方诚
- 作品数：10 被引量：89H指数：5
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部卫生公益性行业科研专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GDDR转基因小鼠的基因表达鉴定及功能初步分析
- 2015年
- 目的:对构建的胃癌相关下调基因GDDR(Gastric Dramatic Down-related)转基因小鼠进行鉴定及功能初步检测,为深一步研究GDDR的生物学功能提供可靠的动物模型。方法:对GDDR转基因和野生对照(未经过基因修饰)小鼠胃组织使用实时定量PCR检测其基因转录情况,western blot和免疫组化检测其组织蛋白表达水平及表达部位。通过胃组织进行糖原染色和胃粘膜表面主要糖蛋白MUC5AC行免疫组化染色对小鼠表型进行初步分析。结果:实时定量PCR、western blot和免疫组化结果均显示在GDDR转基因小鼠中胃粘膜GDDR的表达水平明显高于野生组。糖原染色结果显示GDDR转基因小鼠的粘液分泌及粘液厚度高于正常对照组,糖蛋白MUC5AC的表达也显著强于野生组。结论:经过鉴定GDDR转基因小鼠的外源性基因GDDR得到成功表达。通过对GDDR转基因小鼠表型的初步分析,提示GDDR可能参与胃粘膜粘液层的组成和增加粘液分泌从而发挥着保护胃粘膜的作用。
- 王刚方诚李先贵王飞赵占伟杜建军
- 关键词：转基因小鼠功能分析
- 胃癌相关下调基因在胃癌及癌前病变中的表达及其意义被引量：10
- 2014年
- 目的观察胃癌相关下调基因(GDDR)在胃癌及癌前病变中的表达变化,探讨GDDR在胃黏膜癌变过程中的作用和意义。方法应用免疫组化SP法测定经胃镜活检和病理确诊的40例正常胃黏膜组织,40例慢性浅表性胃炎,40例慢性萎缩性胃炎,40例胃的肠上皮化生,20例轻度异型增生,20例重度异型增生和40例胃癌中的GDDR蛋白表达情况。结果从正常胃黏膜组织、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃肠上皮化生、轻度异型增生、重度异型增生、胃癌的发展过程中,GDDR蛋白表达逐渐下调(平均秩次分别为190.70、182.70、146.24、104.40、70.33、47.20和40.20),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GDDR表达下调发生在胃癌形成早期,提示GDDR在胃癌的早期诊断和治疗中起重要作用,有望成为胃癌早诊的分子标记物和分子治疗的新靶点。
- 赵占伟方诚王飞双剑博王刚华谨杜建军
- 关键词：胃肿瘤癌前病变免疫组化
- GDDR对5-FU诱导下胃癌细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的:通过5-FU诱导人胃癌细胞系SGC-7901凋亡,研究GDDR在胃癌细胞凋亡中的作用。方法:利用已构建成功的SGC-7901-GDDR和SGC-7901-pcDNA3.1稳定转染细胞系,在5-FU诱导下促进其凋亡发生,流式细胞术和Western blot检测以上两种细胞系中凋亡发生率和Caspase-3表达及活化程度。结果:未加药组中SGC-7901-GDDR和SGC-7901-pcDNA3.1凋亡发生率无统计学意义,且两者均未观察到活化型Caspase-3表达。加药组中SGC-7901-GDDR凋亡发生率显著高于SGC-7901-pcDNA3.1,且活化型Caspase-3表达前者显著高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:GDDR可通过上调活化型Caspase-3的表达促进SGC-7901细胞凋亡,提示凋亡可能也是GDDR抑癌途径之一,并因此可能在胃肠道肿瘤治疗中发挥作用。
- 王飞方诚赵占伟王刚双剑博华瑾杜建军
- 关键词：细胞凋亡CASPASE-3胃癌
- 完全腹腔镜胃癌D2根治术150例报道被引量：13
- 2012年
- 目的研究完全腹腔镜下D2淋巴结清扫胃癌根治术（TLG）的安全性和可行性。方法回顾性分析2009年7月至2012年6月行TLG（TLG组）与腹腔镜辅助下D2淋巴结清扫胃癌根治术（LAG）（LAG组）共601例患者的临床资料,手术均由同一手术组完成。结果 TLG组150例中行远端胃切除68例,全胃切除82例。LAG组451例中远端胃切除214例,全胃切除237例。TLG组平均手术时间292min,LAG组平均手术时间为269min（P〈0.05）。TLG组平均住院时间为10.9d,LAG组平均为12.1d（P〈0.05）。术后镇痛泵的使用时间TLG组平均为6.3（0~12）h,而LAG组为21.1（0~48）h（P〈0.05）。术后平均通气时间两者分别为3.2d和3.4d（P〈0.05）。术后首次进流质饮食时间TLG组平均为3.5d,LAG组为3.7d（P〈0.05）。随访时间1~37个月（平均随访时间16.7个月）,TLG组出现并发症15例,LAG组73例,两组均无手术死亡发生。结论相较于LAG,TLG具有可接受的手术时间与并发症发生率,患者术后疼痛轻,舒适感强,通气及下床活动时间早,住院时间缩短,可作为胃癌患者一种理想的手术方法。
- 杜建军王飞赵青川李纪鹏华瑾双剑博方诚
- 关键词：胃肿瘤腹腔镜胃切除术胃肠吻合术
- 朊蛋白在结肠癌及结肠炎组织中的表达及其临床意义被引量：4
- 2014年
- 目的:观察朊蛋白(PrPc)在正常结肠粘膜、结肠炎及结肠癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学法分别检测PrPc在正常结肠组织、结肠炎及结肠癌组织(各40例)中的表达,并分析其在结肠癌及结肠炎组织中的表达与患者性别、分化程度、TNM分期、淋巴结转移及炎症程度等临床特征间的关系。结果:PrPc在正常结肠及结肠癌组织中均有表达,在结肠炎中表达较低,在结肠癌组织中阳性表达率为60%(24/40),明显高于正常结肠组织的35%(14/40)及结肠炎组织的30%(12/40)(P<0.05)。轻度结肠炎中PrPc的阳性表达率明显高于重度结肠炎,结肠癌中PrPc的表达与患者的肿瘤分级、分期显著相关(P<0.05)。结论:PrPc在结肠癌中的表达增高,在结肠炎中表达较低,可作为临床判断结肠癌恶性程度及结肠炎炎症程度的重要参考指标。
- 梁聪胡皓方诚梁洁吴开春聂勇战
- 关键词：朊蛋白结肠癌结肠炎
- GDDR位点突变载体的构建和稳转细胞系的建立
- 2012年
- 目的构建GDDR位点突变载体,使GDDR翻译蛋白无法通过二硫键与TFF1结合,建立稳定转染GDDR位点突变载体的人胃癌SGC-7901稳转细胞系。方法设计GDDR Cys38位点突变引物,构建GDDR位点突变的真核表达载体;脂质体法转染重组质粒至人胃癌细胞系SGC-7901;G418筛选阳性细胞并扩大培养;实时定量PCR检测突变GDDR mRNA在人胃癌细胞系SGC-7901的表达。结果经限制性内切酶酶切和DNA测序证实质粒中插入的为所需序列;实时定量PCR证实突变GDDR在人胃癌SGC-7901稳转细胞系高表达。结论 GDDR定点突变载体构建成功,建立了稳定转染GDDR位点突变载体的SGC-7901细胞系,为进一步研究GDDR的结构和功能提供了条件。
- 方诚双剑博祁胜宾韩亚楠王飞赵占伟杜建军
- 关键词：点突变转染
- 腹腔镜辅助与开腹手术治疗进展期胃癌的疗效对比被引量：42
- 2014年
- 目的 探讨进展期胃癌腹腔镜辅助D2根治术的安全性和可行性.方法 选择第四军医大学西京消化病医院2005年9月至2009年12月240例胃癌患者为研究对象,其中120例进展期胃癌接受腹腔镜辅助D2根治手术（腹腔镜组）,120例进展期胃癌接受常规开腹D2根治手术（开腹组）为对照组,各组远端胃切除、全胃切除均分别为50例及70例.对患者的手术时间、术中出血量、淋巴结切除数量、肿瘤切缘情况、手术并发症、5年肿瘤复发情况、5年无病生存率进行对比分析.结果 120例腹腔镜组患者中均无中转开腹,平均手术时间（307±84） min,明显长于开腹组的（203±52） min（t＇=11.556,P＜0.01）;腹腔镜组术中出血量（258±78） ml,明显少于开腹组的（318±89） ml（=5.550,P＜0.01）;腹腔镜组获取淋巴结数（17±11）枚,开腹组获取淋巴结数（16±10）枚,两组间差异无统计学意义（t =0.723,P＞0.05）.腹腔镜组与开腹组所有切除标本切缘均阴性、无肿瘤细胞残留.腹腔镜组有9例患者发生手术相关并发症,发生率为7.5％,开腹组8例,发生率为6.7％,两组间差异无统计学意义（x2=0.252,P＞0.05）.腹腔镜组术后住院（10.6±4.7）d,明显少于开腹组的（14.3±2.9） d（t＇=7.339,P＜0.01）.两组住院期间均无死亡发生.中位随访期47个月,腹腔镜组与开腹组的5年无病生存率分别是47.6％和42.8％（x2=0.577,P＞0.05）. 结论 腹腔镜辅助进展期胃癌根治手术是一种安全、可行的手术治疗方法.
- 华瑾杜建军王安辉李纪鹏赵青川方诚闫永平
- 关键词：胃肿瘤腹腔镜胃切除术
- 一种勿需缝合的完全腹腔镜胃肠毕Ⅱ式吻合技术被引量：10
- 2011年
- 目的探讨一种新的勿需缝合的完全腹腔镜下胃肠毕Ⅱ式吻合技术的安全性和可行性。方法2011年5．7月间第四军医大学西京消化病医院采用自行设计的吻合技术完成完全腹腔镜胃癌D2根治术12例。该术式采用环形吻合器行胃空肠吻合，再用切割闭合器于肠壁开口处行空肠输入袢或输出袢侧侧吻合，最后关闭肠壁开口。结果12例完全腹腔镜胃大部切除术均获成功，无中转开腹或中转腹腔镜辅助手术；手术时间（196．O±19．3）min，术中出血量（169．5±28．8）ml。切除淋巴结（25．1±3．3）枚，近端切缘和远端切缘分别为（8．8±2．4）cm和（6．9±5．5）cm。术后首次排气时间平均为（3．1±1．3）d，术后住院时间（4．5±1．9）d，住院期间内均未观察到明显并发症。结论该吻合技术操作简单、快捷，勿需镜下手工缝合．用于完全腹腔镜胃大部切除重建手术安全、可行。
- 杜建军双剑博郑建勇李继鹏赵青川洪流华瑾方诚
- 关键词：胃肿瘤腹腔镜胃切除术胃肠吻合
- 完全腹腔镜下胃癌根治全胃切除食管空肠经典Roux-en—Y吻合42例被引量：12
- 2012年
- 完全腹腔镜治疗胃癌与腹腔镜辅助手术相比,具有创伤更小、手术应激更轻、美容效果更好的优势[1-4],但因其操作难度大、技术要求高、手术风险大而在国内外报道甚少,其安全性和有效性仍存在争议.除了在腹腔镜下完成淋巴结清扫和肿瘤组织的切除外,完全腹腔镜胃癌根治术的另一难点在于腹腔镜下进行消化道重建.我们开展完全腹腔镜下胃癌根治全胃切除食管空肠经典Roux-en-Y吻合42例,取得较好的疗效,报道如下.
- 杜建军双剑博郑建勇康振华洪流赵青川祁胜宾方诚华瑾
- 关键词：ROUX-EN-Y吻合全腹腔镜食管空肠全胃切除
- 胃肠道特异性GDDR单克隆抗体的制备及鉴定
- 2012年
- 目的制备鼠源性GDDR单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法利用SEAL对GDDR氨基酸序列表位行参数评分,结合人、鼠蛋白序列同源性,设计并合成重组GDDR蛋白,并以所获得蛋白免疫BALB/c小鼠制备鼠单克隆抗体,运用ELISA法检测抗体效价,免疫印迹分析和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果经常规细胞融合和筛选获得两株稳定分泌抗GDDR抗体骨髓瘤细胞株,ELISA检测腹水效价达1100000,Western-blot证实抗体可以和GDDR蛋白特异性结合,免疫组织化学结果显示正常胃黏膜组织GDDR表达明显高于胃癌组织。结论成功制备出两株抗GDDR单克隆抗体mAb,为进一步研究GDDR的生物学功能提供良好的工具。
- 方诚双剑博赵占伟王飞艾克热木玉苏甫华瑾杜建军
- 关键词：杂交瘤
