亲和常数的测定以及特异性的鉴定与分析,并通过单克隆抗体的位点相加实验、与O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖(LPS)的间接ELISA和Western blot实验对McAb识别的抗原表位进行了初步分析。结果融合了386株能分泌抗O1群稻叶型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,通过用O1群小川型、O139霍乱弧菌及9种非霍乱弧菌的细菌进行的筛选,最后得到4株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其分泌的抗体亚类分别为2株IgG1,1株IgG2a,1株IgG2b;腹水效价均达10-6;亲和常数达108以上。间接ELISA法及Western blot证实所获的McAb可与O1群稻叶型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示4株McAb识别不同的抗原表位,与LPS的反应表明其中2株针对O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖,2株针对非脂多糖抗原位点。结论获得霍乱弧菌O1群稻叶型特异性McAb,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。
- 张娟张君余晓林吴倩蒋飞龙黄长武李兴禄黄爱龙郑建
- 关键词：霍乱单克隆抗体表位
