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牛孤雌胚胎发育过程中泛素定位与线粒体分布的相关性被引量：2: 2013年; 【目的】研究泛素(Ub)在牛孤雌胚胎发育过程中的表达定位及与荧光标记线粒体分布的关联性。【方法】将人工合成Ub基因插入真核表达载体pVenus的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒pVenus-Ub,采用脂质体2000介导重组质粒pVenus-Ub转染Hela细胞,经荧光显微镜观察和PCR检测,探讨重组质粒pVenus-Ub在Hela细胞中的表达情况;用体外转录试剂盒将pVenus-Ub转录为cRNA并注射牛卵母细胞,选择成熟卵母细胞并将其经离子霉素孤雌激活后,在荧光显微镜下观察Ub的表达和定位情况;同时,用JC-1荧光染料对牛卵母细胞线粒体进行染色,观察线粒体的分布,探讨Ub定位与线粒体分布的相关性。【结果】重组载体pVenus-Ub能在Hela细胞中表达;Ub蛋白在牛体外成熟卵母细胞及孤雌发育过程中均有表达,分布于整个胞质中,并在皮质及核区分布较集中;成熟卵母细胞及早期孤雌胚胎中Ub蛋白与线粒体共定位。【结论】成功建立了Ub基因的真核表达体系及孤雌胚胎表达体系,且在牛孤雌胚胎发育过程中Ub的定位及与线粒体的分布相互关联。; 马苗苗李伟井勇杨文琳雷安民; 关键词：泛素体外转录显微注射牛卵母细胞孤雌激活

猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立被引量：9: 2010年; 【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。; 郭抗抗邓力井勇张彦明王晶钰宁蓬勃; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗反转录-聚合酶链式反应

密闭气袋在牛卵母细胞体外成熟培养中的应用被引量：3: 2011年; 通过简易避光密闭气袋在人体呼出的气相环境下(CO2浓度约5%,O2浓度约15%),利用生化培养箱进行牛卵母细胞的体外成熟培养。结果显示,牛卵母细胞在密闭气袋中培养与对照组(正常培养)相比成熟率(74.79%比71.69%,P>0.05)、孤雌激活后卵裂率(83.07%比81.39%,P>0.05)和囊胚发育率上(26.75%比22.87%,P>0.05)均无显著差异,但是密闭气袋培养各项数据均略高于对照组。本试验验证了该技术的方便性和有效性,为此技术在生产实践中的推广应用提供依据。; 赵贵民吴苏君刘文强井勇杨文琳高志敏雷安民; 关键词：卵母细胞体外成熟低氧

一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法: 本发明公开了一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法，包括以下步骤：A1.卵母细胞的收集；A2.密闭气袋的制备及卵母细胞的体外成熟培养；A3.卵母细胞的孤雌激活及体外培养：在体外成熟培养22～24h挑选排出第一极体的成熟卵母细...; 雷安民赵贵民吴苏君刘文强井勇杨文琳高志敏; 文献传递

Cdh1基因在牛卵母细胞GVBD中的功能研究: 在哺乳动物卵母细胞减数分裂GV期阻滞和减数分裂恢复过程中，MPF（CDK1-Cyclin B1）活性的变化起着关键性作用。有报道表明Cdh1基因在小鼠卵母细胞GV期阻滞过程中发挥重要的作用，APCCdh1通过降解Cycl...; 井勇; 关键词：CDH1 GVBD 卵母细胞 ROSCOVITINE

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井勇