郭莲娣
- 作品数：16 被引量：33H指数：4
- 供职机构：西南民族大学更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金四川省杰出青年学科带头人基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 药学专业《人体解剖生理学》课程的教学方法探索与实践被引量：5
- 2016年
- 本文根据人体解剖生理学课程内容及特点,结合药学专业人才培养目标,探讨我校药学专业人体解剖生理学课程如何在教学过程中把知识、能力和素质的培养渗透到每节课的教学工作中,实现教学目标,更好地帮助学生进行药学相关的职业生涯规划。
- 郭莲娣李佳川仇丽颖
- 关键词：人体解剖生理学药学专业教学改革
- 非小细胞肺癌细胞A549对紫杉醇耐药机理研究被引量：1
- 2016年
- 目的利用非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol,研究其对紫杉醇耐药性的分子机理.方法通过长时间低浓度的紫杉醇处理A549细胞的方法获得其耐药细胞株A549/taxol,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR观察其凋亡基因的表达情况,并通过不同siRNA处理细胞进行基因沉默,研究其在不同遗传背景下对紫杉醇的耐受情况.结果发现非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol的基因表达紊乱,表现为ING5的高表达抑制了凋亡基因Bcl-2的表达水平,而Bcl-2是紫杉醇诱导细胞凋亡所必需的.结论以上结果初探了A549对紫杉醇耐药性的机制,为探寻紫杉醇化疗新策略提供了新的思路.
- 郭莲娣王丹李佳川王鑫王小军
- 关键词：非小细胞肺癌紫杉醇BCL-2
- 人骨肉瘤细胞DNA双链断裂修复γH2AX分析
- 2014年
- 目的:探讨人骨肉瘤细胞U2OS中利用γH2AX分析评价细胞DNA双链断裂(DNA Double-Strand Breaks,DSBs)损伤反应动力学过程。方法:用免疫荧光和蛋白质印迹法结合DNA损伤应答通路抑制剂及siRNA基因沉默技术分析U2OS细胞在遭受DSBs损伤处理前后γH2AX foci和其表达水平的动力学变化,并通过流式细胞术定量分析γH2AX的变化情况。结果:在细胞未经损伤处理时,U2OS细胞仅有极少量的γH2AX foci,而在遭受电离辐射(ionizing radiation,IR)后,γH2AX在损伤部位的募集和表达水平快速升高,1h内达峰值,该过程可被ATM抑制剂和磷酸肌醇激酶3相关激酶抑制剂Wortmannin抑制;而后随着时间的推移,γH2AX表达又逐渐消退,反映了细胞DSBs损伤应答的动力学过程。利用小分子RNA敲除参与DSBs损伤修复的关键因子Mre11表达的细胞及对照siRNA转染细胞,IR处理4h后γH2AX foci数分别为31.68±4.59和21.33±2.08,处理8h分别为21.85±2.49和12.02±4.13,处理12h分别为19.65±2.34和8.51±2.17),处理16h分别为18.05±1.75和6.94±3.19,各时间点Mre11沉默组细胞的γH2AX foci数显著多于对照siRNA处理组细胞,P=0.013,反映了延长的DSBs损伤修复动力学(减缓的γH2AX foci消退)。经γH2AX和PI双染色流式细胞术发现,不同细胞分期γH2AX阳性率差异有统计学意义,G1期细胞在IR处理前为(1.34±0.28)%,处理后为(20.25±3.56)%,P<0.001;S期细胞在IR处理前为(1.26±0.19)%,处理后为(79.48±5.72)%,P<0.001;G2/M期细胞在IR处理前为(8.84±1.25)%处理后为(29.49±4.36)%,P<0.001。结论:γH2AX分析可有效分析U2OS细胞的DSBs损伤应答反应动力学,U2OS细胞具有低γH2AX背景、易于传代培养等优点,可作为研究细胞DSBs损伤应答反应的模式细胞。
- 任来峰郭莲娣石新丽李莎
- 关键词：DNA损伤DNA双链断裂基因组稳定性电离辐射
- 卵巢透明细胞腺癌的DNA损伤应答反应被引量：5
- 2012年
- 目的研究卵巢透明细胞腺癌的发生与DNA损伤应答之间的关系。方法对14例新鲜卵巢组织标本(正常卵巢组织3例,低分化卵巢肿瘤6例,透明细胞腺癌5例),采用X射线(2Gy)照射制备组织DNA损伤模型,分别对其进行组织冷冻切片,采用免疫荧光和Western免疫印迹方法检测DNA损伤应答反应。结果在X射线照射前,与正常卵巢组织细胞相比,透明细胞腺癌中存在大量内源性DNA损伤,X射线照射后组蛋白2A变体(H2AX)表现过度磷酸化,而损伤修复能力正常。p53结合蛋白1(53BP1)的激活与磷酸化的H2AX(γH2AX)不能共定位。结论卵巢透明细胞腺癌中DNA损伤异常激活,提示DNA损伤应答信号转导网络存在缺陷。
- 贾月改杨月明左斌郭莲娣楼江燕
- 关键词：透明细胞腺癌DNA损伤
- ATM激酶对卵巢肿瘤发展过程影响的研究被引量：3
- 2011年
- 目的研究肿瘤的发展过程和DNA损伤应答之间的关系。方法选取临床卵巢标本39例,其中正常卵巢组织3例,交界性卵巢肿瘤6例,高分化卵巢肿瘤6例,中分化卵巢肿瘤7例和低分化卵巢肿瘤17例,分别对其进行组织分离细胞培养以及冷冻切片,采用免疫荧光和Western免疫印迹等技术检测ATM通路相关蛋白表达。结果在卵巢肿瘤的发展过程中,ATM通路的蛋白激酶在损伤时被激活,其激活的程度随着肿瘤由良性至恶性的转变而逐渐增加,即内源性损伤相应增多。在体外培养的卵巢癌细胞株OVCAR-8/TR和SKOV3中加入ATM抑制剂和造成DNA损伤的拓扑异构酶Ⅰ抑制剂——喜树碱(CPT)。其中使用ATM抑制剂的细胞凋亡率增高,ATM通路的下游激酶γ-H2AX免疫荧光染色减弱;而CPT处理的细胞凋亡率也增高,但-γH2AX免疫荧光染色增强。结论在卵巢肿瘤由良性到恶性的转变过程中,ATM通路起到了阻碍肿瘤的发展和增加基因组稳定性的作用。
- 杨月明张明楼江燕张舒郭莲娣马宏伟
- 关键词：DNA损伤卵巢肿瘤
- DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能及其在人卵巢癌中的突变研究被引量：2
- 2016年
- 目的在细胞水平上分析新发现的DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能,确定WDR70基因在人卵巢癌中的突变发生情况,以验证该基因的功能丢失是否与卵巢癌关联。方法在人细胞中用siRNA干扰WDR70基因表达,或用慢病毒和质粒过表达WDR70的野生型和突变体,通过免疫印迹和免疫荧光等方法研究该基因在DNA损伤后的亚细胞定位和DNA损伤信号通路中的作用;此外,抽提1例正常卵巢组织和16例卵巢癌标本的mRNA进行半定量RT-PCR扩增,对这些标本中的WDR70基因进行测序分析。结果 WDR70基因沉默和过表达其突变体导致同源重组功能蛋白——DNA复制蛋白A(RPA32)磷酸化修饰水平降低和重组酶——重组蛋白A(RAD51)向DNA损伤位点招募的能力减低;WDR70的功能障碍还导致染色体的断裂增多;同时,卵巢癌样本中发现多例WDR70突变型别。结论在体外系统中,WDR70参与DNA损伤修复过程,沉默或过表达其突变体将导致同源重组修复缺陷和染色体结构的不稳定;在卵巢癌基因组中,WDR70基因频繁出现突变,可能导致相应的DNA修复缺陷和基因组不稳定性的发生。因此,WDR70是一个潜在的卵巢癌抗癌基因。
- 郭莲娣王丹杨帆梁语珈杨雪琴覃意扬任来峰曾鸣唐子执王小军王思刘聪楼江燕陈杰
- 关键词：卵巢癌
- HCV NS3/4A基因外来表达对Huh7细胞凋亡及DNA损伤应答的影响被引量：8
- 2014年
- NS3/4A是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码的丝氨酸蛋白酶复合体,是病毒完成自身复制周期的必要成分。该研究为调查NS3/4A对细胞凋亡及DNA损伤应答(DNA-damage response,DDR)的影响,在Huh7细胞中表达了外来NS3/4A基因。通过DAPI染色和MTT分析显示,外来表达NS3/4A显著诱导细胞的凋亡和增殖活力的下降。免疫荧光检测结果表明,NS3/4A可明显增加细胞内源性DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)损伤(γH2AX灶点升高);而进一步用X-ray诱导细胞外源性DSBs损伤后,外来表达NS3/4A的细胞显示出明显的DSBs损伤修复缺陷(减缓的γH2AX灶点消退)。免疫印迹法检测结果显示,NS3/4A可抑制喜树碱(Camptothecin,CPT)诱导的ATM第1 981位丝氨酸的磷酸化(pATM1 981)。以上结果提示,NS3/4A基因外来表达可引起细胞DNA损伤,抑制ATM介导的DSBs损伤修复信号,诱导细胞凋亡通路的活化。
- 任来峰唐子执吴惠文许宁刘刚曾鸣郭莲娣
- 关键词：DNA损伤丙型肝炎病毒DNA双链断裂非结构蛋白3
- 调控DNA复制或修复的方法
- 本发明公开了调控DNA复制或修复的方法，涉及分子生物学技术领域，解决目前不清楚如何调控DNA复制或损伤应答的技术问题，包括Spd1基因敲除或dGTP/dNTP丰度的代谢信号调控DNA复制或修复的方法。本发明利用可以转运外...
- 郭莲娣李英杰
- 泛素结合酶RAD6多克隆抗体的制备及初步鉴定
- 2016年
- 目的为了给RAD6参与的泛素化修饰相关领域的研究提供参考,在大肠杆菌中原核细胞表达GST-RAD6重组蛋白并通过免疫家兔制备其多克隆抗体。方法以c DNA文库作为模板,构建重组载体p ET41a-GST-RAD6,转化至大肠杆菌表达菌株BL21中,诱导表达并纯化GSTRAD6融合蛋白,免疫家兔后制备其多克隆抗体,通过Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定其特异性及效价。结果成功构建了p ET41aGST-RAD6重组载体,得到了高纯度的重组蛋白,Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定显示获得的血清抗体效价高,特异性强。结论成功制备的高效价兔抗人RAD6血清抗体可为RAD6调控的泛素化修饰相关领域的研究奠定基础。
- 郭莲娣王鑫王小军
- 关键词：重组蛋白多克隆抗体
- 下调SMU1表达对细胞增殖和DNA双链断裂损伤反应的影响被引量：2
- 2014年
- SMU1是一个与细胞基因组复制和RNA剪切过程相关的新基因。该研究为进一步调查SMU1对细胞增殖及DNA双链断裂(DNA double-strand breaks,DNA DSBs)损伤应答的影响,设计合成针对SMU1基因的小分子siRNA,并与对照siRNA(scramble)分别转染HEK 293T或U2OS细胞。通过免疫印迹(Western blot)检测证实,siSMU1转染细胞中SMU1的表达显著下降,采用台盼蓝染色细胞计数检测显示,SMU1表达下调显著降低细胞增殖能力。免疫荧光和免疫印迹法检测结果表明,SMU1表达下调显著增加细胞内源性DSBs损伤(γH2AX foci和蛋白水平均升高);而进一步用X-ray处理细胞造成外源性DSBs损伤后,SMU1沉默细胞显示出延长的DSBs损伤修复动力学(减缓的γH2AX foci和蛋白水平消退)。以上结果提示,SMU1在细胞DSBs损伤修复反应中扮演重要角色,积极参与细胞基因组完整性的维持。
- 任来峰郭莲娣石新丽李莎
- 关键词：DNA损伤RNA干扰DNA双链断裂基因组稳定性
