胡青钢
- 作品数：39 被引量：160H指数：7
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 供体内皮bel-xL基因转染对大鼠主动脉移植免疫反应的影响
- 2017年
- 目的观察供体内皮细胞过表达bcl-xL基因对大鼠主动脉移植受体免疫反应的影响。方法构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的凋亡抑制基因bcl-xL的Tie2启动子慢病毒表达载体，经尾静脉注射转染供体SD大鼠，后行SD→SD和SD→Wistar大鼠的主动脉同基因及同种异基因移植。移植后1周，荧光显微镜观察及实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）分析移植主动脉内皮bcl-xL过表达；并分离、培养移植动脉内皮细胞、供体及受体大鼠脾细胞、细胞毒性T细胞，收集血清，行混合淋巴细胞反应实验、T细胞杀伤实验及补体依赖的抗体介导的细胞毒实验，明确供体内皮过表达bcl-xL基因对大鼠主动脉移植免疫反应的影响。结果Tie2启动子慢病毒表达载体转染组移植主动脉内皮显著过表达bcl-xL基因[（8.5±1.1）倍比（1.0±0.2）倍，t=17.050, P=0.002]。异基因移植组受体脾细胞增殖率显著高于同基因移植组[（14.2±1.8）倍比（1.0±0.1）倍，t=23.599, P=0.001；（14.7±2.2）倍比（0.8±0.1）倍，t=25.037, P=0.001]、移植动脉内皮细胞存活率显著低于同基因移植组（14.5%比92.7%, χ2=244.558，P=0.000；8.9%比95.8%，χ2=290.494，P=0.000；15.1%比96.7%, χ2=269.251，P=0.000；10.1%比94.7%，χ2=286.190，P=0.000）。而转染与非转染bcl-xL的同基因移植组间和异基因移植组间，脾细胞增殖率[（1.0±0.1）倍比（0.8±0.1）倍，t=2.108, P=0.068；（14.2±1.8）倍比（14.7±2.2）倍，t=－1.012, P=0.341]和移植动脉内皮细胞存活率（92.7%比96.7%, χ2=3.078，P=0.079；95.8%比94.7%, χ2=0.497，P=0.481；14.5%比8.9%, χ2=2.917，P=0.088；；15.1%比10.1%, χ2=2.286，P=0.131；96.6%比97.3%, χ2=0.344，P=0.558；91.5%比92.1%, χ2=0.033，P=0.856；19.8%比15.4%, χ2=0.387，P=0.239；10.2%比13.8%, χ2=1.515，P=0.218）差异无统计学意义。结论大鼠供体内皮过表达bcl-xL基因对主动脉移植免疫反应无显著影响。
- 李俊刘南李元罗宏张磊郑启昌胡青钢
- 关键词：BCL-XL主动脉
- 成人肝朗格汉斯细胞组织细胞增生症临床分析（附四例报告）被引量：2
- 2012年
- 目的 探讨成人朗格汉斯细胞组织细胞增生症（LCH）伴肝脏受累的临床特点.方法 回顾性分析4例成人LCH伴肝损伤患者的临床资料.结果 4例患者均经过病理学诊断为肝LCH,其中3例以肝外表现为首发症状,3例出现肝功能酶学异常.肝脏影像学检查提示4例均出现肝内异常结节,2例出现肝脏弥漫性肿大.结论 LCH是一种可引起多器官受累的少见病.其临床特征表现为反复的肝功能异常、肝占位和肝脏肿大.临床上出现不明原因的反复肝功能异常、肝占位、肝脏肿大并伴有尿崩症、皮疹和骨质破坏等表现时,应考虑LCH可能.
- 张卫杰李民熊俊胡青钢郑启昌
- 关键词：朗格汉斯细胞组织细胞增生症肝脏
- 前入路腹膜前间隙疝修补术术中损伤12例分析被引量：4
- 2014年
- 目的探讨行前入路腹膜前间隙腹股沟区疝修补术术中损伤的原因及防治策略。方法回顾性分析2005年1月至2012年6月华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科收治的12例行腹膜前间隙腹股沟区疝修补术发生术中损伤病人的临床资料。结果 2例为初发疝病人,10例为局部曾行疝修补的病人。膀胱损伤6例,行术中修补;输精管损伤1例,行结扎横断;腹膜穿破2例,行缝合修补;肠管损伤1例,行缝合修补;腹壁下动脉损伤2例,行术中结扎离断。结论腹膜前间隙疝修补术中损伤多见于局部曾行疝修补的病人。熟悉解剖、精细操作、合理选择入路和修补间隙可减少损伤,及时发现并予相应处理可避免发生严重后果。
- 孙平郑启昌胡青钢程翔郭斌
- 关键词：腹膜前间隙修补
- Cdc42在人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株中的表达被引量：6
- 2010年
- 目的探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株MCF-7/Adr中表达的变化以及对细胞耐药性的影响。方法将Cdc42 siRNA转染MCF-7/Adr细胞株后,用RT-PCR和Weastern Blot方法检测MCF-7组,MCF-7/Adr组,MCF-7/Adr siRNA干扰组细胞Cdc42的转录以及蛋白的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定siRNA处理后阿霉素(ADM)对MCF-7/Adr细胞的杀伤作用;用荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度。结果 MCF-7/Adr细胞中Cdc42 mRNA及蛋白表达量显著高于MCF-7细胞(P<0.05);siRNA干扰后Cdc42表达受到明显抑制(P<0.05),并显著提高细胞内ADM的浓度(P<0.05)。结论特异性siRNA能明显抑制Cdc42 mR-NA及蛋白表达,并逆转细胞耐药性。
- 张勇江隆昌屈新才胡文君胡青钢郑启昌
- 关键词：多药耐药小RNA干扰
- TNF-α对人肝细胞Mfn2基因表达的调节及对线粒体形态功能的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝细胞株LO2细胞线粒体融合蛋白基因2(Mfn2)基因表达的调节作用以及对线粒体形态和细胞三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)生成的影响.方法:利用脂质体Lipofectamine2000将Mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-Mfn2)转染肝细胞株LO2细胞,以终浓度为500kU/L的TNF-α作用LO2细胞株和稳定高表达Mfn2的LO2细胞株12h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各组细胞Mfn2mRNA转录水平以及蛋白的表达水平,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)染色观察线粒体形态变化,荧光素酶ADP/ATP发光法检测各组细胞ATP含量,荧光探针DCFH-DA测定细胞ROS生成水平.结果:经TNF-α处理后LO2细胞中Mfn2基因的mRNA及蛋白表达水平显著低于空白对照组(0.279±0.026vs0.742±0.018;0.196±0.024vs0.580±0.011,P<0.05);对照组及转染Mfn2基因组肝细胞线粒体形态主要为丝状网络或长柱状,TNF-α处理后未转染肝细胞线粒体断裂成点状碎片,但转染组线粒体形态则无明显改变;TNF-α处理后LO2细胞内ATP浓度显著下降(2.00μmol/g±0.15μmol/g vs5.81μmol/g±0.31μmol/g,P<0.05),而ROS生成水平较空白对照组显著升高(FI:80.68±4.02vs65.44±3.47,P<0.05),但转染组细胞内ATP下降水平要显著低于未转染组,而未转染组ROS升高程度则显著高于转染组(P<0.05).结论:TNF-α通过抑制肝细胞Mfn2的表达诱导线粒体形态改变及线粒体功能障碍.
- 张勇江隆昌胡文君胡青钢郑启昌
- 关键词：肿瘤坏死因子Α三磷酸腺苷活性氧
- 人arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的抑制被引量：2
- 2006年
- 目的:观察人arresten因子对人脐静脉内皮细胞HUVEC与LOVO细胞黏附的影响,探讨与之相关的黏附分子表达的变化。方法:半定量RT-PCR检测arresten对人脐静脉内皮细胞表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mrRNA的影响,Western-hlot检测VCAM-1蛋白表达的变化。孟加拉玫瑰红活细胞染色法观察arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的影响。结果:RT-PCR及Western-blot结果表明VCAM-1在HUVEC细胞中高表达,但经过arresten因子处理的HUVEC细胞,其VCAM-1在mRNA水平及蛋白水平的表达均显著下降(P< 0．05)。孟加拉玫瑰红活细胞染色法显示arresten能抑制HUVEC细胞与LOVO细胞的黏附。结论:arresten因子通过降低内皮细胞VCAM-1的表达抑制内皮细胞与肿瘤细胞的黏附,这可能是其抑制肿瘤转移的一种途径。
- 龙淼云郑启昌宋自芳胡青钢陈立波
- 骨髓细胞参与移植物动脉硬化的作用研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究大鼠移植动脉新生内膜平滑肌细胞Sry基因的表达,探讨骨髓细胞在移植物动脉硬化中的作用。方法采集雄性Wistar大鼠的骨髓细胞,将其移植到经γ射线照射预处理的雌性Wistar大鼠体内,制备嵌合体大鼠;4周后建立大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应模型,分为4组:雌性同系移植组、雌性异系移植组、雄性异系移植组、嵌合体异系移植组。术后8周,制备移植动脉组织标本进行病理组织学观察,分析移植动脉硬化情况;用抗平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)单抗进行SABC法免疫组化染色,检测移植动脉新生内膜细胞α-SMA的表达情况;采用显微切割技术收集移植动脉冰冻切片新生内膜平滑肌细胞,用PCR检测其Sry基因的表达,分析移植动脉新生内膜平滑肌细胞是否来源于骨髓细胞。结果异系移植组移植动脉新生内膜中α-SMA表达阳性平滑肌细胞大量增生,致动脉内膜显著增厚,血管管腔明显狭窄;动脉壁新生内膜面积及新生内膜/中膜面积比均显著高于同系移植组(P<0.01),而异系移植组之间差异无显著性意义(P>0.05)。PCR扩增显示,嵌合体异系移植组和雄性异系移植组一致,在相对分子量为225bp处均有一条特异性扩增条带,而雌性异系移植组则无相应的核酸扩增条带;结果提示移植物动脉新生内膜平滑肌细胞来源于骨髓细胞。结论在动脉移植慢性排斥反应中,骨髓细胞分化为血管新生内膜平滑肌细胞,参与移植物动脉硬化的发生和发展。
- 宋自芳郑启昌李伟舒晓刚尚丹管思明胡青钢
- 关键词：骨髓细胞慢性排斥反应移植物动脉硬化
- 添加谷氨酰胺的营养支持对肝功能不全患者术后的影响被引量：3
- 2005年
- 目的评价手术后使用添加谷氨酰胺的营养支持对肝功能不全患者胃肠黏膜功能、免疫功能及肝脏功能的影响。方法(1)10例健康志愿者取血行PCR检测细菌DNA作为空白对照;(2)40例符合入选标准的大手术患者,随机分为使用不含谷胺酰胺的全肠外营养组(TPN)与使用含谷氨酰胺的全肠外营养组(GTPN),每组20例。两组在外科手术后以等氮等热卡营养摄入行全胃肠外营养10d,分别于手术后第5天和第10天观察比较患者血生化指标、胃肠道通透性指标及免疫学指标。结果(1)健康志愿者外周血行PCR检测细菌DNA结果均为阴性。(2)TPN组和GTPN组患者术后5d血浆转氨酶水平与术前相比升高,术后10dGTPN组血浆转氨酶水平明显高于TPN组(P<0.05)。(3)GTPN组术后第10天血浆总蛋白(TP)水平与白蛋白(ALB)水平与术前相比无明显降低(P>0.05),TPN组则明显降低(P<0.001)。(4)GTPN组手术后第10天肠黏膜通透性无明显升高(P>0.05),TPN组则升高明显(P<0.05)。(5)术后第10天GTPN组外周血淋巴细胞亚群CD4/CD8比值明显高于TPN组(P<0.01),GTPN组术后10dIL-6浓度未见明显变化,TPN组IL-6浓度明显升高(P<0.01)。结论肝功能不全患者手术后使用添加谷氨酰胺的营养支持可以较好地维护术后血浆蛋白水平,保护肠黏膜屏障,提高患者的免疫功能,但有可能影响患者的肝功能。
- 胡青钢郑启昌
- 关键词：肝功能不全术后谷氨酰胺
- 瞬时转染Arresten基因对血管内皮细胞迁移的影响被引量：3
- 2005年
- 目的研究瞬时转染Arresten基因对血管内皮细胞迁移的影响,并为后续动物实验探索最佳体内转染DNA-脂质体比例。方法以不同比例之质粒DNA-Lipofectamine 2000转染肝癌细胞系HepG-2细胞,瞬时转染经RT-PCR证实目的基因已转入细胞内48 h后收集上清,上清液与血管内皮细胞以划痕法共培养,计算迁移率。结果不同比例转染细胞的上清液均可抑制内皮细胞的迁移,以DNA-脂质体比例1:1,抑制率最高。结论瞬时转染Arresten基因可抑制血管内皮细胞的迁移, 并为后续动物实验奠一定的基础。
- 熊俊宋自芳卢昕胡青钢屈新才郑启昌
- 关键词：血管生成抑制因子转染ECV-304细胞
- arresten在CHO细胞的表达及其生物学效应被引量：2
- 2007年
- 目的 初步探讨血管生成抑制因子arresten在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中的表达及其生物学效应。方法 用脂质体转染法将真核表达载体pSecTag-arresten导入CHO，抗生素Zeocin筛选获得阳性克隆。RT—PCR检测arresten在mRNA水平的表达，Western blot检测arresten在蛋白水平的表达。将人脐静脉内皮细胞（huvec）分为加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组及加含arreten的上清培养液组，TransweH小室检测arresten对huvec细胞迁移的影响，Mamgel胶体外管腔生成试验检测arresten对huvec细胞血管形成能力的影响。结果 RT—PCR和Western blot检测显示，arresten在mRNA水平与蛋白水平均有表达。迁移抑制曲线显示，含arresten组的迁移抑制率明显高于对照组（P〈0．05）。加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组和加含arresten的上清培养液组细胞形成的血管腔分别为16±2、13±1和7±2个，加含arresten的上清培养液组显著低于其他两组（P〈0．05）。提示arresten对huvec细胞的迁移和血管形成具有抑制作用。结论成功构建arresten的真核表达体系，并发现arresten因子可抑制huvec细胞迁移和管腔形成，这可能是其抑制血管生成的途径之一。
- 龙淼云郑启昌宋自芳胡青钢张勇
- 关键词：ARRESTEN真核表达中国仓鼠卵巢细胞血管生成
