刘欣毅
- 作品数：7 被引量：27H指数：2
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 一种新型的基因定点突变方法及其在DdsA突变研究中的应用被引量：2
- 2007年
- 为了发展基因突变技术,介绍一种新型的基因定点突变方法.该方法巧妙利用了基因序列中广泛存在的不完整的平端酶切位点.与传统方法相比,可以迅速地在全基因的任何部位替换核苷酸,并可以在突变实验过程中直接将目的基因克隆到T载体上,便于测序及进一步克隆.利用该方法成功地获得了DdsA(decaprenyl diphosphate synthase,十聚异戊二烯焦磷酸合成酶)在4个氨基酸位点上的19个变体酶.这些位点分布在基因的不同区域内.证明这种新方法的高效性.
- 刘欣毅张惠展袁勤生
- 关键词：基因突变定点突变
- 荚膜红细菌十聚异戊二烯焦磷酸合成酶异源表达及纯化的研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建生产辅酶Q10的大肠杆菌基因工程菌并研究相关酶的表达情况。方法将荚膜红细菌(Rhodobacter capsula-tusB10)中十聚异戊二烯焦磷酸合成酶编码基因ddsA分别克隆在Lac,T7和Trc启动子下游,使其在Escherichia coliJM83中表达。同时利用H is-tag的表达系统,对该酶的融合表达和镍柱纯化条件进行了研究。结果产物分析发现该基因在E.coli中表达出有活性的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶,并使宿主产生辅酶Q10。同时,28℃培养过夜,该酶以可溶形式存在于上清液中。在150 mmol.L-1咪唑的洗涤条件下,从镍柱上解离,并可以达到电泳纯。结论大肠杆菌可以表达Rhodobacter capsula-tusB10的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶,并合成辅酶Q10。
- 刘欣毅张惠展袁勤生
- 关键词：辅酶Q10
- 十聚异戊二烯焦磷酸合成酶结构与功能的研究
- 辅酶q(uq)是电子传递链上一类重要的生化物质，由母环和不同长度的聚异戊二烯链(ppp)组成。在生物体内，一些重要化合物如：甾族化合物、类胡萝卜素、异戊二烯醌、异戊二烯类蛋白质和萜醇都包含ppp的结构。一般而言，特定长度...
- 刘欣毅
- 关键词：定点突变辅酶Q
- 文献传递网络资源链接
- ubiCA基因的强化表达及对大肠杆菌辅酶Q生物合成的影响被引量：9
- 2006年
- 为调查大肠杆菌高产辅酶Q(CoQ)的可能性,首先研究大肠杆菌生物合成关键基因ubiCA强化表达对大肠杆菌CoQ产量的影响。本文构建了含有ubiCA基因的5个表达质粒,将其分别转入E.coli JM 83或BL 21(DE 3)菌株中,定量分析这些转化子的辅酶Q产量。结果表明ubiCA基因在ubiC自身启动子(pub iCA-lacZF)介导下的表达最有效,重组菌CoQ产量达到对照的3.5倍,由此推测ubiCA基因的表达可能与其启动子序列有关。
- 叶江马林吴海珍刘欣毅张惠展
- 关键词：大肠杆菌基因克隆辅酶Q
- 弱氧化葡糖杆菌ddsA基因在大肠杆菌不同宿主菌中的表达
- 文章分析确定了ddsA基因能在各种大肠杆菌中表达出有活性的聚十异戊二烯焦磷酸合成酶而使大肠杆菌生产CoQ<,10>,从而为构建高产CoQ<,10>的大肠杆菌基因工程并将其运用于工业发酵奠定了基础.
- 范怡刘欣毅陈国豪张惠展
- 关键词：微生物大肠杆菌辅酶
- 文献传递
- 弱氧化葡糖杆菌ddsA基因在大肠杆菌不同宿主菌中的表达被引量：16
- 2002年
- 泛醌 (辅酶Q)在生物体氧化呼吸链中作为重要的质子和电子传递物质。聚十异戊烯焦磷酸合成酶催化辅酶Q10 的侧链的生物合成。为了获得高产辅酶Q10 的菌株 ,将选择了 10种不同大肠杆菌宿主菌用于弱氧化葡糖杆菌的聚十异戊烯焦磷酸合成酶基因ddsA的表达 ,通过产物分析证实该基因能在大肠杆菌中表达出有活性的聚十异戊烯焦磷酸合成酶 ,使大肠杆菌合成了辅酶Q10 。此外 ,还发现在EscherichiacoliHB10 1这一菌株中 ,ddsA的表达使辅酶Q10 的产量略超过了在野生型中占主导地位的辅酶Q8的产量。该结果证明了利用大肠杆菌大规模发酵生产辅酶Q10 的可能性。
- 范怡刘欣毅陈国豪张惠展
- 关键词：大肠杆菌宿主菌辅酶Q10
- 重组人源性Mn-SOD的摇瓶培养及纯化条件优化
- 正常生命过程中产生的超氧阴离子自由基是维持生命所必需的,当其浓度过高时,对机体会造成损害.因此超氧化物歧化酶作为其特异清除剂,在生物体的生命活动中具有重要意义.近年来专家注意到存在于线粒体中的Mn-SOD较Cu,Zn-S...
- 殷铭俊丁盼刘欣毅袁勤生
- 关键词：摇瓶培养分子生物学
- 文献传递
