丁晓丽
- 作品数：22 被引量：31H指数：3
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白酶消化结合荧光定量PCR法和杂交法检测重组人胰岛素中E.coli细胞DNA残留量的比较被引量：1
- 2017年
- 目的:利用蛋白酶K消化结合荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)技术,检测重组人胰岛素原料中E.coli细胞DNA残留量,并进行初步的方法学验证,与狭缝杂交-放射自显影方法进行比较。方法:通过蛋白酶K消化样品,利用核酸纯化提取试剂盒提取DNA,然后采用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,再根据标准曲线对样品中DNA残留量进行分析。对方法进行线性、范围、准确度和精密度的验证,对重组人胰岛素中DNA残留量进行测定。结果:该方法检测E.coli细胞DNA残留的最低定量限度为0.03 pg·μL^(-1),DNA含量在0.03~2.25×10~3 pg·μL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数在0.98以上;该方法检测不同加标样品回收率较接近,3次测定的相对标准偏差均小于20%;该方法检测各批次重组人胰岛素的DNA残留量均小于10 ng·剂量^(-1),而狭缝杂交——放射自显影法50 pg(标准DNA)均未出现条带。结论:蛋白酶消化结合试剂盒洗脱解决了残留DNA检测中样品前处理的难题,定量PCR检测可能代替杂交法,快速、准确、灵敏地对重组人胰岛素原料中E.coli细胞残余DNA进行定量测定,为将来荧光定量PCR检测药物中宿主DNA残留方法标准化奠定了基础。
- 王杰吕萍张慧李晶丁晓丽魏云林梁成罡
- 关键词：重组人胰岛素
- 精蛋白锌胰岛素注射液中硫酸鱼精蛋白含量测定的方法研究被引量：6
- 2012年
- 目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定精蛋白锌胰岛素注射液中硫酸鱼精蛋白的含量。方法:采用Grace Vydac C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以A:乙腈-0.2 mol.L-1硫酸钠溶液(4∶96);B:乙腈-水(50∶50)为流动相进行梯度洗脱(0～8 min时B0%→70%,8～15 min时B70%,15～16 min时B70%→0%,16～30 min时B0%);流速1.0 mL.min-1;柱温40℃;检测波长:214 nm。结果:硫酸鱼精蛋白线性范围为0.05～2.5 mg.mL-1(r=0.9994),方法平均回收率(n=9)为99.7%。结论:本方法准确、简便、快速,重复性好,可用于精蛋白锌胰岛素注射液中硫酸鱼精蛋白的含量测定。
- 丁晓丽宋敏张慧梁成罡
- 关键词：高效液相色谱精蛋白氯化锌胰岛素缓释制剂
- 三硝基苯磺酸法测定聚乙二醇化重组人生长激素的平均修饰度被引量：2
- 2011年
- 目的:建立测定三种不同结构聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)平均修饰度的三硝基苯磺酸法(TNBS)。方法:采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定PEG-rhGH的分子量,求得理论平均修饰度。既而通过正交试验、游离PEG干扰等方法学考察,建立TNBS法。结果:从质谱法可知PEG-rhGH的理论修饰度为10%,TNBS法测得三种PEG-rhGH的修饰度分别为为10%、12%及10%,与理论值相符。结论:TNBS操作简单,不需要专门的仪器,可作为测定PEG-rhGH平均修饰度的方法。
- 李晶王永利杨化新梁成罡程速远丁晓丽吕萍
- 重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂(rExendin-4)原液质量研究被引量：1
- 2015年
- 目的:对重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂(r Exendin-4)原液进行质量研究。方法:采用紫外光谱、肽图、飞行时间质谱及N端氨基酸序列分析对r Exendin-4原液进行结构确证;采用凯氏定氮法、BCA法及氨基酸分析法测定r Exendin-4原液的蛋白含量,建立高效液相色谱法测定原液纯度,通过纯度校正计算原液中r Exendin-4含量。结果:确证了r Exendin-4原液的结构,测得原液含量为2.21 mg·m L-1。结论:本研究所用的r Exendin-4原液结构正确、测定含量结果准确可靠,可作为HPLC外标法含量测定用对照品,用于r Exendin-4同质对照品的赋值,也可作为理化对照品用于r Exendin-4工艺中间体的评价和原液放行检验。
- 丁晓丽张金亮张慧梁成罡
- 关键词：结构确证纯度测定
- 第二代WHO 重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1) 国际对照品的国际协作标定
- 2022年
- 英国国家生物制品检定所(NIBSC)组织国际协作标定以建立世界卫生组织(WHO)第二代重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的国际对照品。标定分2个阶段,中国食品药品检定研究院参加了第1阶段的标定工作。以初级校准物(PS01)为对照品,采用高效液相色谱法进行试验,以标准曲线法对IGF-1待标品的含量进行计算。结果显示,本实验室系统适用性试验结果均符合要求,平行3次试验结果(分别为每安瓿32.874、33.099及33.042μg)均被采纳,平均值为每安瓿33.005μg,与待标品(19/166)的最终赋值(每安瓿33.0μg)基本一致。目前IGF-1待标品(19/166)已作为第二代IGF-1国际对照品在NIBSC网站进行公布使用。本研究对我国国家对照品的建立与标定有良好的示范及借鉴意义。
- 丁晓丽李懿张慧李晶梁成罡
- 关键词：高效液相色谱法
- 超高效液相色谱-串联四极杆-轨道阱高分辨质谱法测定甘精胰岛素单链前体残留量被引量：1
- 2023年
- 目的 胰岛素单链前体是胰岛素生产工艺中的相关杂质,关系到该类产品的安全性和有效性,有必要建立准确度好、灵敏度高的检测胰岛素单链前体残留量的液质方法。本研究以甘精胰岛素单链前体为例,为胰岛素及其类似物单链前体液质联用方法开发提供参考与借鉴。方法 色谱柱ACQUITY UPLC peptide CSH C18(2.1 mm×150 mm, 130?,1.7μm);流动相A为体积分数0.1%甲酸-水溶液,流动相B为0.1%甲酸-乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温60℃,检测波长214 nm。Orbitrap Exploris 480液质联用仪,ESI+电喷雾电离源,数据检测模式为平行反应监测(PRM),定量离子对1 155.6/1 151.5。结果 甘精胰岛素单链前体在1~100 ng·mL^(-1)内峰面积与浓度有良好的线性关系(r=0.999 2),方法平均回收率为97%(n=9)。结论 经方法学验证,本法能准确测定甘精胰岛素中单链前体胰岛素前体的残留量,方法精密度、重复性、准确度和耐用性良好。
- 胡馨月丁晓丽秦希月孙悦李懿李晶梁成罡
- 关键词：残留量高分辨质谱
- 脑蛋白水解物注射液中钙镁元素含量的测定
- 2012年
- 目的测定脑蛋白水解物注射液中钙镁元素的含量。方法采用原子吸收分光光度法测定脑蛋白水解物注射液中钙镁元素的含量。结果国内31家企业生产的脑蛋白水解物注射液中镁钙元素含量差别较大,Ca/Mg也有较大差异。结论为研究该品种的质量提供了有用的数据。
- 吕萍丁晓丽梁成罡杨化新
- 关键词：脑蛋白水解物注射液火焰原子吸收分光光度法
- 人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况
- 2022年
- 本文介绍了2020年版(三部)人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况,包括标准起草过程的基本原则和技术考量,并就关键项目在中国药典、欧洲药典和美国药典的协调性方面进行了分析,旨在为本领域内相关研发和质控人员更好地理解和使用人胰岛素及其类似物药典标准提供参考。
- 梁成罡张慧丁晓丽李晶吕萍李湛军
- 关键词：人胰岛素人胰岛素类似物
- 主成分自身对照法测定重组人胰岛素中杂质B_(30)脱苏氨酸胰岛素的含量
- 2015年
- 目的:建立主成分自身对照法测定重组人胰岛素中杂质B30脱苏氨酸胰岛素的含量。方法:采用外标法,分别测定重组人胰岛素与脱苏氨酸胰岛素的相对保留时间;测定重组人胰岛素和B30脱苏氨酸胰岛素的线性方程,以斜率计算杂质B30脱苏氨酸胰岛素相对于主成分重组人胰岛素的校正因子;通过方法学考察,表明采用主成分自身对照法测定重组人胰岛素中杂质B30脱苏氨酸胰岛素的含量可行。结果:测得杂质B30脱苏氨酸胰岛素相对于主成分重组人胰岛素的相对保留时间为1.07,校正因子为1.04,可以采用不加校正因子的主成分自身对照法测定其含量。结论:用主成分自身对照法测定重组人胰岛素中B30脱苏氨酸胰岛素含量的方法可行。
- 丁晓丽葛玉鹏李晶张慧梁成罡
- 关键词：重组人胰岛素
- 利用高分辨质谱技术综合解析胰岛素类制品复杂二硫键结构
- 2024年
- 二硫键的正确配对维持了多肽和蛋白类药物的正确折叠方式和高级结构的形成,对产品的质量控制至关重要。为了确保二硫键正确配对,二硫键分析是多肽和蛋白质药物表征中必不可少的重要部分。质谱分析技术可用于二硫键分析,然而,胰岛素及其类似物中存在两对没有酶切位点的二硫键,常规的碰撞诱导解离(CID)和高能诱导裂解(HCD)无法实现该复杂二硫键的准确定位。本研究通过3种方法综合定位该复杂二硫键,包括酶切加关键肽段源内碎裂(ISD)法、酶切加部分还原烷基化法、完整蛋白源内碎裂和电子转移解离(ETD)裂解法,并且考察了门冬胰岛素、赖脯胰岛素和甘精胰岛素的适用性,为胰岛素及其类似物二硫键连接方式的质量控制提供了新途径,也为含该类复杂二硫键多肽或蛋白类生物制品的二硫键定位提供借鉴。
- 胡馨月丁晓丽孙悦张慧李晶梁成罡
- 关键词：二硫键定位
