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静脉内移植骨髓间充质干细胞在脑缺血大鼠脑内的分布及其对学习和记忆的影响被引量：1: 2007年; 目的观察骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)经静脉注射移植后在脑缺血大鼠脑内的存活和分布情况,以及对学习记忆的影响。方法体外培养和扩增成年雄性SD大鼠BMSC,以"四管阻断法"制作大鼠前脑缺血再灌注模型,造模后3d通过尾静脉注射Hoechst33342标记的BMSC(2×106/ml),另设对照组通过尾静脉注射载体溶液,于注射后3周采用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆功能,于注射后4周处死大鼠,取脑组织切片,于荧光显微镜下观察BMSC在脑内存活及分布情况。结果BMSC移植大鼠逃避潜伏期、穿环次数和原象限时间与对照组相比有显著性差异(P<0.05),其中,逃避潜伏期显著短于对照组,穿环次数和原象限时间显著高于对照组。结论静脉注射移植BMSC能够进入大鼠脑内存活,主要分布在缺血性损伤部位,可改善脑缺血大鼠学习记忆能力。; 徐炎郑健周竹娟; 关键词：静脉移植脑缺血学习记忆

胎鼠皮质神经元细胞核的制备和鉴定被引量：1: 2008年; 目的建立制备皮质神经元细胞核的方法，以便用于核移植研究。方法（1）采用胎龄17d的胎鼠进行皮质神经元的分离培养，用抗MAP2和NeuN免疫细胞化学法进行鉴定；（2）用梯度离心法制备神经元细胞核，并用HE染色、免疫荧光染色、透射电镜检查等方法进行鉴定，用台盼蓝染色检测其活性。结果（1）胎鼠皮质神经元呈多角形，伸出多个突起，MAP2染色显示神经元细胞浆和突起呈免疫反应阳性，NeuN染色显示神经元细胞核呈免疫反应阳性，部分核周胞质和部分近端突起也呈免疫反应阳性，MAP2和NeuN阳性细胞比例均在90％左右；（2）HE染色和Hoechst33342免疫荧光染色显示神经元梯度离心后在22％～30％Ficoll400梯度层可见到大量圆点状细胞核，台盼蓝染色显示活细胞核比例为99．6％；在22％～30％Ficoll400梯度层细胞透射电镜标本中可观察到圆形的细胞核，在细胞核的周围仅见到一层薄薄的胞浆成分。结论梯度离心法是制备皮质神经元细胞核的可靠方法。; 周竹娟郑健徐炎; 关键词：神经元细胞核核移植

梯度离心法制备骨髓间充质干细胞胞质体及其鉴定: 2008年; 目的建立制备骨髓间充质干细胞胞质体的方法，以用于体细胞核移植研究。方法（1）培养骨髓间充质十细胞，用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD71、CD11b；（2）用梯度离心法制备骨髓间充质干细胞胞质体，并用HE染色、Giemsa染色、荧光双标染色、透射电镜检查等方法进行鉴定，用台盼蓝染色检测其活性。结果（1）骨髓间充质干细胞呈长梭形、漩涡状生长，骨髓间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD71表达阳性，CD11b表达阴性；（2）HE染色、Giemsa染色、荧光双标染色和透射电镜检查显示骨髓间充质干细胞经梯度离心后在15％－18％Ficoll400梯度层可收集到大量胞质体，胞质体可快速贴壁，表达CD71，与完整骨髓间充质干细胞相似，体积与完整细胞相比差别不大。有活性的胞质体比例达99．5％。结论用梯度离心法可有效获得骨髓间充质干细胞胞质体。; 周竹娟郑健徐炎; 关键词：骨髓间充质干细胞梯度离心法

骨髓间充质干细胞静脉注射移植对脑缺血大鼠脑内神经细胞增殖和分化的影响被引量：5: 2009年; 目的观察骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)经静脉注射移植对缺血/再灌注脑内神经细胞增殖和分化的影响。方法体外培养和扩增成年雄性大鼠BMSCs;以"四管阻断法"制作大鼠前脑缺血/再灌注模型;造模后3、5、7d通过尾静脉注射Hoechst33342标记的BMSCs(2×106/1ml/只),另设对照组于相同时间点通过尾静脉注射载体溶液。于造模后4周处死大鼠,取脑切片,HE染色观察大鼠海马缺血性损伤情况;BrdU/GFAP、BrdU/MAP2和BrdU/Hoechst33342免疫荧光双标染色,观察大鼠脑内神经细胞的增殖及分化情况。结果BMSCs移植组海马CA1区存活锥体细胞数显著多于载体溶液对照组(P<0.05)。BMSCs移植大鼠脑内海马结构BrdU阳性细胞数显著多于载体溶液对照组(P<0.05),BrdU/MAP-2双标阳性细胞占BrdU阳性细胞的比例显著高于载体溶液对照组(P<0.05)。结论BMSCs经静脉注射移植能够减轻缺血性脑损伤,促进宿主脑内自体神经细胞增殖,并提高其分化为神经元样细胞的比例。; 徐炎周竹娟郑健; 关键词：骨髓间充质干细胞脑缺血细胞增殖

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徐炎