张小燕
- 作品数：8 被引量：5H指数：1
- 供职机构：北京大学基础医学院细胞生物学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 视网膜色素上皮细胞脱离体外培养条件后细胞保存液的研究
- 2007年
- 目的研究人视网膜色素上皮细胞(hRPE细胞)离体或脱离体外培养条件后,维持细胞活性、且延长细胞存活时间最适宜的液体。方法将5代以上hRPE细胞(本实验室保存)按常规冷冻、复苏培养于DMEM/F12培养基添加10%胎牛血清,EGF20μg/L和bFGF20μg/L条件下,至80%以上汇合,经胰蛋白酶消化,收集细胞、计数,置于6种不同保存液中(平衡盐液、Quinn’sadvantage medium、生理盐水、18氨基酸液、5%葡萄糖液和人工脑脊液),用Annexin V/FITC Kit染色,利用流式细胞术(FACS)检测细胞死亡或凋亡。采用2h至8h之间3个时间点,检测hRPE细胞在6种不同细胞保存液中的细胞状态。结果室温状态下,hRPE细胞30min内均发生坏死。4℃状态下,2h平衡盐液组凋亡率最低(0.9%);各组分别与平衡盐液组相比,显示人工脑脊液组与平衡盐液组之间存在显著差异;4h至8h,hRPE细胞凋亡率从26.74%上升至41.36%。各组总死亡率与凋亡率基本一致。结论4℃状态下,6种溶液中,平衡盐液是维持hRPE细胞脱离培养条件后保持细胞活性,且延长细胞存活时间最适宜的溶液。
- 孟书聪张君张小燕陆爱丽
- 关键词：视网膜色素上皮细胞细胞凋亡流式细胞术
- 碱性成纤维细胞生长因子和环磷酸腺苷对神经前体细胞内源性端粒酶反转录酶基因转录水平的调控
- 2011年
- 目的探讨人类神经前体细胞中内源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的转录活性及增殖与分化相关调控机制。方法采用系列hTERT基因启动子的荧光素酶报告载体和β-半乳苷酶表达载体,瞬时共转染HeLa细胞和hNPCs-G3细胞,检测不同长度启动子的活性。分析碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进增殖过程中hTERT基因启动子活性,分析cAMP诱导分化过程中hTERT基因启动子活性。结果 hNPCs-G3神经前体细胞内源性hTERT基因的转录活性较低,主要依赖近端启动子区。bFGF上调hNPCs-G3神经前体细胞内源性hTERT基因的表达,其调控主要作用在-2 098～-1 099bp区域和-3 216bp～-2 098bp区域内;cAMP抑制hNPCs-G3神经前体细胞hTERT基因的转录,其调控主要作用在近端启动子区。结论神经前体细胞内源性hTERT基因的转录活性较低,bFGF可上调神经前体细胞内源性hTERT基因的表达,cAMP则可抑制hTERT基因的转录。
- 张小燕王亚军刘胜勇王建伟陆爱丽王珂张卫光沈丽
- 关键词：神经前体细胞人端粒酶反转录酶转录
- 巢蛋白基因沉默通过激活细胞周期依赖性激酶(cdk5)促进大鼠神经胶质瘤细胞C6的迁移和增殖(英文)被引量：1
- 2011年
- 中间纤维蛋白巢蛋白(nestin)在各种胚胎前体细胞及成熟组织中均有表达.近年一些研究显示,巢蛋白的表达上调和一些恶性肿瘤的病理特征有相关性.但是,巢蛋白在干细胞分化及肿瘤发生中的作用还不为人知.在本研究中,我们运用短发卡状的RNA为工具,以大鼠神经胶质瘤细胞系C6为模型,对巢蛋白的功能进行了研究.划痕实验和迁移实验的结果均显示,巢蛋白基因沉默可以促进C6细胞的迁移.同时,BrdU渗入实验显示,此过程伴随着细胞增殖的增加.进一步研究显示,细胞周期依赖性激酶cdk5的活性在此过程中有显著的增加.此外,巢蛋白基因沉默所引起的迁移改变可以被cdk5特异性抑制剂roscovitine所回复,而对细胞增殖则没有显著影响.综上所述,本研究揭示了巢蛋白基因沉默与神经胶质瘤细胞的迁移和增殖相关,而cdk5是此过程的重要调节因子.
- 兰宝金鲁文静兰峰曹翠丽葛瑞民陈玲珑张小燕陆爱丽吴碧莲马晓雯沈丽
- 关键词：中间纤维巢蛋白迁移增殖
- 外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响
- 2013年
- 目的探讨外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响。方法构建可表达持续活化型Gli2的慢病毒载体,包装慢病毒颗粒,继而感染小鼠星形胶质细胞,对其生物学特性的改变进行鉴定。结果研究发现,含有外源表达的持续活化型Gli2的小鼠星形胶质细胞在神经干细胞培养基中连续培养13 d后可获得形成细胞球的能力,且形成的细胞球与正常的小鼠神经球在形态上相近;对所形成的细胞球做免疫荧光染色,结果显示神经干细胞的特异性标志物Nestin呈阳性。结论在小鼠星形胶质细胞中外源表达持续活化型Gli2后可使其获得形成神经球样细胞球的能力。
- 吴文涛葛瑞民董林刘秀秀张小燕沈丽
- 关键词：GLI2神经球星形胶质细胞NESTIN
- PCR片段测序和基因分型两种方法对肯尼迪病的诊断(英文)
- 2012年
- X连锁脊延髓肌萎缩症(SBMA)或肯尼迪病是一种成年人发病的神经变性疾病,以肌无力与慢性、进行性肌萎缩为特征.通过PCR片段测序和基因分型法准确检测雄激素受体(AR)基因CAG复制数目,兄弟俩(来自同一个中国家庭)被确诊为隐性遗传性SBMA.为了得到该中国家庭SMBA家系人员AR基因的CAG复制数目,我们采用了PCR片段测序和基因分型两种方法.在该SMBA家系中有两个已发病的成年男性、未发病的年轻男性,及女性基因携带者.两个已发病男性患者AR基因中CAG三核苷酸串重复数目分别是48和45.以前的研究表明特定三核苷酸串重复数目的扩增可导致人类遗传性神经障碍疾病发病。我们的研究结果完全支持这一观点,SMBA中国家系的三核苷酸CAG拷贝数目检测结果表明,AR基因CAG扩增数目与SMBA发病相关.
- 何其华张小燕陆爱丽兰峰洪天配沈丽
- 关键词：雄性激素受体X连锁
- PAX6基因5′端非编码区剪接突变能够引起先天性无虹膜症被引量：1
- 2009年
- 目的对一先天性无虹膜症家系进行了致病基因PAX6的突变分析。方法PCR反应扩增PAX6基因的所有外显子,PCR产物进行SSCP(单链构象多态性)分析,通过患者与正常人带型的差异来确定突变发生的外显子,对有差异SSCP带型的PCR产物进行直接测序找到突变位点。PCR产物进一步亚克隆到pGEM-T载体,测序验证突变位点。结果发现基因突变为PAX6基因第2内含子和第3外显子之间的剪接识别位点"AG"中的碱基A的丢失(IVS2-2delA)。结沦PAX6基因5′端非编码区剪接突变能够引起先天性无虹膜症。
- 张小燕唐凯荣运久宋书娟
- 关键词：PAX6非编码区突变无虹膜
- 人胚胎脑室脉络丛上皮细胞表达神经干细胞分子标志
- 2011年
- 目的探讨人12周龄胚胎脑脉络丛上皮细胞是否具有神经干细胞的生物学特性。方法制备室管膜/室管膜下区和纹状体脑切片和脉络丛组织铺片,采用免疫荧光染色,在激光扫描共焦显微镜下观察结果,采集图像数据。结果人12周龄胚胎脑室脉络丛上皮细胞表达神经干细胞分子标志CD133、Nestin和Sox2。神经干细胞的分子标志在脉络丛上皮细胞的分布具有一定极性,未见共定位分布。室管膜上皮细胞面向脑室腔面的细胞顶端微绒毛也表达CD133,而室管膜下区和纹状体区可见极少数CD133阳性标记细胞。结论 12周龄脑室脉络丛上皮细胞已定向分化,不仅提供维持神经干细胞的微环境,还具有神经干细胞的生物学特性。
- 张小燕刘胜勇何其华陆爱丽王珂张卫光沈丽
- 关键词：室管膜神经干细胞胚胎
- 放射性碘标记转铁蛋白体外示踪脊髓内移植的间充质干细胞被引量：3
- 2004年
- 目的 :检测间充质干细胞转铁蛋白受体 (TfR)在体外培养及移植入脊髓后的表达 ,进行体外放射性核素示踪研究。方法 :从胎儿血分离培养人间充质干细胞 ,应用流式细胞分析、免疫荧光染色和受体放射性分析鉴定转铁蛋白受体的表达 ,用放射性碘 (12 5I)标记的铁饱和转铁蛋白 [12 5I Tf(Fe) 2 ]作为示踪剂 ,进行体外放射自显影 ,示踪移植于兔正常脊髓内的间充质干细胞 ,并对12 5I Tf(Fe) 2 在脊髓实质的弥散动力学进行研究。结果 :流式细胞分析、免疫荧光染色证实体外培养的人间充质干细胞表达转铁蛋白受体 ,受体放射性分析表明12 5I Tf(Fe) 2 与其受体结合的平衡解离常数 (KD)为 (0 .98± 0 .12 )nmol/L ,最大结合位点 (Bmax)为每个细胞 (10 770 2± 6 2 2 6 )个。免疫荧光染色结果表明间充质干细胞移植于脊髓 2d后转铁蛋白受体表达 ,10d后不表达 ,移植 2d后以12 5I Tf(Fe) 2 为示踪剂进行脊髓切片体外放射自显影 ,获得移植细胞阳性影像。离体脊髓在12 5I Tf(Fe) 2 溶液中体外孵育 ,16h后12 5I Tf(Fe) 2 弥散入全部脊髓实质。结论 :12 5I Tf(Fe) 2 作为示踪剂可以在体外示踪到脊髓内移植 2d后的间充质干细胞 ,TfR和12 5I Tf(Fe) 2 是应用核医学影像进行间充质干细胞移植初期活体示踪可能的生物学标志和示踪剂?
- 白金柱丁为民刘忠军俞敏俊田嘉禾王凡杜进张小燕李凌松沈丽
- 关键词：转铁蛋白受体TFR脊髓内移植间充质干细胞
