周玉峰
- 作品数：28 被引量：83H指数：7
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鼠巨细胞病毒感染对小鼠脾细胞IL-12 p35和p40基因转录和表达的影响被引量：1
- 2006年
- 目的探讨鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠脾细胞内TH1细胞调控因子白细胞介素-12(IL-12)p35和p40基因转录和表达影响的时序性变化特点。方法制备全身播散型MCMV感染小鼠模型,于感染后3 d、5 d、7 d、10 d和14 d分离小鼠脾细胞,在PHA刺激后用RT-PCR法检测脾细胞内IL-12 p35和p40 mRNA水平时序性变化,ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-12 p70和IFN-γ蛋白水平变化。结果模型鼠在感染后第3天IL-12 p70表达显著增高(P<0．05),但第5天后急剧下降,显著低于正常鼠(P<0．05);IFN-γ在感染后第3天增高达峰值(P<0．01),随后逐渐下降,在感染后第10-14天降至正常水平;IL-12 p35 mRNA水平变化与IL-12 p70完全一致;而p40 mRNA则从感染第3天开始持续高水平表达(P<0．01)。结论IL-12 p35 mRNA和IL-12 p70在感染5 d后持续明显下降是感染后期TH1类细胞因子持续低表达、TH1反应受抑制的主要原因之一;感染后IL-12 p40 mRNA持续高水平可能导致拮抗剂(p40)2表达增加,后者可进一步抑制IL-12功能。
- 刘瑾方峰甄宏周玉峰舒赛男孙涛涛李革
- 关键词：鼠巨细胞病毒白细胞介素-12基因转录
- 小鼠巨细胞病毒感染对调节性T细胞扩增的影响及机制被引量：1
- 2009年
- 目的在体内外水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对调节性T细胞(Treg)扩增的影响及其可能的机制。方法建立全身播散型MCMV慢性感染模型,分别采用Western blot法和流式细胞术动态检测小鼠脾细胞中Foxp3的蛋白表达强度和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;模拟MCMV感染细胞的免疫环境,建立T淋巴细胞与MCMV感染的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)共培养细胞模型,在培养前和共培养3d后检测T淋巴细胞中的Foxp3蛋白表达水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率,RT-PCR方法检测MEF中转化生长因子(TGF)-βmRNA表达水平,双抗体夹心ELISA方法检测共培养上清中TGF-β蛋白表达水平。结果整体研究发现,MCMV在感染慢性期可显著增加T淋巴细胞中Foxp3的蛋白表达水平和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率。体外细胞模型发现,MCMV感染在体外同样可以上调T细胞中的Foxp3蛋白表达和Treg细胞比率。TGF-β在MEF中的基因表达和上清中的蛋白表达在MCMV感染后显著增加。结论MCMV感染在体内外均可诱导Treg在数量上的扩增和功能上的活化;MCMV感染导致宿主细胞TGF-β表达水平升高,可能是其在外周诱导Treg种群扩增的重要机制之一。
- 李亚男周玉峰舒赛男刘兴楼葛海霞方峰
- 关键词：巨细胞病毒调节性T细胞转化生长因子Β
- AGM区来源的基质细胞促进造血干细胞扩增的体外实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-mesonephros,AGM)来源的基质细胞对造血干细胞(HSC)增殖的促进作用,为探寻HSC的体外扩增方法奠定实验基础。方法:分别从孕11dBALB/c小鼠胚胎AGM区及6周龄小鼠骨髓分离、培养基质细胞,流式细胞仪等对基质细胞进行鉴定;利用小鼠胚胎干细胞(ESC)向造血细胞定向分化的模型,结合高增殖潜能集落(HPP-CFC)、原始细胞集落(BL-CFC)形成实验及流式细胞仪分析CD34+、CD34+Sca-1+细胞比例,对比研究AGM及骨髓基质细胞对ESC来源的HSC的扩增作用。结果:小鼠AGM和骨髓基质细胞在形态及表型上基本相似,均符合基质细胞的特征。AGM和骨髓基质细胞均可促进ESC来源的HPP-CFC的形成,但AGM基质细胞还可促进ESC来源的BL-CFC的形成;流式细胞仪检测发现:在骨髓基质细胞支持下,CD34+细胞增加了3-4倍,但CD34+/Sca-1+却无明显增加;而在AGM基质细胞支持下CD34+、CD34+Sca-1+细胞均明显增加了4-5倍。结论:AGM基质细胞在有效扩增小鼠HSC同时,能很好地维持HSC自我更新及多向分化的潜能。
- 付劲蓉刘文励周玉峰陈惠芹周敦华黄绍良
- 关键词：造血干细胞基质细胞
- 调节性T细胞在小鼠巨细胞病毒感染胚胎成纤维细胞机制中的免疫调控作用
- 2007年
- 目的体外研究调节性T细胞(Treg)在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)感染小鼠巨细胞病毒(MCMV)机制中的免疫调节作用。方法采用尼龙毛柱和MACSTreg磁珠法获得纯化的Treg和去除Treg的T细胞(TdepTreg),建立TdepTreg和添加Treg的T细胞与感染MCMV的MEF(MEFMCMV)体外共培养细胞模型。用蚀斑法检测共培养细胞上清中感染性病毒量;流式细胞术检测共培养体系中Tc1(CD3+CD8+IFN-γ+),Tc2(CD3+CD8+IL-4+),Th1(CD3+CD8-IFN-γ+),Th2(CD3+CD8-IL-4+)细胞比率变化;双抗体夹心ELISA法检测共培养细胞上清中转化生长因子-β(TGF-β)和IL-10蛋白表达水平。结果TdepTreg与MEFMCMV共培养3d后上清中感染性病毒量较感染对照组显著降低,同时效应性T细胞各亚群比率较非感染对照组显著增加。向TdepTreg-MEFMCMV体系中添加Treg可增加共培养体系中感染性病毒量,同时Tc1、Tc2和Th1细胞比率显著减少,且均与Treg比率存在剂量相关性;而Th2比率仅在Treg比率增至20%时显著低于感染对照组。添加Treg的共培养体系中IL-10和TGF-β蛋白表达水平随Treg比率增加而增高,与Treg存在正性相关。结论Treg可通过IL-10、TGF-β等途径抑制效应性T细胞的免疫保护作用,并且由于Treg抑制作用的不均衡性,导致Th1/Th2和Tc1/Tc2平衡失调,创造了一个利于CMV增殖的免疫环境。
- 李亚男方峰舒赛男甄宏周玉峰董永綏李革
- 关键词：巨细胞病毒调节性T细胞转化生长因子-Β白介素-10
- 酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库中鼠巨细胞病毒即刻早期蛋白M122相互作用蛋白的研究被引量：1
- 2010年
- 目的 应用酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库中与鼠巨细胞病毒即刻早期蛋白M122相互作用的宿主因子,为进一步研究巨细胞病毒的致病机制奠定实验基础.方法将诱饵质粒pGBKT7-M122转化酵母菌AH109,Western blot检测诱饵蛋白在酵母细胞中的表达.阳性重组AH109菌株与小鼠脑cDNA文库进行配合,在色氨酸、亮氨酸、组氨酸和腺嘌呤缺陷培养基（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）和铺有Ⅹ-α-gal的SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade平板上进行筛选,提取阳性酵母菌质粒,转化大肠杆菌后提取质粒测序,对测序结果进行序列比对和分析.将阳性文库质粒与诱饵质粒共同转化酵母AH109感受态细胞,重新验证其在酵母中的相互作用,同时阳性文库质粒与空载体pGBKT7亦被用同样的方法转入AH109感受态细胞,以排除阳性文库质粒的自激活作用.结果筛选出与M122蛋白相互作用的21种已知基因编码的蛋白质和3种未知基因编码的蛋白,其中21种已知蛋白分别为：突触融合蛋白8（syntaxin 8,Stx8）、磷酸葡萄糖变位酶2（phosphoglucomutase 2,Pgm2）、Shaker型电压依赖性钾通道的β1亚单位（potassium voltage-gated channel,shaker-related subfamily,beta member 1,Kcnab1）、19型胶原蛋白（collagen,type ⅪⅩ,alpha 1,Col19a1）、古蛋白1（archain 1,Arcn1）、胞嘧啶核苷酸激酶（cytidylate kinase,Cmpk）、热休克蛋白DnaJ同系物A亚家族成员1[DnaJ（Hsp40）homolog,subfamily A,member 1,Dnaja1]、Na＋、K＋ATP转运酶β3亚单位（ATPase,Na＋/K＋ transporting,beta 3 polypeptide,Atp1b3）、SH3结构域GRB2样相互作用蛋白1[SH3-domain GRB2-like（endophilin）interacting protein 1,Sgip1]、锚蛋白重复域17（ankyrin repeat domain 17,Ankrd17）、无义介导的mRNA 降解因子Smg-7同系物（Smg-7 homolog,nonsense mediated mRNA decay factor,Smg7）、精子相关抗原9（sperm associated antigen 9,Spag9）、FK506结合蛋白1A（FK506 binding protein 1a,Fkbp1a）、MYST组蛋白乙酰转�
- 王慧周玉峰舒赛男罗丹田佳张慧娟杜小弋方峰
- 关键词：酵母双杂交系统蛋白质相互作用
- 大蒜新素抑制人巨细胞病毒即刻早期基因表达在抗人巨细胞病毒机制中的作用被引量：10
- 2006年
- 目的研究大蒜新素抑制人巨细胞病毒(HCMV)复制的作用环节和机制。方法采用时间依赖的药物添加和移除实验分析大蒜新素在HCMV病毒复制周期中的作用环节。用Southern blot检测大蒜新素处理后感染细胞中HCMV DNA负荷量变化。用Northern blot和Western blot检测大蒜新素对HCMV即刻早期(ie)基因转录和翻译的影响,并与相应浓度更昔洛韦(GCV)的作用效应作比较。结果时间依赖的药物添加和移除实验发现大蒜新素只有在HCMV感染复制周期的早期存在时才能发挥对病毒增殖的抑制作用。大蒜新素对ie 1 mRNA的抑制率达30．4％-46．6％。在感染后24 h 病毒表达IE蛋白的高峰期时,大蒜新素对IE72表达的抑制率为42．6％-64．9％,对IE86表达的抑制率为50．7%- 70．6％。到感染后72 h时(子代病毒表达IE蛋白的时期),大蒜新素对IE蛋白仍然有抑制作用,对IE72的抑制率为 36.4％-49．3％,对IE86的抑制作用更为明显,抑制率达77．9％-87．7％,接近于对IE72抑制率的2倍。而GCV对一个 HCMV复制周期内的ie 1 mRNA和IE蛋白表达均无抑制作用。Southern blot结果显示,在感染后72 h(HCMV完成一个复制周期的时间点),大蒜新素和GCV均能减少HCMV DNA负荷量,两药相当剂量的抑制效应比较,差异无统计学意义(P> 0．05)。结论大蒜新素抑制HCMV ie基因的转录和翻译,进而抑制病毒的复制增殖,是其抗HCMV的重要作用机制。
- 甄宏方峰舒赛男周玉峰董永绥聂兴草李革
- 关键词：大蒜新素更昔洛韦二烯丙基三硫化物巨细胞病毒即刻早期基因
- 鼠巨细胞病毒干扰神经干细胞分化相关基因表达的体外研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）对体外培养神经干细胞（NSCs）wnt信号通路下游分化相关靶基因表达的影响，以探讨CMV先天感染致胎脑发育异常的分子机制。方法体外分离培养BALB／c胎鼠NSCs，用感染复数（MOI）为5、1和0．1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养，Western blot法检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因c-myc、cyclinD1、ngn-1、ngn-2蛋白表达水平的动态变化，real-timeRT-PCR检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路关键分化基因ngn-1mRNA水平的动态变化。结果感染组c-mye蛋白表达量在分化培养后第0．5-5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组cyclinD1蛋白表达量在第0．5天和1天显著低于正常对照组（P〈0．05）；在第2天和3天显著高于正常对照组（P〈0．05）；在第4天和5天，MOI=5组显著低于其他3组（P〈0．05）；感染组ngn-1蛋白表达量在第1～5天显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-1mRNA水平在第0．5～5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-2蛋白表达先降后升，与正常对照组先升后降相反，MOI=0．1和1组峰值后移至感染后第5天，且明显低于正常对照组峰值（P〈0．05）。MOI=5组未表现出明显的峰值，各感染组ngn-2表达量在感染后1d明显低于正常对照组（P〈0．05）；感染后2d，MOI=5组明显低于正常对照组（P〈0．05）；在感染后3、4、5d，各组ngn-2表达量又明显高于正常对照组（P〈0．05）。感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显。结论MCMV感染明显抑制NSCs Wnt信号通路分化相关基因c-myc和ngn-1蛋白表达，抑制ngn-1mRNA表达，并诱导cyclinD1和ngn-2蛋白表达紊乱，其效应随感染滴度增加而更为显著。MCMV抑制和干扰NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达可能是其抑制NSCs增殖分化进而导致胎脑损伤的重要作用机制之一。
- 田佳刘兴楼方峰王慧张慧娟罗丹周玉峰李革
- 关键词：神经干细胞WNT信号通路CYCLIND1
- 大蒜新素对人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞Caspase-3表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELs)Caspase-3表达的影响,从细胞凋亡角度探讨大蒜新素抗HCMV效应的部分作用机制。方法用HCMV AD169毒株感染HELs,建立高感染复数(MO I)和低MO I感染细胞模型;设药物高、中、低剂量分别为9,6和3μg.mL-1,采用蛋白印迹法检测病毒感染和(或)药物处理后72 h细胞Caspase-3的表达水平。结果正常细胞仅见Caspase-3 P32表达;HCMV感染细胞P32表达显著增加,还出现活性片段P17条带,且高MO I组P17表达明显高于低MO I组;大蒜新素处理低MO I感染细胞P17表达呈上升趋势,P17/P32比值也明显增加;大蒜新素处理高MO I感染细胞P17表达下调,P17/P32比值也显著下降。结论HCMV无论高或低MO I感染均可诱导细胞凋亡增多,且高MO I诱导作用更强。大蒜新素一方面使低MO I感染细胞凋亡增多,另一方面抑制高MO I感染细胞的凋亡。前者可能有利于细胞清除病毒,后者则可减少细胞损伤而发挥保护作用。大蒜新素对HCMV感染细胞凋亡的调控呈双向性。
- 孙涛涛方峰甄宏舒赛男刘瑾周玉峰李革
- 关键词：大蒜新素人巨细胞病毒CASPASE-3
- 双黄连、鱼腥草注射液抗鼠肝炎病毒3型的体外实验研究被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨双黄连、鱼腥草在细胞水平对鼠肝炎病毒3型(murine hepatitis virus,MHV-3)是否具有抑制作用。方法:细胞培养、蚀斑试验测定病毒滴度;MTT法进行药物毒性试验;蚀斑抑制试验检测双黄连、鱼腥草的抗MHV-3活性。结果:双黄连半数中毒质量浓度(TC50)为6 100μg.m l-1,抗MHV-3病毒的半数抑制质量浓度(IC50)为304.9μg.m l-1;鱼腥草的分别为500、22.06μg.m l-1。治疗指数(TI)双黄连为20.07,鱼腥草为22.67。两种中药成分对MHV-3病毒的抑制作用均存在明显的量效反应关系(P<0.01)。结论:双黄连、鱼腥草在细胞水平有显著的抗MHV-3作用。
- 易文龙方峰宁琴严伟明甄宏舒赛男周玉峰李革
- 关键词：双黄连鱼腥草
- 多药耐药相关基因HV126的电子克隆及在化疗前后白血病细胞中的表达被引量：8
- 2005年
- 目的 探讨白血病细胞多药耐药发生的分子机理,寻找新的多药耐药相关基因。方法 以HL- 6 0细胞为“驱动方”,以多药耐药细胞系HL- 6 0 / VCR为“实验方”,建立人白血病多药耐药细胞系HL-6 0 / VCR抑制消减杂交文库,利用基因芯片技术从中筛选出一条在野生型HL - 6 0细胞中基本不表达,而在HL - 6 0 / VCR耐药细胞中呈低丰度差异表达的新表达序列标记序列。用表达序列标记拼接的同源基因克隆法得到人类新基因HV12 6序列,再利用生物信息学数据库和软件对其进行功能的预测和分析。最后针对推导序列开放阅读框设计引物,逆转录-聚合酶链反应检测推导HV12 6基因序列在临床白血病患者化疗前后白血病细胞中的表达。结果 HV12 6的c DNA序列长1991bp,编码36 5个氨基酸,其编码蛋白序列局部与新近发现的在细胞凋亡与炎症反应中起重要作用的蛋白基序“PYRIN”存在约4 3%的相似性。逆转录-聚合酶链反应结果提示该基因与白血病细胞受化疗药物的作用和耐药存在联系。结论 HV12 6可能是与白血病细胞耐药相关的一条新基因,有必要对该基因进行进一步的实验室克隆与功能研究。
- 付劲蓉刘文励周剑锋周玉峰徐酉华金先庆
- 关键词：多药耐药相关基因化疗前后HL-60/VCR电子克隆白血病细胞多药耐药白血病细胞耐药
