周洁
- 作品数：10 被引量：49H指数：4
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项上海市“科技创新行动计划”更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立
- 目的建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法根据GenBank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP...
- 周洁赵丽娟陶凌云胡建华高诚陈洪岩
- 关键词：仙台病毒RT-LAMP实时监控
- 猪细小病毒病血清抗体VP2-ELISA检测方法的建立
- 2016年
- 利用纯化的猪细小病毒VP2蛋白为抗原,建立检测猪细小病毒血清抗体的间接VP2-ELISA。最佳反应条件为:抗原包被浓度300 ng/孔,4℃过夜,待检测血清1:50稀释。与猪细小病毒病阳性血清呈阳性反应,与猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪日本脑炎和猪圆环病毒病等5种疾病的阳性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数均小于10%。用该方法与Ceditest PPV猪细小病毒抗体检测试剂盒对102份血清进行平行检测和比较,间接VP2-ELISA的敏感性为93.8%,特异性为81.1%,符合率为89.2%。结果表明,猪细小病毒血清抗体间接VP2-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪细小病毒感染的血清抗体检测。
- 周洁周洁南文龙何远清殷黎静任倩陈义平
- 关键词：猪细小病毒抗体
- 猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为:抗原包被浓度为3.15μg/mL,待检血清稀释度为1∶40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病)、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性血清检测呈阴性反应。批间、批内试验变异系数均不超过8%。用该方法与HerdChek ELISA试剂盒同时对119份血清进行了平行检测,其相对敏感性、特异性和符合率分别为:75%、80.7%和79%。试验结果表明:猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪伪狂犬病毒血清抗体检测。
- 罗飞李宇琴陈义平周洁
- 关键词：猪伪狂犬病毒抗体
- 猪伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白gD主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：5
- 2011年
- 本试验通过PCR方法以猪伪狂犬病病毒SD株的基因组DNA为模板扩增得到了含gD主要抗原表位编码区的片段,将该PCR产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游。构建的重组质粒pET-gD经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子质量约为45.2ku,主要以包涵体形式存在。表达产物用His亲和层析柱纯化。Western blotting结果显示,该纯化蛋白能与猪伪狂犬病病毒抗体阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原反应性,可以作为猪血清伪狂犬病病毒抗体诊断用抗原。
- 罗飞李宇琴周洁南文龙陆明哲陈义平
- 关键词：伪狂犬病病毒主要抗原表位原核表达
- 布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 根据布鲁菌BCSP31基因序列设计布鲁菌通用检测引物和探针,建立了布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法。以构建的含BCSP31基因的质粒标准品10倍递进稀释为模板检测其敏感性,结果显示,本方法能检测约10个拷贝的阳性质粒,且标准曲线的线性关系良好。用本方法检测5株不同种的布鲁菌以及猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等4株对照菌。结果显示,5株不同种的布鲁菌均出现典型的"S"型扩增曲线,4株对照菌40个循环内均无CT值出现。用本方法和B4/B5-PCR方法对来自布鲁菌病流行地区3个不同牛场的40份血样、奶样和血清样进行平行检测。结果显示,本方法和B4/B5-PCR方法的结果符合率为80.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的27份样品经本方法检测均为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的13份样本,经本方法检测,其中8份呈阳性,5份为阴性。本方法的敏感性明显高于B4/B5-PCR方法。试验表明,所建立的Cycling探针荧光定量PCR方法具有敏感、特异、稳定等特点,可用于布鲁菌感染的快速检测。
- 许邹亮南文龙陆明哲周洁谭鹏飞陈义平毛开荣
- 关键词：布鲁菌
- 猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2009年
- 参照GenBank发表的猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位的编码区基因序列,设计一对引物,通过PCR扩增后,将约为600bp的目的片段克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-gB经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量约为42.4KDa,主要以包涵体形式存在。BandScan分析表明,表达量约占菌体蛋白的60.5%。利用His亲和层析方法得到了纯化的表达产物。Western blotting结果显示,重组蛋白能与阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原反应原性,可以作为检测用抗原。
- 罗飞陈义平陆明哲彭大新周洁李宇琴徐宝娟南文龙
- 关键词：猪伪狂犬病毒主要抗原表位原核表达
- 新城疫病毒LaSota疫苗株的蚀斑纯化被引量：2
- 2009年
- 通过蚀斑克隆技术，对新城疫病毒LaSota疫苗株进行连续纯化，在原病毒株的基础上筛选到1株免疫原性较好的病毒纯化株，血凝效价从9log2提高到11log2，鸡胚半数感染量（EID50）从10^-9.1／0．1mL上升到10^-9.5／0．1mL。通过对纯化株的F基因和HN基因进行测序，并与GenBank中已发表的新城疫病毒LaSota株基因序列进行比较发现，F和HN基因核苷酸序列的同源性分别在99．5％和98．6％，氨基酸同源性分别为99．1％和96．9％；F基因裂解位点区（112—117）氨基酸组成与原疫苗株完全一致。纯化株的鸡胚平均死亡时间（MDT）在109h、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）为0．375，与原疫苗株进行生物学特性比较，表明该纯化株比原疫苗株更适合用于疫苗生产。
- 楚电峰杜元钊刘相娥周洁刘思思朱吕昌
- 关键词：新城疫病毒纯化
- 布鲁氏菌环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法的建立被引量：26
- 2011年
- 应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性,并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清样本,经LAMP和B4/B5-PCR方法进行平行检测。结果显示,本方法最低检出限约为17fg布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好,布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应,而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示,LAMP和B4/B5-PCR这两种方法间的结果符合率为85.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的43份样品,经本方法检测全部为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的17份样品,经本方法检测,9份为阳性,8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4/B5-PCR方法。实验表明,本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。
- 许邹亮南文龙周洁陆明哲郭玉广谭鹏飞毛开荣彭大新陈义平
- 关键词：布鲁氏菌
- 猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立被引量：6
- 2008年
- 目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1～15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。
- 朱吕昌陈义平李明义郭玉广马爽周洁
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌多杀性巴氏杆菌副猪嗜血杆菌复合PCR
- 猪细小病毒结构蛋白VP2主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：4
- 2009年
- 本文参照GenBank发表的猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,设计一对引物,通过PCR方法扩增出一段包含VP2主要抗原表位编码区的片段,产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-VP2经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量为39.1KDa,主要以包涵体形式存在。BandScan分析,表达量约占菌体蛋白的65.2%。表达产物用His亲和层析柱纯化。Western blotting结果显示,该种蛋白能与阳性血清发生特异性反应。结果说明,该重组蛋白具有抗原性,可以作为鉴别诊断用抗原。
- 周洁陈义平楚电峰朱吕昌罗飞张秀娟
- 关键词：猪细小病毒结构蛋白VP2主要抗原表位原核表达
