朱杰
- 作品数：46 被引量：73H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 双抗夹心ELISA检测兔出血症病毒抗原方法的建立及初步评估被引量：3
- 2016年
- 为建立一种快速、特异性强的用于检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗原的双抗夹心ELISA方法,本研究通过抗体配对实验,确定以抗兔出血症病毒结构蛋白VP60单克隆抗体9H9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的9H9为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法。通过优化,确定最佳条件为:0.5μg/m L稀释后的9H9作为捕获抗体,底物显色液37℃包被2 h 4℃过夜,1%明胶溶液37℃封闭2 h,用含10%胎牛血清的PBST按5μg/m L稀释后的辣根过氧化物酶标记的9H9作为检测抗体,37℃作用15 min。建立的ELISA方法与杯状病毒科其他病毒无交叉反应,应用本方法和RT-PCR方法对85份兔肝脏样品进行检测,证明双抗夹心ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,有望作为临床快速检测的一种简便方法。
- 郭慧敏谭永贵缪秋红朱杰刘腾陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：兔出血症病毒单克隆抗体
- 犬瘟热病毒NT株分离鉴定、全基因测序与分析
- 2023年
- 为分析我国犬瘟热病毒的流行性特点及阐明该毒株的基因特征与遗传进化情况。本研究用表达SLAM受体的犬源Vero细胞系对犬瘟热病毒分离培养,并从南通、安徽两地收集的疑似犬瘟热病料(肺,脾)中分离出一株犬瘟热病毒,运用RT-PCR、病毒的半数感染量(TCID50)等方法对分离株进行鉴定,从而确定分离株为犬瘟热毒株,命名为CDV-NT-1。利用RT-PCR方法分段扩增此分离株的全基因组cDNA,用DNAStar软件比较CDV-NT-1分离株与GenBank上其他典型CDV毒株的同源性,并用Mega7.0软件进行系统进化分析。结果显示:CDV-NT-1株全基因组序列长度为15544 bp;CDV-NT-1与野毒株的同源性在97.6%~98.5%,而与疫苗株Snyder Hill、Phoca、Onderstepoort的同源性只有92.1%,CDV-NT-1与Asia-I位于同一分支,与疫苗株处于不同的分支,属于Asia-1型。本研究结果为CDV的研究奠定了基础。
- 宋若楠刘春草王真真王真真朱杰朱杰李传峰刘光清
- 关键词：犬瘟热全基因组
- 新型鸭呼肠孤病毒P18基因的表达与鉴定
- 为鉴定序列推导的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)P18基因是否存在,本研究采用RT-PCR扩增获得NDRV TH11株推导的P18基因,将其亚克隆至原核表达载体p Cold-TF,表达并纯化获得P18重组蛋白。以此重组蛋白为...
- 吴巧梅李传峰朱杰谭永贵李琦刘光清陈宗艳
- 关键词：新型鸭呼肠孤病毒多克隆抗体
- 文献传递
- 猫源C11orf96基因表达及其在细胞中的定位分析
- 2022年
- 本研究旨在通过克隆猫源C11orf96(Felis catus C11orf96,fC11orf96)基因,并制备其多克隆抗体分析该基因在细胞中的定位。以猫肾细胞cDNA为模板克隆fC11orf96基因,并利用无缝重组连接成功构建重组质粒pET-32a(+)-fC11orf96-Fe。随后将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达fC11orf96-Fe重组蛋白,并利用该重组蛋白制备多克隆抗体。最后利用Western blot及间接免疫荧光试验分析多克隆抗体的有效性及其细胞定位。结果表明,成功获得猫C11orf96基因CDS序列,全长372 bp,可编码124个氨基酸,表达的fC11orf96-Fe蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白大小约49 ku。由该重组蛋白制备的多克隆抗体能够识别细胞内源性fC11orf96蛋白和外源真核表达蛋白,并且发现fC11orf96蛋白定位于细胞质。本研究成功克隆得到猫C11orf96基因,并且fC11orf96蛋白定位于细胞质,为后续研究C11orf96的生物学功能奠定了基础。
- 杨洪早朱杰郭宏元汤傲星陈少宇刘春草张达袁莉刚刘光清
- 关键词：基因克隆多克隆抗体亚细胞定位
- 永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用
- 本发明公开了一种永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用；所述构建包括以下步骤：用Dispase‑胶原酶灌流法获得高活率的新鲜原代绵羊肺成纤维细胞，经过24h培养后，在浓度为5ug/ml的聚凝胺存在下，用浓缩纯化的含有hTE...
- 刘光清刘腾朱杰陈宗艳李传峰
- 文献传递
- 绵羊ZAP基因克隆与生物信息学分析
- 2022年
- 锌指抗病毒蛋白(ZAP)是一种重要的宿主限制性因子,能够抑制多种病毒的增殖。为研究绵羊ZAP(oZAP)的生物信息学特征和对该蛋白功能进行预测,本研究通过PCR扩增oZAP基因,其长度为2697 bp,编码898个氨基酸;生物信息学分析显示oZAP蛋白中丝氨酸(Ser)含量最高,半衰期为30 h,属于不稳定的亲水性蛋白;该蛋白不存在信号肽及跨膜结构,存在114个潜在的磷酸化位点和5个糖基化位点,二级结构预测中,参与形成无规则卷曲的氨基酸最多;功能结构域预测发现,该蛋白存在锌指域、WWE域和多聚核糖聚合酶功能域。本研究为进一步研究oZAP蛋白的抗病毒作用提供了有价值的信息。
- 汤傲星王勇董丹丹缪秋红朱杰戚睿斌郭宏元刘光清
- 关键词：绵羊生物信息学分析
- 一种gI、gE和TK三基因缺失株猫疱疹病毒疫苗及其应用
- 本发明提供一种猫疱疹病毒gI、gE和TK基因缺失株及其制备方法和应用，通过CRISPR/Cas9介导的同源重组技术缺失猫疱疹病毒gI、gE和TK基因片段得到一株缺失毒株。是由亲本猫疱疹病毒FHV WX19株进行gE、gI...
- 刘光清汤傲星孟春春朱杰李传锋
- RK-13细胞HBB基因敲除稳定株的构建方法
- 本发明公开了一种RK‑13细胞HBB基因敲除稳定株的构建方法；所述方法包括如下步骤：设计一对互补的靶向家兔HBB基因第二个外显子的sgRNA，以pSpCas9(BB)‑2A‑Puro(PX459)V2.0质粒为载体,构建...
- 刘光清谭永贵刘腾朱杰陈宗艳李传锋
- α属冠状病毒入侵宿主所需宿主因子研究进展
- 2024年
- 属冠状病毒包含众多对畜牧业存在重大威胁的成员,如猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猫传染性腹膜炎病毒等。病毒识别细胞表面的受体是感染宿主的第一步。因此,探索冠状病毒感染机制对了解病毒的组织嗜性和宿主谱具有重要意义。本文系统总结了近年来α属冠状病毒入侵宿主所需的受体和其它辅助性宿主因子的作用机理。
- 孙亚娟张达汤傲星袁莉刚刘光清朱杰
- 关键词：功能性受体入侵机制
- 绵羊MAVS基因的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2019年
- 通过RT-PCR方法从绵羊肺细胞(sheep lung cells,SLT)扩增获得MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a,测序鉴定结果表明成功获得重组质粒pET-32a-MAVS。将其转化至感受肽细胞BL21中,经IPTG诱导获得重组蛋白。将纯化的MAVS蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备抗MAVS的鼠源多克隆抗体。SDS-PAGE结果表明该抗体具有良好的反应原性。MAVS多克隆抗体的成功制备为其生物学功能研究奠定了基础。
- 董丹丹刘腾缪秋红朱杰刘光清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
