金晶
- 作品数：9 被引量：8H指数：2
- 供职机构：沈阳药科大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生政治法律更多>>
- 一种原代肺上皮细胞体外培养方法被引量：3
- 2014年
- 目的:建立一种操作简便、重复性好的体外培养BALB/c小鼠原代肺上皮细胞(AEC)的方法,探究不同发育阶段小鼠AEC中柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)表达量的变化,及其对小鼠原代AEC贴壁的作用。方法:手术获取小鼠肺组织,机械法剪碎肺组织,PBS缓冲液清洗肺组织块数次去血,联合使用链霉蛋白酶和胶原酶Ⅰ消化、分离肺组织块获得单细胞悬液,差速离心逐步清除其他种类的细胞,达到纯化AEC的作用。细胞在Ⅰ型鼠尾胶原蛋白包被过的细胞板中培养,光学显微镜下观察不同发育阶段AEC贴壁、生长状态;免疫荧光法鉴定AEC,检测AEC中CAR的表达量。结果:体外获得不同发育阶段BALB/c小鼠的原代AEC;胎鼠、幼鼠AEC贴壁并开始增殖所需时间较成体鼠短;胎鼠及幼鼠AEC中CAR的表达量明显较成体鼠高。结论:建立了稳定可重复的分离、纯化、体外培养小鼠原代AEC的方法,证明了AEC中的CAR可以促进原代AEC贴壁,为完善原代细胞培养方法提供了科学依据。
- 白东梅李玉霞王薇贾天野吴逊金晶凌婧怡杨丹刘岩峰陈惠鹏
- 关键词：原代细胞培养肺上皮细胞细胞贴壁
- 脾虚证的肠道菌群16S rDNA-RFLP评价方法
- 首次将16S rDNA-RFLP方法运用于脾虚证的评价和中药的药效评价,建立了大鼠粪便肠道菌群16S rDNA-RFLP分析方法;确定了健康和脾虚模型大鼠肠道菌群的16S rDNA-RFLP图谱(Hae Ⅲ和HinfⅠ)...
- 彭颖韩苗苗金晶杨静玉吴春福李晓波
- 关键词：脾虚证肠道菌群药效评价中医药现代化
- 文献传递
- 利用Bio-BglBrick方法表达紫杉醇生物合成酶被引量：1
- 2014年
- 目的:进行紫杉醇药物生物合成前五步催化酶二磷酸盐合酶(GGPPS)、紫杉二烯合酶(TS)、紫杉二烯5α羟化酶(THY5α)、紫杉二烯5α-O-乙酰转移酶(TAT)和紫杉烷10β羟化酶(TDH)基因在大肠杆菌异源生物合成途径的组建及串联,实现单个表达及串联表达,并试图通过连续生物催化获得紫杉醇中间体紫衫二烯。方法:依据合成生物学中Brick基因组装方法,通过对载体pET30a的酶切位点进行定向改造,设计独特的BglⅡ/BamHⅠ和XbaⅠ/SpeⅠ串联表达盒,在大肠杆菌BM Rosetta(DE3)中表达产物。结果:设计多基因表达盒,实现紫杉醇药物生物合成前五步催化酶的单个表达,GGPPS和TS以及THY5α、TAT和TDH的串联表达。结论:利用BglBrick/BioBrick基因组装方法,可以实现紫杉醇生物合成催化酶的快速组装及后续表达。
- 金晶王微邵妤陈章凌焱李玉霞宋永波刘刚陈惠鹏
- 关键词：紫杉醇生物合成异源表达
- 美国医疗支付药品福利管理模式的研究被引量：3
- 2018年
- 本文研究美国药品福利管理模式(PBM)的建立背景、市场现状以及职能,通过文献检索和文献分析的方法,系统介绍药品福利管理模式下的处方集制定、处方报销管理、药品使用评价、鼓励仿制药替代和大宗药品采购职能,认为美国以商业保险为主,政府保险为辅,实行管理型医疗,其药品福利管理模式经过近50年的发展已形成较为完善的运行机制和服务职能。运用药品福利管理模式能够高效、准确地控制药费报销过程,控制医疗费用支出,这些发展经验值得我国借鉴。
- 熊佳美金晶金晶杨悦
- 关键词：谈判采购
- HSA长效融合蛋白及其快速组装及分离纯化方法
- 本发明涉及一种HSA长效融合蛋白及其快速组装及分离纯化方法。该融合蛋白包含两个多肽区，第一区是由促胰岛素分泌肽Exendin-4的重复序列组成，第二区是由人血清白蛋白HSA的序列组成，第一区的C-末端与第二区的N-末端通...
- 刘刚邵妤陈惠鹏金晶王微曲国龙阚乃鹏谭俊杰朱晨
- 文献传递
- 加拿大创新药物数据保护的十年--对问题、限制和时间的重新评估
- 2017年
- 加拿大要求创新药的制药企业提交未公开的临床或其他数据,作为批准新药上市的条件,但由于新药的研发需要相当大的努力和投资,加拿大于2006年修订了1995年颁布的《数据保护条例》,从而在一定程度上弥补了以前的《知识产权法》对新药临床数据没有相关保护的漏洞。虽然这些规定旨在有效履行加拿大国际条约中关于创新的义务,但对加拿大实施《数据保护条例》的第一个10年的回顾表明,加拿大卫生部和加拿大法院对创新药数据保护范围的狭隘理解,违反了《数据保护条例》的意图。2016年是加拿大实施《数据保护条例》的10周年,本文论证了进一步推进加拿大数据保护制度的必要性,从而持续促进药物研发,维护企业和患者的共同利益,提高加拿大经济和社会福利水平。
- Megan KendallDeclan Hamill金晶
- 关键词：数据保护创新药物
- 可用于TNT检测的新的生物传感元件topAp4的发现被引量：1
- 2015年
- 目的在大肠杆菌基因组中筛选可用于TNT检测的基因传感元件。方法利用随机酶切方法不完全酶切大肠杆菌K-12 MG1655基因组,构建基因组启动子文库,通过多轮筛选法获得可感应TNT的文库元件。通过数据库分析,并在灵敏度、特异性、起效时间各方面对新的传感元件在TNT诱导下的启动活性进行考察,进一步确证了文库元件中发挥作用的功能序列。结果和结论成功构建了大肠杆菌K-12 MG1655基因组启动子文库,并从中筛选得到了一个可感应TNT的文库元件,经过进一步分析确证了其发挥功能的序列top Ap4,并在灵敏度、特异性、起效时间上都表现出较好的启动活性。上述研究工作发现了top Ap4对TNT的感应作用,并验证了其具有较好的启动活性,为TNT检测生物传感器的构建打下了良好的基础。
- 阚乃鹏谭俊杰王微凌婧怡曲国龙邵妤金晶刘刚陈惠鹏
- 关键词：合成生物学启动子三硝基甲苯
- 利用BglBrick方法进行HSA/Exendin-4长效融合蛋白的快速组装
- 2014年
- 目的:通过合成生物学的BglBrick方法快速构建不同种类HSA/Exendin-4长效融合蛋白,为进行各HSA/Exendin-4融合蛋白生物学活性的筛选比较奠定基础。方法:选用酵母表达载体pPICZαA质粒,构建pPICZαA-E4和pPICZαA-HSA两种基础Brick表达载体,运用BglBrick方法,实现了不同数目Exendin-4分子在HSA的不同末端的快速组装。将构建出的10种HSA/Exendin-4融合蛋白,转入毕赤酵母菌KM71H中,用甲醇诱导目的蛋白的表达。结果:用BglBrick方法构建的HSA/Exendin-4融合蛋白在毕赤酵母中都成功诱导表达出相应的目的蛋白。结论:利用BglBrick方法能够实现HSA长效融合蛋白的快速组装。
- 邵妤曲国龙金晶王微谭俊杰阚乃鹏李玉霞刘刚陈惠鹏
- 关键词：EXENDIN-4合成生物学
- 利用合成的基因回路实现细胞水平上尿酸稳态控制的实验研究
- 2014年
- 目的:利用合成生物学方法构建尿酸介导的基因回路,在细胞水平上研究回路对尿酸稳态的调控作用。方法:以耐辐射异常球菌R1基因组中转录抑制物基因hucR及其结合位点基因hucO为基础,化学合成具有转录抑制功能的基因mUTs及其结合位点的8串联结构hucO8,构建基因回路;转染HeLa细胞,通过检测分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的表达量来验证回路的作用原理和对尿酸的感应作用;在此基础上,用优化的黄曲霉菌尿酸氧化酶(Uox)基因smUox替换SEAP基因,转染HeLa细胞,通过检测转染前后培养基中尿酸浓度的变化,验证回路对尿酸的调节作用。结果:分别构建了优化的转录抑制物表达载体pcDNA3.1/V5-mUTs、报告基因表达载体pSEAP-hucO8、优化的黄曲霉菌Uox表达载体phucO8-smUox、pBudCE4.1-smUox,双向共表达载体pBudCE4.1-SEAP-mUTs、pBudCE4.1-mUTs-smUox;单独转染pBudCE4.1-SEAP-mUTs或共转染pSEAP-hucO8和pcDNA3.1/V5-mUTs,通过检测培养基中SEAP的表达量,证明双载体及单载体回路对尿酸的感应作用;用smUox替换SAEP基因后,通过检测转染48 h后培养基中尿酸含量的变化,证明双载体及单载体基因回路均具有一定的尿酸调节能力。结论:在细胞水平上,构建的双载体基因回路(phucO8-smUox、pcDNA3.1/V5-mUTs)和单载体基因回路(pBudCE4.1-mUTs-smUox)均可实现对尿酸的感应及调控作用,在一定范围内通过增加mUTs与hucO8的摩尔比,可以改变回路对尿酸的调控范围及调节程度。
- 曲国龙邵妤谭俊杰陈章金晶凌焱李玉霞刘刚陈惠鹏
- 关键词：合成生物学尿酸共表达
