陈雄伟 作品数:10 被引量:44 H指数:3 供职机构: 南开大学生命科学学院分子生物学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 理学 更多>>
特异切割点突变癌基因转录物的核酶设计与克隆 被引量:1 1994年 按“锤头结构”模型设计、合成,并筛选到了针对活化癌基因T24-ras第十二位密码子G→T点突变的核酶克隆。在镁离子存在条件下,该核酶能选择定点切割T24-ras转录物而对正常C-Ha-ras转录物不起任何破坏作用;在接近生理环境及C-Ha-ras与T24-ras mRNA同时存在条件下,该核酶仍能有效选择性切割突变基因产物。这为利用核酶技术治疗因基因突变引起的机体病变提供了现实的可能性。 赵西林 孙宝勇 陈雄伟 陈雅文 陈德风 陈文杰 宋丹英 宋增璇关键词:核酶 体外转录 基因治疗 癌基因 针对点突变基因的核酶设计与应用研究 赵西林 孙宝勇 陈德风 陈雄伟 陈雅文 李青 刘戈 董元 该成果利用部分双链直接连接法使模板磷酸化、模板与载体的连接、聚合、再连接等多步克隆步骤在同一体系、同一反应管内一步完成。并在核酶序列内部成功地引入了一个BglⅠ切点,不仅不影响核酶活性,而且有助于提高锤头结构的稳定性,特...关键词:关键词:核酶 基因突变 生物活性 无性系 核糖核酸 点突变ras癌基因全cDNA真核表达重组体的构建及诱导NIH3T3细胞转化的研究 1996年 将活化癌基因T24-ras的全cDNA序列正向插入真核载体pMAMneo,构建成重组质粒pMAMneo-T24-ras.将该质粒转染NIH3T3细胞,通过药物筛选,建成细胞系3T3(T24).Southern杂交证明外源T24-ras基因已整合于受体细胞染色体中.3T3(T24)细胞表现出形态学方面的明显变化:具失去接触抑制能力,且在裸鼠体内致瘤等恶性行为.本文构建的T24-ras基因真核表达重组体和建立的转化细胞系可用于肿瘤的诊断、预防、治疗及抗肿瘤药物的筛选、评估等研究. 董元舒 孙丙刚 杨其伟 陈雅文 李青 陈雄伟 陈德风关键词:RAS癌基因 DNA转染 鲤、鲫肌肉水解氨基酸和游离氨基酸的初步研究 被引量:30 1988年 本文是对天津地区的两种重要的经济淡水鱼鲤、鲫肌肉水解氨基酸和游离氨基测定,并初步分析比较的结果。 张銮光 吕宪禹 鲍建国 陈雄伟关键词:肌肉 游离氨基酸 淡水鱼 杂交捕获抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的体外翻译 1995年 体外转录载体pSP72—C12和pSP72—C1.4分别经XbaⅠ和XhoⅠ酶切线性化后,用SP6RNA聚合酶与T7RNA聚合酶进行体外转录得到编码人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的mRNA全序列(3.7kb)及与其5’端编码区的起始密码子AUG上游区域互补的反义RNA片段(1.4kb)。等摩尔数的正、反义RNA通过酚相乳浊杂交技术进行分子杂交。在网织红细胞裂解物体外翻译系统中,正义RNA能正常地翻译出蛋白质;而反义RNA与正义RNA杂交可阻断翻译的进行。 刘戈 赵西林 陈雄伟 陈雅文 李青 陈德风关键词:体外转录 基因 核酶设计、合成与克隆的一种新方法 被引量:7 1993年 介绍了一种设计、合成与克隆人造核酶的新方法.通过在“锤头结构”模型中非保守性区域引入 Bgl I 切点,不仅维持了核酶切割活性所必需的二级结构,而且为核酶克隆的鉴定提供了极为方便的手段.另外还通过在核酶模板两端引入限制性内切酶半切点,一步直接将核酶模板连接、聚合、克隆到体外转录载体上,大大简化了以往核酶克隆的繁琐操作,省时、省力,克隆效率也较高. 赵西林 陈雄伟 陈雅文 刘戈 孙宝勇 陈德风关键词:核酶 分子设计 克隆 NKC-1中草药合剂对T24-ras活化癌基因转化细胞的选择性杀伤及抗肿瘤作用的研究 1995年 根据我国传统中医药理论及现代分子生物学知识,设计并配制了具有抗肿瘤效应的复方中草药合剂NKC-1.体外实验表明:NKC-1能够选择性杀死ras癌基因诱导的转化细胞,在较低浓度条件下对转化细胞的恶性行为有一定的抑制和逆转作用。急性毒性实验结果显示:当注射剂量为0.8ml/只昆明鼠时,仍无严重毒性。裸鼠体内实验表明:NKC-1具有良好的抑制肿瘤效应。 陈雅文 陈雄伟 李青 杨其伟 孙丙刚 赵西林 陈德风关键词:复方中草药 RAS癌基因 抗肿瘤作用 真核表达载体pSMG的构建 1994年 本文介绍了一种新型真核表达载体的构建过程。原核质粒载体pSP72经亚克隆去除部分单酶切点后,在其上定向插入真核选择标记gpt基因片段,获得中间载体pSP72A-gpt。将来自表达载体pMAM-neo质粒上约2.4kb的真核表达启动、剪接与终止区(包括RSV和MMTV-LTR)克隆到pSP72A-gpt上,获得了一种新型真核表达载体pSMG(pSP72A-gpt-MMTV)。该载体在真核细胞中可受激素诱导而高效表达插入到其多克隆位点上的外源基因,并能与neo(G418)、DHFR、ADA等为选择标记的真核表达载体配合使用,将两种以上的外源基因导入同一真核细胞,为研究多基因间的相互作用提供了一种良好手段。 赵西林 刘戈 陈雅文 陈雄伟 孙丙刚 周伟 杨其伟 李青 陈德风关键词:质粒载体 细胞转染 基因表达 真核 正、反义聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因体外转录载体的构建 被引量:5 1991年 聚腺苷二磷酸核精基化作用[Poly(ADP-ribosyl)atlon]与染色质结构和功能的调节、癌变与细胞转化、发育与细胞分化等许多重要生命活动密切相关。1987年,Alkhatib和Chen等在Smulson主持的实验室首次把人的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,E.c.2.4.2.30]基因克隆出来,并且对其进行了序列分析、蛋白结构推测及其在染色体上的定位研究,在此基础上。 陈德风 陈雄伟 赵西林 刘强 陈雅文关键词:CDNA 基因 体外转录