刘文强
- 作品数：9 被引量：12H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 山羊角膜缘干细胞荧光蛋白(Venus)细胞株的建立及角膜上皮植片构建被引量：1
- 2010年
- 角膜缘干细胞是角膜上皮更新与修复的来源,角膜上皮受损严重常会导致角膜盲。尽管近几年通过角膜缘干细胞移植术(LSCT)治愈角膜上皮受损的临床应用已被推广,但是对于角膜缘干细胞移植受损机体后的修复机理并不明确。为了实现角膜缘干细胞移植后的活体追踪,使用G418筛选标记有Venus荧光蛋白的角膜缘干细胞株(GLSC-V),并以其为种子细胞接种于去上皮羊膜上,体外培养21d构建成荧光角膜上皮植片。荧光倒置显微镜下观察GLSC-V的细胞质和细胞核均有绿色荧光表达,在体外培养荧光至少持续3个月。免疫荧光检测GLSC-V细胞P63、Integrinβ1均呈阳性表达,对GLSC-V细胞及未转染的GLSCs进行半定量RT-PCR检测显示,两组细胞皆未表达终末分化角膜上皮细胞基因k3、k12,GLSC-V中p63及pcna较未转染组细胞略上调,venus强表达。经HE染色观察构建的人工角膜组织由5～6层上皮细胞组成,组织中上表皮细胞个数少、体积大且呈扁平状;基底部细胞密集、体积小且成立方状。经免疫荧光检测仅组织基底部最基层细胞表达P63,上表皮细胞不表达。该人工角膜与正常角膜上皮组织结构特性相似,可用于移植,为研究角膜缘干细胞修复严重受损角膜上皮机理奠定基础。
- 殷吉庆刘文强刘超赵贵民张翊华刘维帅华进联窦忠英雷安民
- 关键词：角膜缘干细胞角膜缘干细胞移植术
- 牛卵母细胞第一次减数分裂比第二次减数分裂对Cyclin B1表达量上升更敏感
- 卵子成熟过程中非整倍体的形成概率很高，因此了解减数分裂过程中的调控机制非常重要。细胞周期蛋白B在卵母细胞减数分裂的调控中起到重要作用。Cyclin B合成和降解的动态变化决定减数分裂的主要事件。本试验通过超表达Cycli...
- 刘文强雷安民
- 关键词：细胞周期蛋白B1成熟促进因子减数分裂牛卵母细胞
- 文献传递
- 密闭气袋在牛卵母细胞体外成熟培养中的应用被引量：3
- 2011年
- 通过简易避光密闭气袋在人体呼出的气相环境下(CO2浓度约5%,O2浓度约15%),利用生化培养箱进行牛卵母细胞的体外成熟培养。结果显示,牛卵母细胞在密闭气袋中培养与对照组(正常培养)相比成熟率(74.79%比71.69%,P>0.05)、孤雌激活后卵裂率(83.07%比81.39%,P>0.05)和囊胚发育率上(26.75%比22.87%,P>0.05)均无显著差异,但是密闭气袋培养各项数据均略高于对照组。本试验验证了该技术的方便性和有效性,为此技术在生产实践中的推广应用提供依据。
- 赵贵民吴苏君刘文强井勇杨文琳高志敏雷安民
- 关键词：卵母细胞体外成熟低氧
- 一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法
- 本发明公开了一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法，包括以下步骤：A1.卵母细胞的收集；A2.密闭气袋的制备及卵母细胞的体外成熟培养；A3.卵母细胞的孤雌激活及体外培养：在体外成熟培养22～24h挑选排出第一极体的成熟卵母细...
- 雷安民赵贵民吴苏君刘文强井勇杨文琳高志敏
- 文献传递
- 牛Nanog基因真核表达载体构建及有效干扰序列筛选被引量：1
- 2008年
- 【目的】构建牛Nanog基因的真核表达载体pVenus-Nanog,筛选对其有效的干扰序列。【方法】以含有牛Nanog基因的PMD-18T-Nanog重组质粒为模板,经PCR扩增目的片段,将其克隆到真核表达载体pVenus上,酶切及测序鉴定正确后命名为pVenus-Nanog。将pVenus-Nanog用脂质体瞬时转染牛皮肤成纤维细胞,用荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blotting分别检测Nanog的表达情况。针对牛Nanog基因的CDS区设计并合成3对干扰序列,分别命名为S1、S2、S3及阴性对照N.C.,用脂质体共转染pVenus-Nanog和siRNA于成纤维细胞,用半定量RT-PCR分析干扰效率。【结果】酶切分析与测序结果表明重组载体pVenus-Nanog构建成功,荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blotting结果显示其能够在牛成纤维细胞中高效表达。脂质体共转染pVenus-Nanog和siRNA后,半定量RT-PCR结果显示S1效果最好,干扰效率达75%,S2和S3分别为20%和70%。【结论】成功构建了牛Nanog真核表达载体pVenus-Nanog,且获高效表达。通过脂质体共转染法筛选出了牛Nanog基因的有效干扰序列,为研究该基因在胚胎干细胞及早期胚胎中维持多能性调控网络中的作用机制奠定了基础。
- 云彦郑喜邦刘文强窦忠英雷安民
- 关键词：NANOG基因真核表达RNAI
- Cyclin B1降解在调控牛卵母细胞完成减数分裂的作用研究
- 为了研究减数分裂中卵母细胞进入分裂后期并完成分裂的分子调控机制,通过超表达全长(Cyclin B1)和删除D-box的非降解型细胞周期蛋白B1(D87 Cyclin B1)研究细胞周期蛋白B1降解在推动牛卵母细胞完成两次...
- 刘文强
- 关键词：细胞周期蛋白B1APC/CMPF减数分裂卵母细胞
- 文献传递
