熊平
- 作品数：129 被引量：529H指数：12
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学交通运输工程机械工程更多>>
- HA-1树突状细胞核酸疫苗的构建及其特异性CTL的诱导
- ＜正＞目的研究以次要组织相容性抗原HA-1为靶点,构建HA-1树突状细胞核酸疫苗用于造血干细胞移植后抗白血病治疗。方法从HA-1阴性表达的移植供者外周血中分离出单个核细胞,贴壁2h后去除非贴壁细胞,加入GM-CSF100...
- 汪涯雅张东华刘文励周红升张路戴敏熊平黄振倩谭获
- 文献传递
- 小鼠sST2基因真核表达及其对LPS活化RAW264.7巨噬细胞的调节作用被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgGFc融合基因的真核表达质粒,初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响。方法:借助RT-PCR技术,从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2cDNA,构建sST2与hIgGFc段融合基因的真核表达载体(psST2-Fc)。应用脂质体将重组质粒psST2-Fc转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达sST2-Fc融合蛋白的CHO细胞株。细胞培养上清经蛋白A亲和层析纯化后,采用Western blot进行鉴定,应用FACS检测sST2-Fc与RAW264.7巨噬细胞表面相应受体结合情况;ELISA法检测sST2-Fc对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响。结果:测序证实克隆和构建的小鼠sST2-FccDNA阅读框序列正确,Western blot证实sST2-Fc融合蛋白的表达,sST2-Fc抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎性细胞因子TNF-α和IL-6。结论:成功构建sST2-Fc融合基因并获得稳定表达,sST2-Fc通过与其特异性受体结合可抑制巨噬细胞介导的炎性反应。
- 尹辉龚权杨衡熊平郑芳龚非力
- 关键词：真核表达RAW264.7IL-6
- HLA-DQB1 基因与中国湖北汉族人 SLE 及其自身抗体的相关性研究被引量：5
- 1997年
- 目的：探讨ＨＬＡＤＱＢ１等位基因与系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）及其自身抗体的相关性。方法：采用ＰＣＲ／ＳＳＰ技术对５２例中国湖北地区汉族ＳＬＥ患者及１４３例正常对照者进行了ＨＬＡＤＱＢ１基因分型，并采用免疫印迹技术检测患者血清中自身抗体。结果：ＳＬＥ患者ＤＱＢ１０６０８（９６２％，χ２＝１０５１，Ｐ＜０００５）基因频率显著升高，ＤＱＢ１０３０２（５７７％，ＲＲ＝０２６Ｐ＜００５，ＰＦ＝０１４）和ＤＱＢ１０５０１（１９２％，ＲＲ＝０１１，Ｐ＜００１，ＰＦ＝０１３）基因频率显著降低，与正常对照组比较，ＤＱＢ１０６０８在伴抗Ｓｍ（１０３４％，Ｐ＜０００５）、抗ＲＮＰ（１１５４％，Ｐ＜０００５）、抗ｄｓＤＮＡ（２２２２％，Ｐ＜０００５）抗体阳性的ＳＬＥ患者中频率显著升高。结论：ＤＱＢ１０６０８与ＳＬＥ关联，并分别与抗Ｓｍ、抗ＲＮＰ、抗ｄｓＤＮＡ抗体的产生有相关性。而ＤＱＢ１０３０２、ＤＱＢ１０５０１等位基因对ＳＬＥ可能具有保护性。
- 张胜桃何培根熊平熊平吴雄文龚非力段金玉
- 关键词：HLA-DQB1基因自身抗体
- 中国湖北汉族重症肌无力与HLA-Ⅱ类等位基因的关联被引量：4
- 1999年
- 目的和方法：探讨中国湖北汉族重症肌无力（ＭＧ）患者与ＨＬＡ－Ⅱ类等位基因的关联。利用ＰＣＲ／ＳＳＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对湖北地区９１例ＭＧ患者进行ＨＬＡ－Ⅱ类（ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１和ＤＰＢ１）基因型别分析，并与１６８例正常个体比较。结果：患者组（１）：ＨＬＡ－ＤＲＢ１０９０１、ＤＱＢ１０３０３和ＤＰＢ１０５０１等位基因频率明显高于对照组，ＲＲ值分别为４１２、３０４和３０１，Ｐ＜０．０１；（２）ＨＬＡ－ＤＰＢ１０２０２等位基因频率明显低于对照组，ＲＲ值为０１３，Ｐ＜０．０５。结论：中国湖北汉族群体中ＭＧ与ＨＬＡ－ＤＲＢ１０２０２、等位基因正关联，而与ＨＬＡ－ＤＰＢ１０２０２等位基因呈负关联，与白种人群相比，这种关联对中国湖北汉族ＭＧ病人来说是特有的。
- 龚非力杨志章熊平徐金枝徐勇姜晓丹吴雄文S.FERENCIKYANJUN LIUH.GROSSE WILDE
- 关键词：重症肌无力HLA抗原基因表达
- 雌二醇、睾酮对健康男性外周血单核细胞HLA－DR、HLA－DQ抗原表达的影响被引量：3
- 1994年
- 将分离的人单核细胞（Ｍ）在体外分别与雌二醇（Ｅ＿２）、睾酮（Ｔｅ）以及Ｅ＿２＋Ｔｅ共同温育２４小时后，观察Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ抗原的表达。结果表明，Ｅ＿２（７．３４×１０￣（－１２）ｍｏｌ／Ｌ）能显著抑制Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原的表达，Ｔｅ（３．４７×１０￣（－１１）ｍｏｌ／Ｌ）则能促进Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原的表达。Ｅ＿２、Ｔｅ一起作用（浓度分别同上）于Ｍ时，Ｍ表面ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原表达无明显变化。
- 郑民安龚非力冯新为熊平徐勇
- 关键词：单核细胞抗原雌二醇睾酮
- 人肿瘤坏死因子-α的免疫PCR检测方法被引量：1
- 1998年
- 将ＰＣＲ技术的极高灵敏度与ＥＬＩＳＡ技术检测肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）抗原的特异性相结合，利用生物素标记的腺病毒六邻体基因重组质粒（ＡｄＡＴ）作为ＰＣＲ的模板ＤＮＡ，以链亲和素作连接分子，与生物标记的兔抗鼠ＩｇＧ抗体相连接，后者再与ＴＮＦ－α的单克隆抗体结合。设计一对扩增六邻体基因的引物进行ＰＣＲ，通过对ＤＮＡ扩增片段浓度的定量分析。
- 方敏龚非力李卓娅熊平冯玮徐勇姜小丹
- 关键词：肿瘤坏死因子免疫PCR细胞因子
- 编码AFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究
- 2006年
- 目的构建能够表达AFP和CTLA4融合蛋白的DNA疫苗并检测其诱导特异性CTL反应及抗产生AFP肿瘤的能力。方法利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中克隆mAFP基因。连接mAFP基因和编码小鼠CTLA4膜外部分的基因构建质粒DNA疫苗。对此疫苗进行酶切、测序和表达鉴定。用pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞系。以此DNA疫苗免疫小鼠,用ELISPOT检测免疫后小鼠脾脏细胞中产生IFN-γ的细胞频数。以EL-4(mAFP)肿瘤细胞攻击免疫后小鼠,观察肿瘤的生长情况。另外,对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测。结果利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中成功克隆出1．8 kb的mAFP基因。酶切、测序和表达鉴定证实编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗构建成功。RT-PCR证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA的表达。ELISPOT检测结果显示:pmAFP-CTLA4免疫组产生IFN-γ的细胞频数显著高于pmAFP组、pcDNA3．1组和PBS组。pmAFP- CTLA4免疫组小鼠的肿瘤体积为(385．93±52．9)mm3,明显小于pmAFP组(1042．42±123．71)mm3、pcD- NA3．1组(2292．38±276．94)mm3和PBS组(2303．5±233．13)mm3,P均<0．01。各组肝、肾功能差异无统计学意义。结论编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗能诱导产生AFP特异性的CTL增殖并诱导小鼠产生明显的抗肿瘤免疫力,此疫苗对小鼠肝、肾功能不产生影响。
- 田耕易继林刘积良熊平
- 关键词：甲胎蛋白基因治疗免疫治疗
- 中国湖北汉族HLA-Ⅱ类等位基因频率的群体调查被引量：15
- 1999年
- 目的调查中国湖北汉族人群ＨＬＡ－Ⅱ类基因频率。方法用聚合酶链反应／序列特异性引物和聚合酶链反应／限制性片段长度多态性技术，对中国湖北汉族１６８名正常个体进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１（ｎ＝１６８）、ＨＬＡ－ＤＱＢ１（ｎ＝１６０）、ＨＬＡ－ＤＰＢ１（ｎ＝９３）基因的多态性检测。结果共检出３９种ＤＲＢ１、１５种ＤＱＢ１和１７种ＤＰＢ１等位基因型别，等位基因频率较高的分别是：ＤＲＢ１＊０９０１（ｇｅｎｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙ，ＧＦ＝１４％）、＊１５０１（ＧＦ＝１１．３％）、＊０３０１（ＧＦ＝７．１％）、＊０８０３（ＧＦ＝４．８％）等；ＤＱＢ１＊０３０１（ＧＦ＝１８．８％）、＊０３０３（ＧＦ＝１８．４％）、＊０２０１（ＧＦ＝１０％）、＊０３０２（ＧＦ＝８．４％）等；ＤＰＢ１＊０５０１（ＧＦ＝３１．２％）、＊０４０１（ＧＦ＝１５．１％）、＊０２０１（ＧＦ＝１４％）、＊０４０２（ＧＦ＝１１．８％）等。与白种人群相比，中国湖北汉族的ＤＲＢ１＊０９０１、１００１、０８０３；ＤＱＢ１＊０３０３、０５０２；ＤＰＢ１＊０５０１、０２０２等频率明显升高，而ＤＲＢ１＊０３０１、０４０１、１３０１；ＤＱＢ１＊０２０１、０６０３；ＤＰＢ１＊０４０１?
- 龚非力熊平杨志章徐勇徐勇吴雄文姜晓丹冯玮
- 关键词：基因频率汉族
- 两型TNFα杀伤U937细胞的差异表达基因
- 2003年
- 目的 比较两型TNFα对U93 7细胞的胞毒效应及二者诱导U93 7细胞差异表达的基因。方法 采用生物活性检测法测定两型TNFα对U93 7细胞的胞毒效应 ;用抑制消减杂交法探索两型TNFα诱导U93 7细胞差异表达基因。结果 两型TNFα对U93 7细胞胞毒效应存在差异 ,分泌型TNFα (sTNFα)的杀伤率为 2 4 3 % ,且引起靶细胞坏死率大于其诱导的凋亡率 ;跨膜型TNFα (TM TNFα)的杀伤率为 3 4 3 % ,主要引起靶细胞凋亡。以sTNFα诱导基因做消减 ,得到TM TNFα诱导的差异表达基因 ,即 2 5个EST ,其中 8个EST与已知基因有高度同源性 ,17个EST为未知序列 ,已向GenBank登录。
- 孙义敏尹丙姣徐勇姜晓丹熊平冯玮龚非力李卓娅
- 关键词：U937细胞差异表达基因抑制消减杂交
- HA-1树突状细胞核酸疫苗的构建及其特异性CTL的诱导
- 2006年
- 本研究以次要组织相容性抗原HA-1为靶点,构建HA-1树突状细胞核酸疫苗用于造血干细胞移植后抗白血病治疗。体外培养移植供者树突状细胞,用流式细胞术、混合淋巴细胞反应检测其免疫活性,通过电转法将HA-1基因转染树突状细胞,构建树突状细胞核酸疫苗。48小时后检测HA-1蛋白表达情况。将转染后的树突状细胞与同基因淋巴细胞共孵育诱导特异性CTL,应用LDH释放实验检测其体外杀伤活性。结果表明经外周血单核细胞诱导的树突状细胞表达树突状细胞表型,能刺激同种淋巴细胞增殖。电转48小时后,Westernblot可检测到HA-1蛋白表达。诱导的CTL体外杀伤活性高于对照组。结论次要组织相容性抗原HA-1可作为造血干细胞移植后抗白血病治疗的靶点。
- 汪涯雅张东华刘文励周红升张路戴敏黄振倩谭获熊平
- 关键词：树突状细胞造血干细胞移植细胞毒性T淋巴细胞
