于申业
- 作品数：72 被引量：146H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库的构建及筛选被引量：1
- 2008年
- 目的获取伪旋毛虫(Trichinella pseudospiralis)肌幼虫时期抗原性基因。方法利用λZAP载体构建伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库;以感染伪旋毛虫60天后的猪血清为抗体探针,对伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫学筛选,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析。结果构建的伪旋毛虫cDNA表达文库的库容量为0.55×106pfu,重组率为95.6%,扩增后文库滴度为1.2×1010pfu/mL。从2.0×105个重组噬菌体筛选获得阳性克隆27个。序列分析结果表明这27个阳性克隆共编码7种cDNA分子,其编码的类似蛋白分别为伪旋毛虫Tp21kDa蛋白、伪旋毛虫Tp28kDa蛋白、蛋白酶体激活因子亚单位(Proteasome activator subunit)类蛋白、Nudix水解酶(Nudix hydrolyase)类蛋白、凝集因子(Condensin)类蛋白、尿嘧啶糖基化酶(uracil glycosylase)类蛋白和一个未知蛋白。结论获得两个反应原性较强且高拷贝的抗原基因,其分别编码Tp21kDa蛋白及蛋白酶体激活因子亚单位。
- 吴秀萍赫荣华高丽芳付宝权王学林R. Blaga邓洪宽于申业P. Boireau王峰刘明远
- 关键词：肌幼虫CDNA表达文库
- 鸡传染性支气管炎病毒TA03分离株的鉴定与S1基因的克隆和序列分析
- 本实验对山东省泰安地区某疑似鸡传染性支气管炎病例,无菌采集气管、肺脏、肾脏等组织,接种SPF鸡胚分离培养病原体.经病毒形态观察、血凝特性试验、动物回归试验等证实,我们分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV);病毒中和试验...
- 杨杰华刁有祥于申业刘霞孟凡磊
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因基因克隆
- 文献传递
- 结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1
- 2015年
- 以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。
- 崔莹莹宋宁宁党光辉曹俊李华芳于申业刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达单克隆抗体
- 猪胸膜肺炎放线杆菌脂多糖的制备及对小鼠的免疫保护作用被引量：3
- 2006年
- 采用酚-水法制备血清3型、4型、5型、7型和8型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)脂多糖(LPS),以该多糖免疫小鼠,进行同源攻毒保护试验,结果LPS在20μg/只的免疫剂量下可对小鼠产生较强的保护作用,用同血清型菌株对免疫后的小鼠攻毒,仅表现肺脏轻微出血,无死亡,而对照组未经免疫直接攻毒的小白鼠全部死亡,肺脏严重出血;小鼠免疫后第2d就可以检测到抗体,并且抗体水平上升较快,到第6d抗体达到最高水平,之后,抗体水平开始下降,但下降幅度不大,可持续2个月左右;交叉保护试验结果表明血清3型LPS对血清5型和7型APP,血清4型LPS对血清5型和7型APP没有保护作用,免疫后的小鼠攻毒仍表现多数死亡;血清3型LPS对血清4型和8型APP有交叉保护作用,血清4型LPS对血清3型和8型APP有交叉保护作用,血清5型、7型、8型LPS对5个血清型的APP都有交叉保护作用,免疫后的小鼠攻毒无死亡,仅表现肺脏有不同程度的出血。上述结果表明LPS是APP的主要免疫保护性抗原之一,该研究为APP亚单位疫苗的研制及应用提供了理论依据。
- 刘霞刁有祥禚宝山于申业鞠洪涛
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌脂多糖免疫原性
- 鸡传染性支气管炎变异株(793/B)N基因的克隆与序列分析
- 本研究根据Genbank已经发表的传染性支气管炎病毒(IBV)N全基因组序列设计引物,对IBV 793/B分离毒株N基因进行克隆与序列分析.结果表明,IBV 793/B的N基因由1229bp组成,与Genbank已发表的...
- 孟凡磊刁有祥王辉刘方娜王妮于申业刘霞
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒N基因基因克隆
- 文献传递
- 减毒沙门氏菌及其应用
- 本发明公开了减毒沙门氏菌及其应用。本发明应用基因敲除技术，删除掉沙门氏菌(Salmonella pullorum)的体内定植基因和主要毒力基因，获得了双基因缺失的减毒沙门氏菌SM091-DED株，其微生物保藏号是：CGM...
- 刘思国刘慧芳王秀梅于申业王牟平司薇杨志
- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒变异株的分离及其S1基因序列分析被引量：27
- 2005年
- 本实验对山东省泰安地区某蛋鸡场产蛋下降鸡群发生的临床症状疑似鸡传染性支气管炎病例,无菌采集气管、肺脏、肾脏等组织,接种SPF鸡胚,经病毒形态观察、血凝特性试验、动物回归试验等证实,我们鉴定到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV);病毒中和试验表明,该病毒为一株变异毒株,使用国外针对IBV793/B血清型发表的血清型特异性引物经RTPCR方法获得了该毒株的免疫原基因S1基因,初步确定该传染性支气管炎病毒变异毒株为793/B血清型。
- 杨杰华刁有祥于申业刘霞姜世金刘悦竹陈庆普
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因
- 旋毛虫虫体蛋白对肝癌细胞H7402的抑制作用被引量：14
- 2007年
- 目的:研究旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的抑制作用,确认其对肝癌细胞的抗肿瘤活性。方法:通过体内、体外培养获得旋毛虫成虫与新生幼虫的混合物,采用匀浆、离心方法制备旋毛虫虫体蛋白,紫外分光光度计检测蛋白浓度。分别设0.035、0.070、0.140 mg/ml与H7402细胞作用为实验组,并设虫体蛋白对正常肝细胞HL-7702细胞作用为对照组,采用MTT检测细胞增殖能力,划痕实验、侵袭实验检测旋毛虫虫体蛋白对H7402的迁移及侵袭能力的影响,采用TUNEL法和流式细胞术分析肿瘤细胞凋亡和细胞周期。结果:成功制备了旋毛虫虫体蛋白。0.035、0.070、0.140 mg/ml旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞增殖的抑制率分别为(22.40±13.80)%、(29.45±16.80)%、(39.38±17.80)%。TUNEL实验和流式细胞术可观察到旋毛虫虫体蛋白诱导H7402凋亡,其凋亡率为(39.07±0.90)%,细胞周期阻滞于S期。划痕和侵袭的实验表明旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞迁徙能力有抑制作用,对其侵袭的抑制率为(63.79±13.71)%。结论:旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,可能是一个有潜在应用价值的抗肝癌生物制剂。
- 王学林杨世杰吴秀萍于申业叶春艳邓洪宽魏征仁王卫芳王芯蕊刘明远
- 关键词：旋毛虫抗肿瘤抗增殖
- 猪繁殖呼吸综合征与附红细胞体病混合感染的诊疗报告
- 2005年
- 王辉于申业刘霞刘方娜孟凡磊王妮张伟
- 关键词：猪繁殖呼吸综合征附红细胞体病诊疗报告木乃伊死胎弱仔
- 鸡传染性支气管炎病毒793/B TA03株S1基因的克隆与原核表达
- 本研究根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)793/B S1基因序列,设计和合成两对引物,以TA03株IBV病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出S1蛋白基因的两个部分重叠片段,分别将其插入表达性载体pGEX-6P-1中,...
- 于申业刁有祥臧大鹏刘方娜王辉孟凡磊王妮
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因基因克隆原核表达
- 文献传递
