杨新宇
- 作品数：9 被引量：5H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 前列腺上皮细胞的膜蛋白成分分析
- 2008年
- 目的分析前列腺上皮细胞的膜蛋白质构成。方法将无前列腺病史的尸检前列腺标本常规制备冰冻组织切片，通过激光捕获显微切割（LCM）从组织冰冻切片中切取前列腺上皮细胞，Shotgun-MS技术分析膜蛋白质组学构成。结果激光捕获显微切割可正确有效地分离前列腺上皮细胞，其同质性〉95％；在严格的过滤参数条件下（当Charge＋1，Xcorr≥1．9；当Charge＋2，Xcorr≥2．2；当Charge＋3，Xeorr≥3．75；其中DelCN≥0．1），正常前列腺上皮细胞中鉴定出1164个蛋白，其中799个蛋白经过基因本体评注（GOA）显示为已知细胞组分，其余为未知细胞组分。在已知细胞组分中377（49．15％）个蛋白为膜蛋白或者膜相关蛋白。除了已知的与膜相关的蛋白，很多新的蛋白也被鉴定，其中包括假设蛋白和一些cDNA序列。结论Shotgun—MS结合LCM技术可以有效分析前列腺的膜蛋白质构成；有助于正常前列腺细胞膜蛋白质表达库的完善。
- 李群李一雷李伟杨新宇王艺昧李玉林
- 关键词：前列腺上皮细胞膜蛋白质类
- 钙转运蛋白基因siRNA表达载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的:构建针对钙转运蛋白(CaT1)特异性干扰RNA(siRNA)及其表达载体,并检测其对CaT1基因的干扰作用。方法:设计CaT1靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSilencer3·1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染人类胃癌细胞BGC,通过RT-PCR检测CaT1基因表达水平的变化。结果:酶切鉴定与DNA测序分析证明CaT1基因的siRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明CaT1基因的表达水平明显降低。结论:成功地构建了针对CaT1基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制CaT1基因表达。
- 杨新宇张雷郑花康劲松李洪岩房学东
- 关键词：SIRNARNA干扰
- 人前列腺癌PC-3M细胞中与转移相关靶标蛋白的筛选被引量：2
- 2008年
- 目的探讨早期诊断前列腺癌和逆转前列腺癌转移的标志物。方法采用一维SDS—PAGE结合高效液相色谱-串联质谱的方法分离并鉴定PC-3M细胞中的膜蛋白。结果在严格的过滤参数条件下（当Charge＋1，Xcorr≥1．9；当Charge＋2，Xcorr≥2．2；当Charge＋3，Xcorr≥3．75；其中DelCN≥0．1），PC-3M细胞中鉴定出2023个蛋白，其中1391（69％）个蛋白经过基因本体评注（GOA）显示为已知细胞组分，其余为未知细胞组分。在已知细胞组分中527（38．30％）个蛋白为膜蛋白或者膜相关蛋白，其中18．32％的蛋白被预测至少有1个跨膜区，49．62％的蛋白有1～3个跨膜区，19．08％的蛋白有4～9个跨膜区，9．92％蛋白预测有≥10个跨膜区。除了已知的与膜相关的蛋白，很多新的蛋白也被鉴定，其中包括假设蛋白和一些cDNA序列。结论一种明显独特的质膜蛋白表达模式存在于高转移前列腺癌细胞系中。这将帮助进一步理解前列腺癌侵袭和转移的分子机制，并且为寻找前列腺癌转移相关的靶标分子提供实验基础。
- 李群李一雷张越杨新宇李会敏李玉林
- 关键词：膜蛋白PC-3M细胞前列腺癌
- 腺病毒5型E1A基因转染前后乳腺癌细胞相关指标水平的变化被引量：1
- 2007年
- 目的本研究旨在探讨E1A基因对乳腺癌细胞凋亡的影响,为乳腺癌E1A基因治疗的可行性提供理论和实验依据。方法①构建E1A基因真核表达质粒pEGFP-E1A:通过酶切反应获得E1A基因,琼脂糖凝胶回收后,连接入pEGFP-C1载体EcoRⅠ和BamHⅠ位点中。②E1A基因转染乳腺癌细胞系:脂质体介导将E1A基因转入乳腺癌细胞系SK-BR-3细胞株,经筛选获得稳定表达E1A基因的转染试验组细胞。③RT-PCR检测E1A基因的mRNA表达、west-ern-blot检测E1A蛋白表达。流式细胞仪观察细胞凋亡率、免疫组化法检测HER-2/neu基因的表达水平,对比各组间的差异。结果与对照组、空载体组相比,转染E1A基因后,ElA RNA和蛋白表达明显增高。SK-BR-3肿瘤细胞HER-2/neu的表达明显降低,凋亡率增高。结论本实验成功构建并稳定表达了E1A基因质粒,明显抑制乳腺癌细胞的生长,说明E1A基因在乳腺癌基因治疗中有重要意义,为其临床应用提供了理论和实验依据。
- 杨新宇宫路路刘志毅房学东
- 关键词：E1A基因乳腺癌基因转染
- 人高转移性和低转移性前列腺癌细胞株荧光差异凝胶电泳图像分析被引量：1
- 2008年
- 目的:比较人高转移性前列腺癌细胞株(PC-3M)和人低转移性前列腺癌细胞株(PC-3)间差异表达的蛋白质,拟发现早期诊断和逆转前列腺癌转移的分子标志物。方法:应用差异凝胶电泳(DIGE),分离PC-3M和PC-3细胞株的总蛋白,用图像分析软件比较分析并识别细胞间的差异表达蛋白质。结果:应用DIGE进行分离后,成功地获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)成功鉴定出11种蛋白质,其中9个蛋白质点仅在PC-3中有表达,2个蛋白质点仅在PC-3M中有表达。结论:人高、低转移前列腺癌细胞株的蛋白质组表达存在明显差异,这些差异蛋白质有可能为进一步发现前列腺癌转移相关分子和阐明前列腺癌侵袭转移的分子机制提供实验证据。
- 李群李一雷常明杨新宇王志新梅红夏阳李玉林
- 关键词：蛋白质组
- Fas配体阳性睾丸Sertoli细胞对异种胰岛细胞移植的影响
- 2007年
- 目的探讨睾丸Sertoli细胞预防异种胰岛移植排斥反应的效果。方法分对照组、1×106细胞组、2×106细胞组、4×106细胞组,每组8只糖尿病大鼠,分离纯化猪胰岛细胞,植入糖尿病大鼠肾被膜下,观察胰岛的有功能存活及排斥反应情况。结果术后胰岛有功能存活时间分别为(6.0±0.6)d、(21.6±5.7)d、(35.7±8.9)d、(48.9±12.7)d,共移植组有功能存活时间较对照组明显延长(P<0.01),移植物存活时间与睾丸Sertoli细胞数量呈剂量依赖,术后第5天移植肾脏免疫组化检查显示4×106睾丸Sertoli细胞移植组有更多的大量结构完整猪胰岛细胞存活,浸润淋巴细胞被诱导凋亡。结论Fas配体阳性表达的SC细胞共移植能明显有效地抑制异种胰岛细胞移植的排斥反应,诱导局部淋巴细胞凋亡。
- 杨新宇林瑞新李群房学东宫路路王志新
- 关键词：SERTOLI细胞胰岛异种移植
- 双向凝胶电泳结合激光捕获显微切割技术成功构建人正常前列腺细胞的双向电泳图谱
- 2007年
- 目的:建立正常前列腺细胞的蛋白质组学研究的技术体系,全面展示正常前列腺细胞的蛋白质表达谱。方法:用激光捕获显微切割(LCM)技术获取正常前列腺组织中的上皮细胞,提取细胞中的蛋白质,建立固相pH梯度双向凝胶电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Evolution分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高丰度蛋白点,进行基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果:成功构建出正常前列腺细胞的双向电泳图谱,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出正常前列腺细胞的一个蛋白质点。结论:正常前列腺细胞的蛋白质样品双向电泳图谱重复性良好,初步建立了正常前列腺细胞的蛋白质组学研究技术并验证了该技术的可行性。
- 李群李一雷杨新宇张海英李会敏李玉林
- 关键词：前列腺细胞激光捕获显微切割双向凝胶电泳蛋白质组学
- 腺病毒5型E1A基因对乳腺癌细胞化疗药敏感性的影响
- 2007年
- 目的探讨E1A基因对乳腺癌细胞化疗药敏感性的影响。方法双酶切质粒pUC119-E1A,获得E1A基因,连接入pEGFP-C1载体,构建真核表达质粒pEGFP-E1A。经脂质体介导转染人乳腺癌细胞系SK-BR-3细胞株,经筛选获得稳定表达E1A基因的转染细胞。RT-PCR检测E1A基因的mRNA转录水平。体外观察各组细胞软琼脂集落及对抗肿瘤药物顺铂的敏感性。结果RT-PCR结果显示,只有重组质粒pEGFP-E1A转染的细胞在约380 bp处有一特异性扩增条带,与未转染组和空载体转染组相比,转染E1A基因后,SK-BR-3肿瘤细胞在软琼脂中形成的集落明显变小,集落形成率明显降低,对顺铂的敏感性明显提高。结论已成功构建E1A基因表达质粒,并稳定表达了E1A基因,表达产物明显抑制乳腺癌细胞的生长,有效提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,为其临床应用提供了理论和实验依据。
- 杨新宇李群李向良房学东
- 关键词：E1A基因乳腺癌基因转染敏感性
- 人前列腺癌PC-3细胞膜蛋白组学的分析被引量：2
- 2008年
- 目的分析人前列腺癌PC-3细胞中的所有膜蛋白,全面展示PC-3细胞中的蛋白质表达谱。方法采用一维SDS-PAGE,结合高效液相色谱-串联质谱的方法,分离并鉴定PC-3细胞中的膜蛋白。结果在严格的过滤参数条件下,PC-3细胞中鉴定出2172种蛋白,其中1499种经过基因本体评注(GOA)显示为已知细胞组分,其余为未知细胞组分。在已知细胞组分中,564种(37.6%)蛋白为质膜蛋白,其中138种为跨膜蛋白。跨膜蛋白中,21.17%被预测至少有1个跨膜区,57.66%有1～3个跨膜区,30.66%有4～9个跨膜区,11.66%有不少于10个跨膜区。许多新的蛋白也被鉴定,其中包括假设蛋白和一些cD-NA序列。结论这些被鉴定蛋白的生物学功能和理化性质将有助于进一步理解前列腺癌侵袭和转移的分子机制,为寻找与前列腺癌转移相关的分子提供新的实验证据。
- 李群李一雷牛云杨新宇王艺昧李玉林
- 关键词：前列腺癌膜蛋白PC-3细胞蛋白组学
