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李文清: 作品数：39 被引量：113H指数：7; 供职机构：中山大学更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>

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枯草杆菌诱导型高效表达-分泌系统的构建被引量：6: 2001年; 利用枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株,sac B诱导基因及degQ,degU(Hy)正调控基因构建了诱导型表达-分泌系统以解决枯草杆菌分泌大量胞外蛋白酶和外源基因表达水平不高的问题,采用共转化方法将枯草杆菌IA95的degU(Hy)突变引入枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株DB403,获得degU(Hy)和蛋白酶三缺陷的新菌株DB1342;利用sacB基因的启动子——信号序列及芽孢杆菌的两个正调控基因degQ和degU(Hy)构建了诱导型表达-分泌载体pURT3及pURTQ4,由DB1342突变株及pURT3及pURTQ4载体组成枯草杆菌诱导型高效表达和分泌系统.在本系统中内源基因sacB的表达量是原菌株DB403的296倍,将地衣杆菌α-淀粉酶基因引入本系统后在sacB,degQ.degU的调控和蔗糖的诱导下,α-淀粉酶的表达量是在DB403中的140倍,证实degQ及degU对基因表达的增强作用是叠加的.; 吴青罗进贤徐柏年李文清; 关键词：诱导型枯草杆菌 Α-淀粉酶外源基因诱导基因调控基因

含笑属叶绿体基因组限制位点变异性研究被引量：2: 1994年; 采用不连续蔗糖梯度离心法分别提取白兰(Michelia alba DC.)和含笑(Michelia figo spreng.)叶绿体DNA。经BamHI酶切后,白兰和含笑分别产生21和25个片段,其中白兰的各酶切片段在含笑的限制酶图谱对应位置均观察到,白兰和含笑叶绿体基因组大小分别为139.74和143.18kb。两基因组间的遗传距离为0.029。叶绿体DNA限制酶酶切分析可以在分子水平上讨论植物间的系统关系。; 王艇罗进贤张宏达张添元李文清王红革; 关键词：叶绿体基因组含笑属

上皮间质转化的表观遗传调控被引量：3: 2017年; E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达丧失是上皮间质转化（EMT）的重要标志，许多EMT转录因子结合到E-cadherin启动子区下调其表达，从而调节EMT。表观遗传调控包括DNA甲基化、组蛋白修饰、微小RNA，均参与EMT相关基因表达调控。研究表明，EMT转录因子协同表观遗传调控因子参与E-cadherin表达。靶向EMT表观调控代表着肿瘤新的治疗方向。; 李文清侯劲松; 关键词：DNA甲基化微RNAS 组蛋白修饰上皮间质转化

分泌载体pPSA18的构建及地衣杆菌淀粉酶在枯草杆菌中的表达和分泌: 1993年; 本文报道利用枯草杆菌噬菌体Spol 的启动子Spac Ⅰ,合成的解淀粉芽胞杆菌信号序列及枯草杆菌质粒PUB 18重组,构建分泌型表达载体并将地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因(缺失启动子及信号序列)引入构建的载体,获得重组质粒pPSA 18.将此质粒转化枯草杆菌QB1130(amy^-)感受态细胞,在含5μg/ml 卡那霉素及1%可溶性淀粉的LB 平板上筛选Km^r 及淀粉酶阳性的转化子.从阳性转化子中提取质粒,经酶切分析后重新转化枯草杆菌QB1130,得到的转化子全部都能向胞外分泌淀粉酶,证明构建的载体能在枯草杆菌中表达和分泌外源基因产物.; 张添元罗进贤李文清; 关键词：枯草杆菌淀粉酶芽孢杆菌

黑曲霉糖化酶cDNA的改造及其在酿酒酵母中的表达被引量：7: 1998年; 应用PCR技术扩增黑曲霉糖化酶cDNA不含非编码区50bp的5’端740bp的序列与该cDNA3’端1400bp的序列连接，获得切除了5’端非编码的糖化酶cDNA。将改造后的cDNA插到质粒pMA91的酵母PGK基因的启动子和转录终止信号之间，构建了含黑曲霉糖化酶基因的表达载体pMAG17。用原生质体转化法将重组质粒pMAG17引入酿酒酵母GRF18。酿酒酵母GRF18转化子在淀粉平板上产生水解透明圈，表明糖化酶已在酵母中表达并分泌至培养基中。测定转化子的胞外酶活力及淀粉水解率。结果表明：改造后的糖化酶基因在酵母中的表达、分泌水平及水解淀粉的能力都高于未改造的基因。; 李文清罗进贤叶若邻徐柏年; 关键词：黑曲霉糖化酶基因改造酿酒酵母 CDNA

一种铱配合物及其制备方法和应用: 本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种铱配合物及其制备方法和应用，该配合物应用于抗非黑色素瘤皮肤癌的光动力治疗具有较强的疗效，在光照条件下可以破坏NAD<Sup>+</Sup>/NADH氧化还原平衡引起细胞死亡，对人非黑色...; 黄怀义范中贤李文清; 文献传递

大麦α-淀粉酶和黑曲霉糖化酶在酿酒酵母中的表达和分泌被引量：10: 1998年; 将大麦α 淀粉酶和黑曲霉糖化酶cDNA重组进同一大肠杆菌酵母穿梭质粒构建含双基因的表达分泌载体 pMAG1 5 .用原生质体转化法将 pMAG1 5引入酿酒酵母 (S .cerevisiaeGRF1 8) ,在酵母PGK基因的启动子和转录终止信号及本身的信号序列的调控下 ,实现大麦α 淀粉酶和糖化酶的高效表达 ,99%以上的酶活力分泌至培养基中 .构建的酿酒酵母菌株GRF1 8( pMAG1 5 )在含 1 5 %可溶性淀粉的培养基中 ,培养 47h能水解 99%的淀粉。; 罗进贤李政海李文清; 关键词：大麦 Α-淀粉酶黑曲霉糖化酶酿酒酵母

一种金属铱光敏剂及其制备方法和应用: 本发明涉及医药领域，具体涉及一种金属铱光敏剂及其制备方法和应用，本发明公开的新型金属铱光敏剂，在黑暗情况下对肿瘤细胞和正常细胞均没有毒性，但是在光照条件下对肿瘤细胞具有很强的生长抑制能力，对于研究高效低毒的抗肿瘤药物具有...; 黄怀义范中贤李文清缪梦昭

波氏假丝酵母启动子的克隆及新霉素基因的表达被引量：1: 2001年; 报道了波氏假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｂｏｉｄｉｎｉｉ）启动子的克隆，将克隆的启动子与Ｎｅｏ基因重组构建了含Ｎｅｏｒ基因的表达载体ＹｅｐＮＰ１８１，转化波氏假丝酵母，实现了Ｎｅｏｒ基因在波氏假丝酵母中的表达，使波氏假丝酵母转化子能在含Ｇ４１８的抗性培养基上生长从而建立了Ｎｅｏｒ基因──Ｇ４１８选择系统，为外源基因在波氏假丝酵母中表达创造了条件．; 徐柏年吴江雪李文清罗进贤; 关键词：启动子克隆转化子

枯草杆菌启动子－信号肽序列的克隆及序列分析被引量：5: 1994年; 利用含红霉素抗性基因和缺启动子－信号肽序列的氨苄青霉素抗性基因的双功能质粒ｐＧＰＢ１４为探针载体，克隆了枯草杆菌的启动子－信号肽序列并对克隆的片段进行序列分析。枯草杆菌染色体ＤＮＡ经Ｓａｕ３Ａ酶解后与ＢｏｍＨＩ酶切的质粒ｐＧＰＢ１４连接，转化大肠杆菌Ｃ６００，筛选抗氨苄青霉素及抗红霉素的转化子，从双抗性转化子中提取重组质粒并经酶切分析，显示克隆的ＤＮＡ片段在０．２７－１．５ｋｂ之间。用Ｓａｎｇｅｒ的双脱氧链终止法测定了１０个克隆片段的ＤＮＡ顺序，结果表明，克隆的片段都含有启动子、核糖体结合优点及信号肽序列。克隆片段可以在大肠杆菌和枯草杆菌中恢复氨苄青霉素抗性的表型。β－内酰胺酶活力测定结果证明：大肠杆菌的酶活力主要积累在周质空间内而枯草杆菌的酶活力主要分泌到胞外。; 罗进贤李文清张添元柴戍杰王红革; 关键词：枯草杆菌启动子信号肽