马耀文
- 作品数：14 被引量：58H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院更多>>
- 发文基金：卫生部科技专项基金国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 利用PCR技术分析微卫星DNA进行小鼠的遗传监测被引量：12
- 1995年
- 建立用ＰＣＲ技术检测小鼠微卫星ＤＮＡ多态性的方法，并用该法对九种近交系小鼠不同染色体上的五个微卫星ＤＮＡ位点进行了分析，发现微卫星ＤＮＡ普遍存在，且多态性极高（６７．１％）表明该法是极有希望的一种在基因水平上进行小鼠遗传鉴测的又一手段，将发展为我国实验动物遗传检测的一种常规方法，也是我们构建高分辨率遗传图谱进行其它实验动物及人类遗传研究的极佳途径。
- 曾苹张连峰程振华孙涛马耀文蔡有余
- 关键词：PCR技术微卫星DNA小鼠
- 腺病毒载体介导的人类B7.1基因修饰的肿瘤细胞疫苗被引量：5
- 1998年
- 为了证明腺病毒载体可做为将Ｂ７基因导入肿瘤细胞的替代载体，达到提高肿瘤细胞疫苗效应的目的，且不存在逆转录病毒载体的局限性，用同源重组的方法构建了表达人类Ｂ７．１ｃＤＮＡ的重组人类５型腺病毒（ＡｄＢ７．１），并用它感染小鼠乳腺癌细胞系ＥＭＦ６和大鼠神经胶质瘤细胞系Ｃ６，检测Ｂ７．１基因在感染过的肿瘤细胞中的表达；用ＡｄＢ７．１感染过的肿瘤细胞给同基因宿主（ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和Ｗｉｓｔａｒ大鼠）接种，观察它们在体内的致瘤性及对肿瘤的防治作用；用５１Ｃｒ－释放法对用各种肿瘤细胞免疫后３周的动物脾淋巴细胞进行ＣＴＬｓ杀伤活性的测定，来检测其细胞免疫活性。结果的Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明：ＡｄＢ７．１感染过的肿瘤细胞表达了Ｂ７．１基因。接种／侵袭实验和ＣＴＬｓ杀伤活性的测定实验表明，与野生型肿瘤细胞相比，表达Ｂ７．１的肿瘤细胞在动物体内的致瘤性降低（Ｐ＜０．０１），能诱导针对野生型肿瘤的高水平的系统性免疫应答和细胞毒Ｔ细胞活性，对肿瘤也有一定的防治作用。本研究的结论是，腺病毒载体可代替逆转录病毒载体将Ｂ７．１基因导入肿瘤细胞，提高肿瘤细胞疫苗的抗肿瘤作用。它操作简单，感染效率高。
- 刘雪丰张连峰鞠丽梅曾苹马耀文李万波蔡有余
- 关键词：腺病毒载体肿瘤细胞疫苗基因修饰
- 小鼠小卫星DNA探针的克隆
- 1996年
- 本文以ｐＵＣ１９为载体构建ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的部分基因文库，随机引物法标计人的小卫星探针３３．６和３３．１５，进行两轮菌落原位杂交，确定了８个阳性克隆，齿用阳性克隆ＤＮＡ片断作探针，进行ＤＮＡ指纹分析，初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性和特异性，可作为小鼠的小卫星ＤＮＡ探针。
- 程振华张连峰赵铭曾苹鞠丽梅马耀文蔡有余
- 关键词：BALB/C小鼠DNA探针基因文库阳性克隆DNA片断随机引物
- 猴免疫缺陷病毒(SIV)感染恒河猴血液学和血液生化的动态变化
- 2012年
- 目的探讨SIVmac239感染中国恒河猴的血液学和血清生物化学的变化,研究艾滋病的发生机制。方法 20只恒河猴感染SIVmac239后分别在感染前和感染后2、6、9、12、15和18个月在猴空腹状态用盐酸氯胺酮麻醉下静脉釆血。抗凝血用全自动血液细胞分析仪检测血液常规,血清用全自动生化分析仪检测生化指标。结果SIV感染猴红白细胞计数呈逐渐的减少。淋巴细胞计数有较明显减/增的波动。血清酶类ALT和AST没有明显的上升,但在15月时均有所下降P<0.05～P<0.01。LDH持续降低,原因未明。CK则逐月上升,至12月时达高峰,后又有所下降。血尿素氮逐月上升,并在6～18个月时P<0.01。总蛋白量上升,白蛋白逐月降低,球蛋白升高,白蛋白/球蛋白比率倒置。SIV感染猴2个月后总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均呈上升,至12月时略有下降,但到18月又上升。血糖(GLU)在SIV感染后逐月上升,后期上升更为明显,这可能与胰岛的损害有关。结论 SIVmac239感染猴后,通过SIV侵入相关的器官病变和体液调节失衡导致血液学和血液生物化学产生异常,从而提供有关猴艾滋病的一些基础资料,这将对研究人的艾滋病也许有所帮助。
- 孙丽华卢耀增吴小闲马耀文孙井江潘菊华王阶黄世敬
- IL-2-TNFα融合基因与B7.1基因联合修饰的肿瘤的疫苗作用
- 2000年
- 目的 改进基因修饰的肿瘤细胞疫苗的效力。方法 在小鼠乳腺癌细胞系EMF6 和一个已被含有IL - 2和TNFα融合基因的逆转录病毒载体XdF转染的EMF6 亚系 (T2 -EMF6)中表达B7 1基因。结果 免疫 /侵袭实验表明 ,与单基因转导的肿瘤细胞相比 ,IL - 2-TNFα/B7 1共同修饰的肿瘤细胞具有较低的致瘤性和较优的疫苗效力 (P <0 0 5)。在各种肿瘤细胞的免疫接种后三周 ,进行混合淋巴细胞培养实验和51 Cr释放实验来检测动物的细胞免疫活性 ,IL - 2 -TNFα和B7 1共同作用诱导了比其中的任意一个单独作用更强的抗肿瘤应答 (比IL - 2 -TNFα高 2 5% ,比B7 1高 2 0 % )。结论 IL - 2 -TNFα和B7 1协同作用可提高他们所修饰的肿瘤细胞的疫苗效力。
- 刘雪丰张连峰张铭马耀文蔡有余
- 关键词：B7.1IL-2TNF疫苗效力融合基因
- 三聚氰胺和三聚氰胺类似物对Wistar大鼠经口染毒8周的毒性及预后
- 2012年
- 目的观察连续8周ig给予三聚氰胺和三聚氰胺类似物对大鼠的毒性反应及预后情况。方法选择3周龄离乳的Wistar大鼠分别ig给予三聚氰胺300 mg·kg-1、三聚氰胺300 mg·kg-1+腺嘌呤100 mg·kg-1+氧嗪酸钾150 mg·kg-1和三聚氰胺300 mg·kg-1+三聚氰酸75 mg·kg-1,连续8周,观察大鼠的一般体征,分别于给药2,4,6,8周及恢复期1,2,3,6,14个月时进行血液学、血生化、尿常规、尿生化、组织病理学和肾B超的检测。饲养2年后,观察各组大鼠的存活时间及自发病变的情况。结果①单纯连续8周给予三聚氰胺300 mg·kg-1,对大鼠的生长发育和肝肾功能无明显损害,未形成结石,但引起肾小管上皮细胞变性和睾丸萎缩;停止给药1个月时,睾丸萎缩得到恢复;停止给药3个月时,肾小管上皮细胞变性得到恢复。连续观察到2年,生长发育和自发病变(纤维瘤)等情况与对照组比较无显著性差异。②三聚氰胺300 mg·kg-1+三聚氰酸75 mg·kg-1或三聚氰胺300 mg·kg-1+腺嘌呤100 mg·kg-1可以造成大鼠贫血、营养不良和生长迟缓,肾功能严重损害并形成肾结石;使大鼠的心、睾丸、脾及膀胱等脏器发生病理改变。停止给予受试物后大鼠的肾损伤有所恢复,但未恢复到正常水平。从停止给予受试物1～13个月,上述2组的留观大鼠全部死亡,死亡原因为肾功能衰竭,与对照组相比大鼠寿命明显缩短(P<0.01)。结论①三聚氰胺可以造成大鼠的肾损伤,但不形成肾结石,且可以恢复,对大鼠的生存时间无明显影响。②三聚氰胺+三聚氰酸或三聚氰胺+腺嘌呤可以造成幼年大鼠肝肾功能的严重损害并形成肾结石,且不能完全恢复,可显著增加成年大鼠的死亡率,其死因是肾功能衰竭。
- 高虹徐艳峰何君贺晓玉马耀文秦超高洁秦川
- 关键词：三聚氰胺肾结石肾功能衰竭
- 三聚氰胺等物质给予幼年恒河猴的毒性试验
- 2012年
- 目的观察三聚氰胺及其同系物给予动物后,导致肾脏损伤、形成结石的过程,及肾脏损伤的恢复过程。方法选择6月龄恒河猴6只,雌雄各半,随机分为3组,2只/组,分别为T1(140 mg/kg三聚氰胺和14 mg/kg三聚氰酸),T2(140 mg/kg三聚氰胺和50mg/kg腺嘌呤)和T3组(140mg/kg三聚氰胺)。连续70 d口服受试物,观察动物的一般状态,分别于不同时间点进行血液学、血生化、尿常规和肾脏B超的检测;并连续观察18个月,观察动物的生长发育情况。结果 1.各剂量组动物在给予受试物8周后所有动物肾脏中均出现多个结石;停止给予受试物后,所有动物结石数量和大小均呈下降趋势,至停止给予受试物16个月后,全部动物肾脏均未检测出结石。2.各剂量组,血清中β2微球蛋白(β2-MG)和尿酸(UA)等指标随着给药时间的延长而有所增高,但在正常范围内。在动物的恢复期,此两项指标的数值明显下降。结论 1.单纯三聚氰胺(相当于人体使用量48 mg/kg.w.d)不能造成恒河猴肾脏功能的明显损害,可形成肾结石。2.在三聚氰酸或腺嘌呤存在的情况下,三聚氰胺可以造成恒河猴肾功能指标β2-MG和UA在正常范围内升高,并可在肾脏形成结石;。3.经过16个月的恢复所有动物结石无法检出,其中三聚氰胺组动物恢复最快。
- 高虹何君贺晓玉马耀文孙井江李洋高洁秦川
- 关键词：三聚氰胺三聚氰酸腺嘌呤恒河猴
- PPARα转基因小鼠在药物评价中的应用研究
- 目的 研究过氧化物酶体增殖激活受体α激动剂药物在PPARα转基因小鼠体内对肝肾功能、血脂指标的影响,以评价该模型能否能应用于药效学研究中.方法 选择27只6周龄的PPARα小鼠给予高脂饲料喂养一个月,随机分成3组,9只/...
- 尉明晓秦超陈威马耀文赵显莉高虹
- 关键词：PPARΑ激动剂药效学
- 逆转录病毒介导的TNFa基因在胶质瘤细胞系（C6）中的表达及对肿瘤细胞恶性生长的影响
- 1996年
- 利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ构建了含有完整编码ＴＮＦｃＤＮＡ的重组逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将重组质粒导入病毒包装细胞ｐＡ３１７，经Ｇ４１８筛选培养获得抗性克隆，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度，获得滴度为５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ的细胞克隆。利用病毒上清液感染大鼠胶质瘤细胞系Ｃ６，得到Ｇ４１８抗性克隆细胞Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，经ＰＣＲ检测，ＴＮＦｃＤＮＡ完整地整合在细胞基因组中。测定Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞上清中ＴＮＦ的生物活性，结果显示ＴＮＦ有相对稳定的表达（４８～１８０Ｕ／ｍｌ１０６ｃｅｌｌｓ／２４ｈ）。实验还显示经ＴＮＦ基因转导的Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞生长速度较之亲本肿瘤细胞Ｃ６明显下降，基因修饰后的肿瘤细胞在Ｗｉｓｔａｒ大鼠体内形成肿瘤的能力明显受到抑制。进一步用超离心法浓缩病毒对胶质瘤移植模型进行了体内治疗研究。
- 李永宁任祖渊王维钧马文斌王任直苏长保张连峰冯颖鞠丽梅马耀文蔡有余
- 关键词：肿瘤细胞胶质瘤细胞恶性逆转录病毒介导滴度
- 小小卫星DNA阳性克隆的鉴定及DNA指纹分析被引量：8
- 1996年
- 提取四种近交系小鼠的肝脏ＤＮＡ，分别用ＨｉｎｆＩ和Ｈａｅ Ⅲ酶切。用３３．１５和本课题组克隆的小鼠小卫星阳性克隆ＤＮＡ片断作探针，用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ随机引物标记，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，获得了理想的小鼠ＤＮＡ指纹图谱。初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性，可作为小鼠基因组小卫星探针，用于实验动物的遗传监测、基因连锁分析和小鼠遗传图谱的研究。
- 程振华张连峰秦川孙涛张小为蒋虹赵铭马耀文曾苹鞠丽梅刘亮蔡有余
- 关键词：^32PSOUTHERN杂交阳性克隆DNA片断
