王淑艳
- 作品数：27 被引量：72H指数：4
- 供职机构：首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胶质源性神经生长因子在人胚胎神经干细胞中的表达调控被引量：1
- 2012年
- 胶质源性神经生长因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)对帕金森病等神经退行性疾病的治疗有广泛的应用前景,而人胚胎神经干细胞已被证实是一种将GDNF安全而有效地携带到受损脑区的良好细胞载体.本研究利用含有GDNF基因的可调控慢病毒载体转染人胚胎神经干细胞,实现了GDNF在人胚胎神经干细胞在体外培养条件下的表达调控.实验中首先利用含有GDNF基因的慢病毒载体成功转染人胚胎神经干细胞,其中GDNF基因受四环素操纵子7(tetracy cline operator7,tetO7)调控,由延长因子1(elongation factor1,EF1-)驱动;转染后的神经干细胞经过潮霉素筛选后同时转入对下游基因起抑制作用的慢病毒载体TTS(tetra-cycline repressorfusi onprotein,TTS),TTS蛋白表达后可与tetO7相互作用抑制GDNF在人神经干细胞中的表达.当加入强力霉素(doxycycline,DOX)后,TTS与tetO7解离,GDNF表达可恢复到未调控前水平.转染GDNF后的人胚胎神经干细胞仍然表达神经干细胞特异性抗原nestin,Sox2;放线菌素D诱导凋亡后,转染GDNF组较正常对照组凋亡细胞比例有显著降低;同时,转染GDNF的神经干细胞分化成神经元的比例有显著提高.利用可调控的慢病毒调控GDNF在人胚胎神经干细胞中的表达为GDNF应用于神经退行性疾病的治疗提供了实验数据.
- 王淑艳任萍关云谦邹春林付琳琳张愚
- 关键词：神经干细胞胶质源性神经营养因子慢病毒载体四环素调控
- Sox10和Olig2加速人源性诱导多能干细胞向少突胶质前体细胞分化被引量：1
- 2016年
- 少突胶质细胞(OLs)有望用于治疗多发性硬化和先天性脑瘫等脱髓鞘疾病.近年来,一些研究者利用人的胚胎干细胞和神经干细胞作为起始细胞来获得少突胶质细胞前体细胞(OPCs).然而,神经干细胞的应用受到其来源的限制;现有的将胚胎干细胞分化为OPCs的方法耗时较长.因此,本研究探讨了一种通过在人诱导多能干细胞中过表达两个转录因子(Sox10和Olig2),从而有效获得OPCs的方法.通过这种方法,可以在14天内获得PDGFRα阳性的OPCs,并在56天内获得O4阳性的OPCs.获得的OPCs在和大鼠(Rattusnorvegicus)皮质神经元共培养时能分化为成熟的少突胶质细胞并包裹轴突形成髓鞘.该研究结果在自体细胞移植领域中具有一定的应用潜力.
- 李鹏燕李默唐玺和关云谦王淑艳张愚陈志国
- 关键词：少突胶质前体细胞分化脱髓鞘
- 免疫磁珠分选去除分化体系中鼠胚胎干细胞的方法
- 本发明公开了一种免疫磁珠分选去除分化体系中胚胎干细胞的方法，属于医学生物技术领域。本发明包括如下步骤：(1)制备单细胞悬液；(2)MACS分离纯化分化细胞：按1∶100的稀释比例加入小鼠抗小鼠SSEA-1IgM抗体，使总...
- 关云谦朱宛宛任萍王淑艳徐艳玲张愚
- 文献传递
- 慢病毒载体的设计及应用进展被引量：35
- 2006年
- 慢病毒载体是一类重组逆转录病毒载体,由于其结构和功能的特点作为一种重要的基因转移工具被应用于基因治疗和细胞分子生物学研究领域。目前,为进一步完善慢病毒载体的功能,研究者们从提高载体的生物安全性及增强外源基因的表达调控能力等方面对慢病毒载体进行了改建。对慢病毒载体的设计进展及应用进行了简要综述,并展望了今后的研究前景。
- 王淑艳张愚
- 关键词：慢病毒载体转录调控基因治疗
- 一种细胞模型及其制备方法、应用
- 本发明提供一种细胞模型及其制备方法、应用，提供了利用WS体细胞诱导多能干细胞的制备方法，包括如下步骤：S1、源于WS患者体细胞的获取；S2、将表达人端粒酶逆转录酶和抗性基因的载体转染至获取的体细胞并培养，筛选能够表达人端...
- 陈志国王淑艳徐大为
- 文献传递
- 慢病毒载体介导的人磷脂磷酸水解酶3基因在人脐带间充质干细胞中的表达
- 2013年
- 目的体外分离和培养人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cell,UC-MSCs),并将含有人磷脂磷酸水解酶3(human lipid phosphate phosphatases 3,hLPP3)的慢病毒载体转染UC-MSCs,探讨hLPP-3在UC-MSCs中的表达。方法从脐带中分离单细胞,经细胞形态学、流式细胞仪(FACS)检测、细胞分化潜能判定,鉴定UC-MSCs的生物学特性。同时将hLPP-3基因克隆入慢病毒载体,包装出病毒上清,以不同拷贝数转染UC-MSCs,用免疫印迹和实时定量PCR技术分别测定不同转染组hLPP-3的蛋白及mRNA表达水平。结果成功在体外分离和培养了UC-MSCs,并诱导其向脂肪、骨、软骨细胞分化。流式细胞仪检测结果显示脐带MSC表达CD90、CD73及CD105,而不表达CD14、CD34、CD45、CD19、HLA-DR、CD11b及CD106蛋白。用含hLPP-3-GFP融合基因的慢病毒载体转染UC-MSCs,实时定量PCR检测发现,hLPP-3的mRNA转录水平与转染拷贝数有关,转染拷贝数越高,hLPP-3的表达量越高;转染后1个月,免疫印迹发现hLPP-3-GFP依然维持高表达。结论成功地在体外分离和培养了UC-MSC,并用含有hLPP-3基因的慢病毒载体转染UC-MSCs,通过转染拷贝数在一定水平上调控了UC-MSC中hLPP-3mRNA的转录水平和蛋白表达量。
- 李晓波顾建娟赵春松王淑艳关云谦陈凌张愚
- 关键词：脐带间充质干细胞胶质源性神经营养因子慢病毒载体转染
- OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究被引量：1
- 2007年
- OTX1基因是神经发育调控中关键转录因子之一。实验构建表达OTX1基因慢病毒载体,探讨慢病毒介导OTX1基因体外过表达的可行性。将OTX1基因克隆到慢病毒穿梭质粒DUET101内,构建表达OTX1以及GFP-OTX1基因的慢病毒载体;将pDUET-OTX1、pDUET-GFP-OTX1及pDUET101(空载体对照)质粒分别与慢病毒包装质粒pCMVΔR8.91、pMD.G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带OTX1基因、GFP-OTX1基因的重组慢病毒DUET-OTX1、DUET-GFP-OTX1以及仅携带GFP基因的DUET-GFP;用重组慢病毒分别转导293T细胞、SY5Y细胞、小鼠胚胎干细胞及大鼠胚胎15天皮层神经干细胞,证实慢病毒载体能够将外源基因转导入不同细胞,且转导的OTX1或GFP-OTX1在不同细胞中均仅在细胞核内表达;培养OTX1单克隆抗体细胞,浓缩抗体上清,通过Westernblot以及细胞免疫荧光法证实慢病毒介导的OTX1基因及GFP-OTX1基因转导入293T细胞后的过表达。证实了慢病毒载体是高效的基因转移载体;OTX1作为发育过程中至关重要的转录因子,经过重组慢病毒体外转导后均只在细胞核内表达。
- 任萍王淑艳关云谦徐艳玲张愚
- 关键词：慢病毒基因表达
- 链脲佐菌素诱导的食蟹猴糖尿病模型中胰腺巢蛋白阳性细胞的变化
- 2009年
- 目的探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的食蟹猴糖尿病模型中胰腺巢蛋白(nestin)阳性细胞分布及生物学特性的变化。方法 1型糖尿病模型食蟹猴5只,长期血糖监测和静脉葡萄糖耐量实验评价该模型的可靠性及稳定性,细胞培养、免疫荧光染色对糖尿病猴和正常猴的胰腺组织进行分析。结果 (1)nestin阳性细胞在正常猴胰腺组织中主要分布于胰腺导管,少量分布于胰岛周边;而在糖尿病猴则主要分布于残存的胰岛中。(2)糖尿病猴胰岛内的大部分nestln阳性细胞同时表达胰升血糖素。结论 STZ在选择性地破坏胰岛β细胞的同时,可引起胰腺nestin阳性细胞的分布及表型的变化。
- 邹春林张颖王淑艳吴迪关云谦任振华张愚
- 关键词：糖尿病食蟹猴胰腺巢蛋白
- 表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体及其用途
- 本发明公开了一种表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体及其用途，属于医学生物技术领域。表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体，其保藏号为CGMCCNo.2086。本发明的优点是：本发明构建的慢病毒载体含有两个启动子结构，可同...
- 王淑艳关云谦任萍朱宛宛王旸徐艳玲张愚
- 文献传递
- 含GDNF基因的慢病毒载体的构建和其在人胚胎神经干细胞中的表达被引量：4
- 2008年
- 利用含胶质源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的慢病毒载体转染了人胚胎来源的神经干细胞,探讨了转染后GDNF在神经干细胞中的体外表达水平及其影响因素。首先GDNF基因被克隆入慢病毒载体,通过瞬时转染法包装出病毒上清,经滴度鉴定后分别按拷贝数为1、2.5、5、10转染神经干细胞。转染后细胞经过潮霉素筛选得到均一表达GDNF的神经干细胞体系。其后分别利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Real-time PCR方法测定不同转染组细胞在不同时间点GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。实验中构建了表达GDNF基因的慢病毒载体,包装出的病毒上清在体外培养条件下成功转染了神经干细胞,经潮霉素筛选可以得到均一的持续表达分泌GDNF的人胚胎皮层神经干细胞体系。实验结果表明转染拷贝数可以影响GDNF的分泌水平,相同条件下转染拷贝数越高,GDNF分泌量越多,其基因表达水平越高。因此,含GDNF的慢病毒载体可以成功转染人胚胎来源的神经干细胞,使其持续表达GDNF,转染过程中可以通过拷贝数在一定水平上控制GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。
- 王淑艳任萍谢淑朱宛宛王暘关云谦张愚
- 关键词：胶质源性神经营养因子神经干细胞慢病毒载体
