葛正龙
- 作品数：103 被引量：228H指数：7
- 供职机构：遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省科技厅社会发展攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- c-mycASODN对半乳糖诱导的晶体上皮细胞中两种抗氧化酶活性的影响
- 2003年
- 目的 探讨ASODN对半乳糖性白内障晶体上皮细胞 (LEC)中抗氧化系统活力的影响。方法 采用组织培养方法 ,以半乳糖诱发兔晶状体形成白内障 ,以不同浓度c mycASODN导入LEC后检测LEC中GSH Px、SOD活性。结果 在半乳糖性白内障形成过程中 ,LEC中GSH Px、SOD活性明显降低 ,导入不同浓度c mycASODN后 ,LEC中GSH Px、SOD活性明显增加。结论 在半乳糖性白内障形成过程中 ,导入c mycASODN后能改善LEC的抗氧化能力。
- 范芳葛正龙曾小平李海祥李长福
- 关键词：反义C-MYC寡核苷酸半乳糖抗氧化系统上皮细胞抗氧化酶
- 马铃薯块茎特异性启动子克隆及其驱动的hIL12表达载体构建被引量：7
- 2014年
- 目的克隆马铃薯块茎特异性的高效启动子Ppatatin并构建其驱动的人白细胞介素-12(hIL12)植物表达载体。方法提取马铃薯基因组DNA作为模板,根据Genebank数据库信息设计Ppatatin序列特异性引物,通过PCR扩增获得Ppatatin片段,并进行测序鉴定;利用PLACE等数据库对序列进行启动子元件分析;通过重叠PCR、限制性内切酶酶切、体外连接、转化等技术,以双元载体pCambia-2301为骨架,构建Ppatatin驱动的hIL12表达载体。结果成功从马铃薯基因组中扩增得到了1019 bp大小的启动子片段,序列分析表明该片段含有典型的启动子元件如TATA-box,以及一些组织特异性的相关响应元件,符合组织特异性启动子的特征;成功获得了基于pCambia-2301的Ppatatin驱动的hIL12植物表达载体。结论获得的Ppatatin启动子及其驱动的hIL12表达载体,为提高hIL12在植物生物反应器中表达量以及优化马铃薯生物反应器打下了基础。
- 杨加伟李伟葛正龙
- 关键词：植物生物反应器
- 人单链白细胞介素12的原核表达和生物学活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12。方法 PCR法从质粒pCA13-hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌液进行蛋白质印迹分析,经镍柱亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,体外增殖实验检测其生物学活性。结果 PCR扩增、双酶切及DNA序列测定证实pET28a(+)载体上成功插入了hscIL-12基因片段。表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其相对分子质量为70×103;蛋白质印记表明重组蛋白具有hscIL-12抗原活性;表达产物纯化、复性后进行体外生物学活性实验表明,该重组蛋白能刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IFN-γ。结论 pET28a(+)-hscIL-12原核表达载体的构建和重组hscIL-12蛋白的制备为进一步研究hscIL-12生物学功能和临床应用奠定了基础。
- 周鹤峰邵敏姬可平葛正龙
- 关键词：大肠杆菌生物学活性
- 反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞的抑制作用被引量：4
- 2004年
- 目的 :探讨反义bcl 2寡核苷酸 (bcl 2ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞 (LEC)生长的影响 .方法 :人工合成与bcl 2基因翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞 ,应用细胞计数法和MTT法观察反义bcl 2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响 .结果 :2 .5～ 1 0 .0 μmol/L反义bcl 2寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖 ,1 0 .0μmol/L时作用较显著 .结论 :反义bcl
- 李长福范芳葛正龙李海祥曾小平
- 关键词：反义寡核苷酸半乳糖晶体上皮细胞
- 层析技术在基因工程产品生产中的研究进展被引量：1
- 2014年
- 层析技术在基因工程产品的生产中应用日新月异，运用方法也各不相同，这里重点阐述了免疫亲和层析、离子交换层析、高效液相离子交换层析、高效液相亲和层析在基因工程产品的生产中的应用。
- 黄进葛正龙
- 关键词：基因工程
- 非溃疡性消化不良病人胃粘膜分泌维生素C的研究被引量：3
- 1997年
- 目的：研究非溃疡性消化不良病人胃粘膜分泌维生素Ｃ（ＶｉｔＣ）的变化以及与幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染、胃酸分泌、年龄和性别的关系。方法：用高铁还原法测定血浆和胃液中ＶｉｔＣ浓度，以１小时内ＶｉｔＣ从血液到胃液中的清除率代表胃粘膜分泌Ｖｉｔｃ的能力。结果：胃粘膜的ＶｉｔＣ分泌与Ｈｐ感染与否无关（Ｐ＞０．０５）：ＶｉｔＣ分泌与胃酸分泌呈明显正相关（ｒ＝０．８４），在给五肽胃泌素后，随着胃酸分泌的增加，ＶｉｔＣ分泌也增加：４０岁以上病人的ＶｉｔＣ分泌明显低于３９岁以下病人（Ｐ＜０．０１）。结论：胃粘膜的ＶｉｔＣ分泌不受Ｈｐ感染的影响：ＶｉｔＣ分泌与胃酸分泌明显相关；另外，ＶｉｔＣ分泌也与年龄有关，４０岁以上病人的Ｖｉｔｃ分泌明显减少，推测其胃癌发生率增高可能与ＶｉｔＣ分泌减少有关。
- 庹必光晏永慧葛正龙欧钢卫黄发林赵逵李长福
- 关键词：维生素C胃酸幽门螺杆菌
- 从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析被引量：1
- 2009年
- [目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。
- 黄进罗果葛正龙
- 关键词：纯化生物学活性转基因马铃薯
- 人α防御素2真核表达载体的构建及表达
- 2014年
- 目的:构建人α防御素2(α-HNP2)真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(+)/α-HNP2,并实现其在CHO细胞中的表达,初步鉴定表达蛋白的抑菌活性。方法:以PBMC细胞总RNA为模板,利用RT-PCR法,扩增得到α-HNP2基因,构建真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(+)/α-HNP2,脂质体法转染CHO细胞,G418筛选稳定表达的阳性克隆。用RT-PCR和Western blot检测α-HNP2蛋白的表达,同时检测表达产物的抑菌活性。结果:经PCR、酶切和DNA测序分析表明重组载体构建成功,并在CHO细胞中表达融合蛋白,琼脂平板扩散实验结果表明融合蛋白在大肠杆菌平板上形成明显抑菌圈。结论:CHO细胞中表达有活性的融合蛋白α-HNP2,为进一步的实验研究奠定了基础。
- 邵敏余晓刘星葛正龙王燕周鹤峰
- 关键词：防御素CHO融合蛋白基因表达
- 激光扫描共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12的表达被引量：4
- 2008年
- 目的观察外源hIL-12基因在转基因马铃薯的不同组织部位的表达情况。方法采集转基因马铃薯的茎和块茎组织进行研究,以野生马铃薯为阴性对照,用间接荧光免疫标记法、激光共聚焦显微镜观察hIL-12在转基因马铃薯不同组织的表达情况。结果经激光共聚焦显微镜检测,转基因马铃薯茎与块茎中均有hIL-12的表达,而野生马铃薯中无hIL-12的表达。结论本课题组建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系中茎和块茎均能表达hIL-12。
- 罗果葛正龙
- 关键词：马铃薯转基因植物激光扫描共聚焦显微镜
- hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)-hISO。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白。结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达。
- 邵敏王新颖刘星王燕周鹤峰葛正龙
- 关键词：原核表达Α-葡萄糖苷酶大肠杆菌
