杨伟现
- 作品数：12 被引量：14H指数：2
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- 胶质瘤C6肿瘤干细胞蛋白质组学初步分析
- 2010年
- 目的:运用蛋白质组学的方法,对C6脑肿瘤干细胞(BTSC)和非BTSC细胞进行配对研究,建立差异性蛋白文库,为探讨胶质瘤病因提供初步线索。方法:在C6细胞中,参照神经干细胞(NSC)培养条件进行培养。出现典型的神经球后,利用免疫荧光染色检测细胞标记,包括nestin,神经元特异性烯醇化酶(NSE),神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等,以及诱导分化等方法,鉴定神经球细胞是否为BTSC。收集神经球和非神经球细胞,进行配对,利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)检测细胞总体蛋白,分析差异性蛋白点。结果:C6细胞在NSC培养条件下,出现比较典型的神经球。神经球细胞nestin阳性,NSE和GFAP阴性。经诱导发生分化,分化后细胞形态与C6相似,能够表达NSE和GFAP等多种表型细胞标记,证实这种神经球细胞为肿瘤干细胞。在2D-PAGE结果中,C6肿瘤干细胞和非干细胞配对比较,有统计学差异(P<0.05)的蛋白点共有84个,大于2倍差异蛋白点有50个,大于3倍的有17个,大于4倍的有6个,最大差异倍数为11.607 2。在BTSC中,有55个差异蛋白表达增多(上调),29个蛋白表达下降(下调)。结论:胶质瘤C6细胞系中存在肿瘤干细胞,在蛋白质组学方面与非BTSC细胞有明显差异。
- 王存祖王宁欧阳琦黄钱焕赵鹏尤永平傅震杨伟现仇有成许慧中
- 关键词：脑肿瘤干细胞双向凝胶电泳蛋白质组学
- 转位分子蛋白对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响
- 2012年
- 目的利用相对分子质量为18000的转位分子蛋白（TSPO）的特异性配体1-（2-氯苯基）-N-（1-甲基丙基）．异喹啉-3-氨甲酰（pk11195）研究TSPO对人脑胶质瘤U251增殖的影响及机制，为人脑胶质瘤的治疗寻找新的靶点。方法体外常规培养U251细胞，应用100、50、25、12．5、6．25μmol／Lpk11195作用2h后MTT比色法检测细胞的增殖活性，同时设对照组（加入等量溶剂）；台盼蓝染色法检测对照组和50、6．25μmol／Lpklll95组细胞死亡率的变化；Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡；Westernblotting和免疫荧光法检测细胞TSPO的表达；2’，7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠（DCFH-DA）探针法和GSH试剂盒分别检测细胞内活性氧（ROS）和GSH的水平；曲氟胸苷（JC．1）染色法检测线粒体膜电位；荧光素酶法检测细胞内ATP含量。结果MTT检测显示50、25μmol／Lpk11195组细胞存活率高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；台盼蓝染色显示50μmol／Lpk11195组细胞死亡率、GSH水平低于对照组和6．25μmol／Lpk11195组，差异有统计学意义（P〈0．05）；6．25、50μmol／Lpk11195组细胞凋亡率、TSPO的表达量较对照组降低，且50μmol／Lpk11195组低于6．25ixmol／Lpk11195组，差异有统计学意义（P〈0．05）；6．25、50μmol／Lpk11195组ATP的含量高于对照组．且50μmol／Lpk11195组高于6．25μmol／Lpk11195组．差异有统计学意义（氏0．05）。pk11195组ROS水平较对照组降低，而细胞膜电位增高。结论TSPO具有促进U251细胞凋亡、抑制其增殖、类似于抑癌基因的作用。
- 许慧中杨伟现王存祖欧阳琦端礼荣熊御云贺清华向定朝孙洁
- 关键词：神经胶质瘤线粒体
- 胶质瘤中CD133、Nestin和ABCG2阳性细胞及其壁龛分布
- 2013年
- 目的探讨胶质瘤干细胞生存微环境—壁龛的结构和分布特征。方法采用免疫组化法检测26例胶质瘤标本中CD133、Nestin、ABCG2阳性细胞及壁龛的表达,计算其阳性细胞及壁龛数,并分级,分析其与病理分级的相关性。结果低级别(Ⅱ级)12例,高级别14例(Ⅲ级10例、Ⅳ级4例)。CD133、Nestin、ABCG2阳性细胞及其壁龛多半分布于血管周围以及血管相对富集的肿瘤边缘,三者均与病理分级呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论 CD133、Nestin、ABCG2阳性细胞及壁龛均以血管周围分布为主,与病理分级呈正相关关系;胶质瘤干细胞壁龛在胶质瘤发生、发展和浸润扩散中起着重要作用。
- 向定朝陆晓峰徐敏杨伟现许慧中王存祖
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤干细胞
- 维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥疗效的影响
- 2010年
- 目的探讨维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥(BCNU)疗效的影响。方法制作裸鼠胶质瘤U251模型,分别给予BCNU和BCNU+维拉帕米进行治疗,测量肿瘤大小,用免疫荧光染色检测肿瘤中P-糖蛋白(P-gp),多药耐受蛋白1(MRP1)和肺耐药相关蛋白(LRP)的表达。结果 BCNU+维拉帕米组中,肿瘤大小明显比BCNU组减小,尤其是第一至四周更加明显(P<0.05)。肿瘤细胞中LRP,P-gp和MRP1均为阳性,主要在细胞膜表达,从形态学上两组差别并不明显。结论维拉帕米在体内有明显增加胶质瘤U251对BCNU的敏感性,逆转耐药的作用。
- 吴小明仇有成王存祖欧阳琦黄钱焕杨伟现许慧中
- 关键词：胶质瘤维拉帕米
- 胶质瘤U251细胞中CD133表达及干细胞特性分析被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨CD133+细胞的生物学特性,分析CD133作为胶质瘤干细胞标记的可行性。方法:利用免疫荧光染色检测U251细胞中CD133、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等蛋白表达,分析CD133+细胞与CD133-细胞中巢蛋白、NSE、GFAP阳性细胞存在的差异。结果:U251中CD133+细胞比例为0.060±0.003,在CD133+细胞中,巢蛋白阳性细胞,NSE和GFAP阴性细胞比CD133-中明显增多;在CD133-细胞中,也存在巢蛋白阳性细胞,数目较CD133+中明显减少,相反巢蛋白阴性细胞,NSE和GFAP阳性细胞明显增多。结论:胶质瘤U251细胞存在CD133+细胞,在CD133阳性和阴性细胞中,均存在干细胞样细胞,但是在CD133+细胞中此类细胞更多。
- 杨伟现欧阳琦周月鹏王存祖张志坚向定朝许慧中陆晓峰
- 关键词：胶质瘤肿瘤干细胞
- 胶质瘤U251细胞化疗过程中MGMT表达改变与耐药的关系
- 2010年
- 目的探讨胶质瘤U251细胞中MGMT表达与卡莫司汀(BCNU)和替莫唑胺(TMZ)化疗耐药的关系。方法细胞生长情况用MTT进行评估,细胞周期采用流式细胞仪检测,MGMT表达用western-blot检测。结果 U251细胞对BCNU和TMZ存在耐药现象。在化疗过程中,处于G0/G1期细胞比例明显增加,MGMT表达无显著变化。结论利用BCNU和TMZ对U251进行化疗过程中,不能通过消耗MGMT,来达到逆转耐药现象的目的 。
- 吴小明仇有成王存祖欧阳琦黄钱焕杨伟现许慧中
- 关键词：胶质瘤化疗耐药
- 骨髓间充质干细胞对胶质瘤C6细胞增殖的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对胶质瘤C6细胞体外增殖的影响。方法从大鼠骨髓中分离MSCs,体外培养和鉴定。取MSCs培养上清液,按照1/5,2/5,3/5的比例加入到C6培养基中,用MTT实验和BrdU标记指数(BrdU LI)评估C6细胞增殖。将MSCs与C6按照1∶1,1∶2,2∶1比例共培养。结果大鼠MSCs贴壁生长,有较强的增殖能力。经硫代甘油和巯基乙醇诱导分化后,分化为神经元或胶质细胞样细胞。C6培养基中加入MSCs培养上清液后,活性受到明显抑制,BrdU LI明显减低(P<0.05)。C6与MSCs共培养后,生长明显受到抑制,BrdU LI明显降低,尤其在MSCs周围,表现更加明显。结论大鼠MSCs在体外有明显的抑制胶质瘤C6增殖作用。
- 王存祖仇有成欧阳琦黄钱焕杨伟现许慧中向定朝徐建勇
- 关键词：骨髓间充质干细胞胶质瘤
- 术中控制性升压与脑动脉瘤预后之间的关系被引量：2
- 2012年
- 目的:分析术中控制性升压与脑动脉瘤术后死亡率、ICU时间、出院时Glasgow结果分级(GOS)之间的关系。方法:采用病例对照方法回顾性分析165例脑动脉瘤患者临床资料,统计患者性别,年龄,诊断,Hunt-Hess分级,GCS评分,手术方式,动脉瘤处理后有无升压;预后指标包括ICU时间,术后1月内死亡率,出院时GOS。使用χ2检验和t检验,并使用二元Logistic回归分析找出独立影响因素。结果:术后1月内死亡18例(10.9%);ICU时间平均为7.35(0～67)d;出院时GOS评分中,1～3分40例(24.2%),4～5分125例(75.8%)。动脉瘤处理后是否及时升压是影响ICU时间的独立因素,及时升压可以显著缩短ICU时间;Hunt-Hess分级和GCS与出院时GOS显著相关,但非影响出院GOS的独立因素。而控制性升压与出院时GOS关系不密切。结论:在脑动脉瘤术中,动脉瘤处理后及时升压可明显缩短患者ICU时间。
- 顾正松王存祖袁志诚杨伟现
- 关键词：脑动脉瘤预后
- 胶质瘤CD133阳性和阴性U87细胞蛋白质组学分析
- 2012年
- 目的通过对人脑胶质瘤U87细胞中CD133＋和CD133一细胞进行配对研究，寻找差异性蛋白。方法通过磁珠选择分离U87中CD133＋和CD133-细胞，利用双向凝胶电泳（2D—PAGE）检测上述细胞总体蛋白，分析差异性蛋白点。通过质谱（MALDI—TOF—MS）对蛋白点进行鉴定，建立两种细胞差异性蛋白文库。结果CD133＋和CD133一细胞配对比较，蛋白质组学检测结果中，差异有统计学意义（P〈0．05）的2D—PAGE蛋白点共有73个，〉1．5倍差异蛋白点有46个，〉2倍差异蛋白点有27个，〉3倍差异蛋白点有8个。在CD133＋U87细胞中，有10个蛋白表达增多（上调），63个蛋白表达下降（下调）。共得到44张高质量质谱肽质量指纹图谱（PMF），鉴定了35种蛋白质。结论CD133＋和CD133-细胞是同一细胞株中两种不同的细胞，蛋白方面存在的差异，将成为进一步研究它们相互关系的重要靶点。
- 王存祖杨伟现赵鹏尤永平傅震欧阳琦许慧中
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤干细胞蛋白质组学CD133
- 重型颅脑外伤院前急救进展被引量：8
- 2012年
- 《2010中国卫生统计年鉴》显示，2009年城乡居民主要疾病病死率及死因构成中“损伤和中毒”列第5位，城市占5．59％，农村占8．25％，是45岁以下人群最主要的死亡原因。外伤性脑损伤（TBI）在“损伤和中毒”中占有较大的比例，TBI已经对社会造成巨大危害，成为重要的公共卫生问题，需要迫切解决。
- 王存祖谢江宁许慧中杨伟现陈冬云
- 关键词：颅脑外伤重型院前急救
