张向颖
- 作品数：83 被引量：166H指数：8
- 供职机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 一种基于RAA-CRISPR-cas13a检测HBV cccDNA的试剂盒
- 本发明公开了一种基于RAA‑CRISPR‑cas13a检测HBV cccDNA的试剂盒。本发明提供了一种核酸分子组合物，由引物F1、引物R1和特异crRNA组成；引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；引物R1为序...
- 张向颖任锋李浩周育森田原金荣华段钟平陈德喜李伟华
- 基于PCR-CRISPR-cas13a检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒
- 本发明公开了基于PCR‑CRISPR‑cas13a检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒。本发明提供了一种用于检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒，含有Cas13a蛋白和crRNA，或者二者形成的复合体；所述c...
- 任锋张向颖李浩周育森田原金荣华段钟平陈德喜李伟华
- 文献传递
- 柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达及初步活性测定被引量：1
- 2012年
- 目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化;建立捕获免疫酶联法检测IgM抗体,检测20份手足口病阳性血清和30份阴性血清,评价重组抗原的灵敏度和特异性;采用CVA16全病毒免疫的抗小鼠血清进行Western印迹。结果:重组CVA16-VP1蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;用重组蛋白抗原检测,20份手足口病患儿阳性血清中有4份阳性,其中1份同时为肠道病毒71型(EV71)VP1阳性,30份阴性血清无反应。结论:实现了CVA16-VP1的高效表达,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为柯萨奇病毒A组16型诊断试剂的研究奠定了基础。
- 张向颖刘芳谢立陈堃戴振华修冰水张贺秋
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型原核表达抗原性
- 氧化应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡被引量：12
- 2015年
- 目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)在氧化应激诱导肝细胞凋亡中的作用。方法以人肝HL-7702细胞为研究对象,H2O2/抗霉素A诱导细胞产生氧化应激,建立肝细胞凋亡模型。SB216763为GSK3β特异性抑制剂,在H2O2/抗霉素A给药前2 h干预。采用钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶(PI)双染色观察细胞存活情况,采用annexinⅤ-FITC/PI联合流式细胞术检测细胞凋亡,同时对细胞培养上清进行乳酸脱氢酶(LDH)检测来评价细胞死亡程度;Western blot法检测p-GSK3β、GSK3β、caspase-3、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达。结果 H2O2/抗霉素A诱导的氧化应激促进了GSK3β活性增加,抑制GSK3β活性缓解了氧化应激和由氧化应激引起的细胞凋亡。与氧化应激模型组相比,SB216763干预组中PI染色的细胞显著减少,流式细胞术检测细胞凋亡率降低,细胞培养上清中LDH显著降低,Western blot法结果显示干预组中cleaved caspase-3、JNK、Cyt C蛋白表达下降。结论 GSK3β是氧化应激诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制其活性可减轻氧化应激而改善肝细胞凋亡。
- 张向颖郭媛媛张莉温韬朴正福时红波陈德喜段钟平任锋
- 关键词：氧化应激细胞凋亡糖原合成酶激酶-3Β
- 甲型H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段的克隆和表达被引量：3
- 2010年
- 目的:分析比对甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)、聚合酶B2(PB2)和聚合酶A(PA)抗原的序列,克隆表达保守的和变异的表位抗原区段,为免疫学诊断试剂的研究提供候选抗原。方法:采用BioSun生物学软件比较新近公布的A/H1N1流感病毒和我国猪流感病毒浙江株NA、PB2和PA抗原序列,并预测筛选NA、PB2和PA抗原表位保守区段与变异区段,采用PCR逐步合成法合成NA、PB2和PA表位抗原区段基因序列,并利用原核表达载体pBVIL1进行克隆表达。结果:筛选的保守表位抗原区段和变异表位抗原区段为NA/135～180aa、NA/310～350aa、PB2/1～80aa、PA/41～90aa、PA/231～280aa和PA/341～400aa;获得6条表位抗原区段基因序列,且6条表位抗原区段均获得了高效表达,得到纯化后的抗原。结论:获得了A/H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段,为进一步研制特异的甲型流感病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。
- 宋晓国王国华朱翠侠戴振华修冰水何竞陈坤张向颖凌世淦杨静王升启张贺秋冯晓燕
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶克隆
- 甲型流感病毒A/H1N1-NP抗原表位区段的克隆和表达
- 目的：分析比对甲型流感病毒A/H1N1-NP抗原的序列，克隆表达保守的和变异的表位抗原区段，为免疫学诊断试剂的研究提供候选抗原。
方法：采用BioSun生物学软件比较新近公布的A/H1N1病毒和我国猪流感病毒浙...
- 冯晓燕凌世淦王升启张贺秋宋晓国修冰水何竞王国华陈坤朱翠霞戴振华张向颖
- 关键词：甲型流感病毒核蛋白克隆表达
- 文献传递
- 内质网应激在乙型重型肝炎(肝衰竭)中的作用研究被引量：13
- 2019年
- 目的探讨内质网应激在乙型肝炎病毒(HBV)感染后引发的重型肝炎(肝衰竭)(重型肝炎肝衰竭)过程中的作用及其相关机制。方法收集2009—2011年首都医科大学附属北京佑安医院就诊患者中慢性乙型肝炎患者(12例,慢性乙型肝炎患者组)和HBV感染所引发的重型肝炎肝衰竭患者(12例,乙型重型肝炎肝衰竭组)以及正常人(8名,对照组)的肝组织标本和临床资料。对各组临床检测指标进行统计分析;选用透射电镜对肝组织内质网结构进行观察;用蛋白质印迹法和qRT-PCR检测内质网应激和凋亡相关因子葡萄糖调节蛋白(Grp)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)等的表达;制备冰冻切片进行免疫荧光检测。所有数据以均数±标准差(±s)表示,用LSD-t检验进行组间比较,P<0.05为差异有统计学意义。结果透射电镜检测结果表明,慢性乙型肝炎组和重型肝炎肝衰竭组内质网形态结构均受到破坏,且重型肝炎肝衰竭组更为严重;蛋白质印迹法和qRT-PCR结果显示Grp78、Grp94、胱天蛋白酶4在正常组和慢性乙型肝炎组表达较高,蛋白相对表达量分别为1.20±0.13和0.78±0.11、0.90±0.06和0.11±0.01、0.15±0.02和0.22±0.04;在重型肝炎肝衰竭组表达减弱(蛋白相对表达量分别为0.01±0、0.01±0、0.11±0.02),且与正常组差异有统计学意义,P值均<0.05;而CHOP表达与免疫荧光结果一致,随着损伤的加重而增强。结论内质网应激在乙型肝炎重症化过程中失调:慢性乙型肝炎阶段引发轻度内质网应激,而在重型肝炎肝衰竭阶段引发重度内质网应激。因此,内质网应激在重型肝炎肝衰竭发病过程中起到重要而又复杂的作用。
- 王慧娟徐玲田原张向颖时红波陈煜段钟平张桓虎任锋
- 关键词：肝衰竭内质网应激
- 细胞自噬在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭中的表达
- 目的 利用D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭模型,研究细胞自噬在肝衰竭疾病进展过程中的表达及其作用.方法 以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-GalN/LPS建立小鼠急性肝衰竭模型...
- 任锋魏琳琳张向颖时红波陈煜陈德喜段钟平
- KPC型碳青霉烯酶基因检测试剂盒、组合物及其应用
- 本发明公开了KPC型碳青霉烯酶基因检测试剂盒、组合物及其应用。本发明具体地公开了包括特异性扩增KPC型碳青霉烯酶基因的引物对和crRNA的组合物，含有该组合物的试剂盒以及利用该组合物进行核酸检测的方法。本发明采用PCR技...
- 任锋张向颖曹亚玲田原范子豪徐玲高耀马迎民段钟平
- 基于MAPK信号转导通路探究异甘草酸镁对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护机制被引量：1
- 2023年
- 目的 探讨异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)在刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的小鼠急性肝损伤中的作用及机制。方法 按照简单随机分组法将20只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级Balb/c小鼠分为正常对照组(4只)、MgIG组(4只)、Con A组(6只)、Con A+MgIG干预组(6只)。小鼠Con A(25 mg/kg)尾静脉注射12 h,构建急性肝损伤模型,干预组提前1 h给予MgIG(30 mg/kg)腹腔注射。检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α)、干扰素诱生蛋白10(interferon-inducibleprotein-10,IP-10)水平,检测IL-6、IL-1β、TNF-α、IP-10的mRNA相对表达量。体外实验中小鼠腹腔单核巨噬细胞用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,200 ng/ml)分别处理30 min、1 h、2 h和4 h,干预组小鼠腹腔单核巨噬细胞用MgIG(25μg/ml)预处理1h,检测IL-6、IL-β、TNF-α、IP-10炎症因子及磷酸化-p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen activited protein kinase, p-p38)、磷酸化-cJun氨基末端激酶(phospho-c-JunN-terminalkinases,p-JNK)、磷酸化-细胞外调节蛋白激酶(phospho-extracellular regulated protein kinases,p-Erk)蛋白表达。结果 与Con A组相比,Con A+MgIG干预病理切片炎性细胞浸润明显减少,血清炎症因子[IL-6:(10695.71±4861.94)pg/ml vs (27650.88±5701.79)pg/ml;IL-1β:(13.37±8.18)pg/ml vs (56.55±9.29)pg/ml;IP-10:(3298.43±534.95)pg/ml vs (7413.38±1497.78)pg/ml;TNF-α(63.27±13.97)pg/ml vs (97.06±21.26)pg/ml]及mRNA相对表达量(IL-6:5.23±1.63 vs 16.06±4.55;IL-1β:0.88±0.45 vs 5.44±0.94;IP-10:126.24±29.54vs 454.40±114.81;TNF-α:9.55±2.75 vs 16.46±3.98)均显著降低(P均<0.05)。体外实验表明,与LPS诱导的模型组相比,MgIG干预组p-p38、p-Jnk、p-Erk蛋白水平明显降低,同时炎症因子mRNA相对表达量(IL-6:3627.91±1491.16 vs 6630.40±1149.59;IL-1β:259.
- 王俊文范子豪田原徐玲高耀曹亚玲潘桢桢张向颖宋岩任锋
- 关键词：急性肝损伤异甘草酸镁刀豆蛋白A丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路
