王铮
- 作品数：19 被引量：41H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIV基因组感染性克隆的构建原理及应用
- 2005年
- 王铮李敬云
- 关键词：感染性克隆HIV病毒基因组CDNA体外转录克隆技术
- HIV1 ThaiB亚型毒株的感染性克隆及其与APOBEC3G蛋白的相互作用研究
- 李敬云李林王铮刘永健鲍作义王哲庄道民李韩平刘思扬李宏冯立刚
- 该项目属于预防医学与卫生学研究领域。针对在我国广泛流行的HIV-1ThaiB亚型毒株，以毒株的感染性克隆及其与APOBEC3G蛋白的相互作用为核心，沿着两条技术路线开展了系列研究，一是构建毒株的感染性克隆并验证其在疫苗研...
- 关键词：
- 关键词：HIV1感染性克隆抗病毒
- HIV-1B′亚型毒株新型耐药相关突变位点的筛选被引量：3
- 2011年
- 目的筛选HIV—1 B′亚型病毒株中可能存在的新型耐药相关突变位点。方法收集整理前期研究获得的451条H1V-1B′亚型pol区基因序列，序列含蛋白酶全长（1～99个密码子）和反转录酶全长（1～560个密码子），长度约1977bp。将354条来自接受抗病毒治疗艾滋病患者的（服药组）序列与97条来自未接受治疗患者的（未服药组）序列，分别与B亚型野生型pol基因共享序列进行逐个密码子比对，筛选在服药组序列中出现的频率显著高于未服药组序列的突变位点，将筛选出来的突变位点在斯坦福大学HIV-1耐药数据库中检索，根据数据库收录的情况及解释，初步分析突变与耐药的关系。结果在服药组序列中反转录酶区有6个位点7个突变的频率显著高于未服药组，分别是D123E、V292I、K366R、T369A、T369V、A371V和1375V，即前2个突变位于反转录酶的聚合酶区、后5个突变位于反转录酶的连接区。检索数据库收录情况，有7个突变均为相应位点的主要变异形式，在服药患者中出现的频率显著高于未服药患者。结论筛选出的HIV-1B′亚型病毒株7个突变可能与耐药有关。
- 李韩平郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王铮王晓林李敬云
- 关键词：HIV-1
- 河南某农村艾滋病患者劣势耐药毒株的进化及原发耐药研究被引量：5
- 2011年
- 目的了解河南省部分艾滋病患者抗病毒治疗效果及耐药发生情况，分析劣势耐药毒株在该人群本底存在情况。方法以河南某农村149名初始接受抗病毒治疗的艾滋病患者为研究对象，采用自建（In-house）基因型耐药检测方法分析抗病毒治疗失败患者HIV-1耐药发生情况，对抗病毒治疗后产生耐药的病例采用等位基因特异性实时定量PCR（allele-specificreal-timePCR，ASPCR）方法检测其抗病毒治疗前样本劣势耐药毒株存在情况。结果抗病毒治疗后患者的HIV-1病毒载量显著下降（t=275，P：0．0001），但CD4’T淋巴细胞绝对数无明显变化（t=1．765168，P=0．0852）。抗病毒治疗失败患者中耐药的发生率为4．88％，ASPCR检测发现，在调查基线时，7例耐药患者全部存在劣势M184V突变，5例存在劣势K103N突变。结论河南省部分未治疗的艾滋病患者存在HIV-1原发性耐药毒株，劣势耐药突变可能发展为优势耐药毒株并影响抗病毒治疗的效果。
- 李韩平郭伟朱新鹏王哲刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王铮王晓林李敬云
- 关键词：抗病毒治疗原发耐药IN-HOUSE
- 我国部分地区HIV-1流行毒株亚型分布及gag基因变异特征研究被引量：6
- 2009年
- 目的:分析我国4个地区的人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)主要流行毒株的亚型分布,以及在宿主免疫压力下的基因变异和抗原表位的变化情况,初步探讨这些地区HIV-1gag基因的分子进化特征。方法:从来自河南、广东、四川、北京的HIV-1感染者血浆样本中提取基因组RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增部分gag基因,用扩增产物直接进行测序;使用Genotyping Tool软件进行亚型分析,使用MEGA4.1软件绘制系统进化树;用Distance工具计算各个亚型序列的基因离散率;用SNAP程序分析同义替换率与非同义替换率的比值(Ks/Ka),并对各亚型中我国人群中较常见的HLA-Ⅰ型限制的CTL抗原表位的突变情况进行分析。结果:这些地区HIV-1主要流行毒株gag基因亚型主要是B′、CRF07_BC、CRF01_AE、B、CRF08_BC和CRF02_AG。各亚型内的基因离散率不同,由大到小排列为CRF01_AE>B>CRF08_BC>CRF07_BC>B′,Ks/Ka为CRF01_AE>B>CRF08_BC>B′>CRF07_BC。p17区段的CTL抗原表位变异远大于p24区段。各个亚型共享序列中存在的突变位点由多到少排列为CRF01_AE>B>B′>CRF07_BC。结论:我国HIV-1流行毒株的gag基因序列中,CRF01_AE亚型受到的选择压力最大,基因离散率也最大,且CTL抗原表位的变异亦最大,其次是B和B′亚型,CRF07_BC亚型变异最小。各亚型间CTL抗原表位变异的差异明显。
- 陈立力刘永健李韩平鲍作义庄道民刘思扬王铮赖章丽李林李敬云
- 关键词：人类免疫缺陷病毒1型GAG基因基因型
- HIV-1 Thai-B亚型感染性克隆的构建及其在中和抗体检测和疫苗研究中的初步应用
- HIV-1 Thai-B亚型感染性克隆的构建及其在中和抗体检测和疫苗研究中的初步应用 最新的分子流调结果显示,我国目前流行的主要毒株是Thai-B,CRF07
- 王铮
- 关键词：感染性克隆假病毒中和抗体
- HIV-1B′亚型毒株新型耐药相关突变位点的筛选
- 目的筛选我国HIV-1B′亚型毒株中可能存在的新型耐药相关突变位点。方法收集整理本实验室前期研究获得的45l条HIV-1B′亚型pol区基因序列,序列含蛋白酶全长(1-99个密码子)和逆转录酶全长(1-560个密码子),...
- 李韩平郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王铮王晓林李敬云
- 关键词：HIV-1
- 文献传递
- 我国HIV-1CRF01AE和CRF07BC亚型流行株全长基因组克隆的构建
- 目的构建HIV-1 CRF01AE和CRF07C亚型流行毒株的全长基因组克隆。方法 HIV的基因组较长,需用MLU1酶将其分为两个半分子(2.9kb和6.9kb)进行扩增,然后利用低拷贝质粒pLG338为载体构建HIV-...
- 韩婧婉王铮李敬云
- 文献传递
- 两种HIV-1耐药准种分析方法的比较被引量：4
- 2010年
- 目的比较两种HIV-1耐药准种分析方法 ---克隆PCR产物测序法和单基因扩增法(单基因组测序法,single-genome sequencing,SGS)。方法以本室贮存的某接受高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviraltherapy,HAART)的艾滋病患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)为样本,分别用克隆PCR产物序列测定法和SGS方法得到HIV-1pol区准种序列,对准种序列进行离散率、耐药相关突变组合构成比等分析。结果克隆方法得到19条pol区序列,SGS方法得到18条pol区序列。对两种方法的核苷酸和蛋白质序列的平均离散率进行成对样本均值分析,采用t检验,P值(单尾)为0.311,差异没有显著性意义;两种方法检测出各种突变组合构成比的2检验结果 ,P>0.25,差异也没有显著性意义。但是,准种中占较少比例的突变模式在两种方法检测的结果不一致,如T215Y/K103N/Y181C/H221Y以及M41L/F116L/T215Y/K103N/Y181C/H221Y两种突变组合模式只在克隆方法中检测到,而携带M41L/A62V/T69Si/T215Y/A98G/K103N/Y181C以及K103N突变的两种毒株仅在SGS方法中出现。结论两种分析HIV-1耐药突变准种方法检测该例样本的核苷酸序列和蛋白质准种序列无显著性差异,检出的主要突变组合的构成比也无显著性差异,对优势准种的检测中两种方法差异不大,但在劣势准种的检测中两种方法有一定差异。
- 焦丽燕刘永健郭东星王铮耿庆茂李林庄道民鲍作义刘思扬李韩平李敬云
- 关键词：克隆测序聚合酶链反应
- ASPCR检测微量HIV-1 K103N耐药突变方法的建立被引量：4
- 2009年
- 目的建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR（allele-specific real-time PCR，ASPCR）方法，用于微量K103N耐药突变的检测和分析。方法首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法，然后对方法进行验证，最后采用ASPCR方法检测对照样本。构建含K103N突变的质粒作为标准品，然后设计特异性引物用以区分野生型和突变型模板，采用SYBRgreen法进行实时定量PCR，并绘制标准曲线。分别采用特异性和非特异性引物扩增模板，根据二者Ct（cycle threshold）值结合相应的标准曲线判断是否存在K103N突变及突变比例。对ASPCR检测K103N突变位点的特异性、敏感性、准确性、重复性等进行验证。结果特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差（△Ct）可达13．56；当突变比例小于0．1％时仍具有良好的准确性；批内变异系数小于0．7，批间变异系数小于1．6；检测灵敏度可达0．01％。检测阴性对照样本的△Ct显著高于临界值，阳性对照样本检测结果均为阳性。结论ASPCR是一种快速、灵敏、准确的检测HIV-1微量耐药突变的方法，可为临床抗病毒治疗提供理论指导。
- 郭东星李韩平李林庄道民王铮鲍作义刘思扬刘永健李敬云
- 关键词：HIV耐药
