王永仿
- 作品数：11 被引量：18H指数：3
- 供职机构：东南大学医学院病原生物学与免疫学系更多>>
- 发文基金：江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目国家自然科学基金江苏省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 探讨BCG初次免疫结核杆菌DNA疫苗加强免疫方案的效应被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞因子的水平,观测BCG-prime、共表达结核杆菌Ag85A/GM-CSFDNA疫苗boost策略对小鼠的免疫效果。结果:采用prime-boost免疫策略组的小鼠CTL的杀伤活性明显增强、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN-γ的水平明显增高,NK细胞杀伤活性与对照组相比也有一定提高,但未超过BCG单独免疫效果。免疫小鼠血清特异性抗体的滴度超过单独DNA疫苗免疫组。结论:在采用BCG-prime-结核杆菌DNA疫苗boost免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Th1型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。
- 唐权窦骏赵枫姝禇莉莉潘猛王永仿
- 关键词：结核杆菌BCGDNA疫苗
- GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞在裸鼠抗瘤效应研究
- 一、GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞及其对NK细胞杀伤活性影响
目的：构建小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与白细胞介素21(1L-21)基因共表达载体pRSC-GM-CSF-IL2...
- 王永仿
- 关键词：卵巢癌GM-CSF白细胞介素21
- 文献传递
- 乳腺癌患者循环肿瘤细胞与癌干细胞相关性的初步研究
- 2008年
- 目的:检测乳腺癌患者外周血单核细胞(PBMC)中循环肿瘤细胞(CTC)和具有癌干细胞(CSC)标志的CTC(CSC-CTC),探讨患者外周血微转移与CSC的相关性。方法:患者和健康者PBMC与磁珠偶联上皮细胞黏附分子单抗孵育后,用磁性分离法富集PBMC中的上皮细胞。以CK+为患者PBMC中CTC标志,用流式细胞术(FCM)检测健康者和患者的PBMC中CK+细胞及CK+/CD44+/CD24-细胞含量,并比较各组间CTC、CSC-CTC含量的差异。结果:用FCM在73.07%的患者中检测到CTC,在19例检测到CTC的患者中18例有CSC-CTC(94.74%),CTC中CSC数量比例平均为19.01%,且患者PBMC中CTC和CSC-CTC比例与临床TNM分期相关。结论:初步建立了患者外周血CSC-CTC的检测方法,结果显示乳腺癌患者外周血微转移中有CSC-CTC的参与,临床分期越晚的患者CTC和CSC-CTC的数量越多。
- 曹明刚尤承忠王净王彩莲王永仿李雅婷赵枫姝刘胜利窦骏
- 关键词：乳腺癌循环肿瘤细胞癌干细胞外周血单核细胞
- 糖基化磷脂酰肌醇修饰的小鼠IL-21瘤苗抗肿瘤效应及其机制初探被引量：2
- 2008年
- 目的构建糖基化磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidylinositol，GPI）修饰的小鼠IL-21瘤苗，并对此瘤苗的抗肿瘤效应及其机制作初步探讨。方法通过重叠PCR方法获得IL-21-GPI融合基因并将其插入空载体pcDNA3．1。将鉴定过的重组载体以脂质体法转染B16F10细胞制成瘤苗，细胞间接免疫荧光法及流式细胞仪检测转染瘤细胞膜表面IL-21的表达，通过对小鼠脾细胞的增殖作用鉴定表达的IL-21的生物学活性。将瘤苗接种小鼠后，通过观察小鼠肿瘤体积和生存率分析瘤苗的抗瘤性，并检测了瘤苗免疫鼠的细胞免疫活性。结果正确构建了pcDNA3．1／IL-21-GPI重组载体，膜表达的IL-21有良好的生物学活性，制备的瘤苗能发挥抗肿瘤效应，其机制与免疫鼠细胞免疫活性增强有关。结论成功构建了具有抗肿瘤活性的GPI修饰的IL-21瘤苗，为其进一步抗肿瘤免疫治疗研究奠定了基础。
- 赵枫姝褚莉莉窦骏唐权王永仿吴昀曹明刚潘猛顾宁
- 关键词：糖基化磷脂酰肌醇抗肿瘤免疫
- GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞在裸鼠体内的抗瘤效应
- 2008年
- 目的:研究GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞系SKOV3后在裸鼠体内的抗肿瘤效应。方法:将体外培养的SKOV3、SKOV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21及SKOV3/GM-CSF-IL21细胞分别皮下接种BALB/c裸小鼠,监测荷瘤鼠肿瘤生长情况,观察GM-CSF与IL-21单独及联合诱导的抗肿瘤效应。ELISA法检测血清IFN-γ和TNF-α含量,MTT比色法测定裸鼠脾细胞NK活性,RT-PCR检测裸鼠脾细胞中NKG2D分子的表达。结果:与SKOV3及SKOV3/Neo相比,用SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和SKOV3/GM-CSF-IL21攻击的裸鼠,体内肿瘤形成受到明显抑制,其中SKOV3/GM-CSF-IL21组更明显,与其他各组比较均有显著差异;用SKOV3/GM-CSF-IL21攻击的裸鼠外周血,白细胞总数、中性粒细胞数、单核细胞数及IFN-γ和TNF-α含量均显著升高,脾细胞NK活性及NKG2D表达增强。结论:GM-CSF与IL-21基因共转染SKOV3细胞后,可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应,其效果显著优于单一GM-CSF或IL-21基因转染的SKOV3细胞。
- 王永仿褚莉莉窦骏赵枫姝唐权曹明刚李雅婷吴昀顾宁
- 关键词：卵巢癌GM-CSFIL-21
- GM-CSF与IL-21基因共转染卵巢癌细胞及其对NK细胞活性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与IL-21基因共转染的体外抗肿瘤效应。方法制备pRSC-GM-CSF-IL21重组质粒,再用脂质体将质粒pRSC-GM-CSF、pRSC-IL21和pRSC-GM-CSF-IL2分别转染人卵巢癌SKOV3细胞(依次命名为SKOV3/GMCSF、SKOV3/IL21、SKOV3/GM-CSF-IL21细胞)。以RTPCR方法检测GM-CSF与IL-21表达;倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化;噻唑蓝法测定各组细胞增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞细胞周期分布,细胞表面HLA-ABC、主要组织相容性复合体I类相关基因(MICA/B)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达,以及各组细胞培养上清液对NK细胞活性的影响。以未转染的SKOV细胞和转染空质粒pRSC的细胞(SKOV3/Neo)为对照。结果经酶切与测序鉴定,pRSC-GM-CSF-IL21重组体构建正确,共转染SKOV3细胞中有目的基因GM-CSF、IL-21的表达。各组细胞的形态学、增殖特性、细胞周期分布及HLA-ABC表达无明显变化。SKOV3、SKOV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和SKOV3/GM-CSF-IL2细胞的MICA/B表达量分别为19.24%±2.31%、31.11%3.76%、37.27%±3.04%、54.97%±4.77%和63.94%±5.90%ICAM-1表达量分别为35.88%±3.06%、37.75%±4.09%、68.59%±4.84%、78.53%±5.78%和84.10%±3.98%;加入各组细胞培养上清液后NK细胞活性分别为31.8%±3.6%42.7%±3.3%、54.7%±7.4%、55.9%±4.4%及63.4%6.4%。SKOV3/GM-CSF-IL21细胞分别与SKOV3、SKOV3Neo细胞比较,3项指标的差异均有统计学意义(P<0.01)结论GM-CSF与IL-21基因共转染可上调SKOV3细胞表面MICA/B与ICAM-1表达,表达产物可增强NK细胞活性,这有助于免疫细胞激活,增强抗肿瘤效应。
- 王永仿褚莉莉窦骏赵枫姝唐权曹明刚李雅亭胡卫华王净
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素21杀伤细胞
- 无血清培养的SP2/0细胞肿瘤学特性的研究被引量：7
- 2008年
- 目的:研究无血清培养条件下SP2/0细胞的相关肿瘤学特性。方法:应用MTT法检测用无血清培养所得的SP2/0细胞的增殖能力及这些细胞中SP细胞的比例,并检测它们的体内致瘤性。结果:SP2/0细胞在无血清培养基中增殖缓慢,但当把它们放回含血清培养中,则表现出比普通培养的SP2/0细胞有更高的增殖能力;无血清培养可以使SP2/0细胞中的SP细胞比例增加;无血清培养的SP2/0细胞比普通培养的SP2/0细胞在鼠体内有更高的体内致瘤性。结论:无血清培养可以增加SP2/0细胞中具有干细胞特性的瘤细胞比例,即可以富集SP2/0细胞的肿瘤干细胞。
- 李雅婷窦骏赵枫姝潘猛王永仿曹明刚文萍
- 关键词：无血清培养增殖能力SP细胞肿瘤干细胞
- BCG-Prime结核杆菌共表达DNA疫苗Boost免疫策略及其效应研究
- 目的:采用BCG初次免疫,结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫,探讨BCG-Prime、DNA疫苗-Boost免疫策略对小鼠的免疫效果,为结核病DNA疫苗研究提供新的免疫策略。方法:将BCG及重组DNA疫苗免疫小鼠,通过CT...
- 唐权窦骏赵枫姝褚莉莉王永仿曹明刚李雅亭
- 关键词：结核杆菌GM-CSF
- 文献传递
- 乳腺癌耐药蛋白介导多重耐药机制及其逆转被引量：3
- 2006年
- 近年发现的乳腺癌耐药蛋白属于ATP结合框转运体家族中的G亚家族,是主要的介导肿瘤细胞多药耐药机制的跨膜转运蛋白之一,在临床抗肿瘤治疗中具有重要的意义。本文综述了乳腺癌耐药蛋白的结构特点、表达特征,及其介导的肿瘤细胞多重耐药机制与逆转等方面的研究进展,并展望了今后的研究方向。
- 王永仿窦骏
- 关键词：乳腺癌耐药蛋白多药耐药
- mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。
- 褚莉莉窦骏赵枫姝唐权张爱凤王永仿顾宁
- 关键词：瘤苗
